RECK在盆腔臟器脫垂患者子宮主韌帶和陰道前壁中表達意義的研究

趙 欣 劉巖松

（沈陽市婦嬰醫院，遼寧 沈陽 110011）

盆底功能障礙性疾病（PFD）是各種病因導致盆底支持薄弱，進而盆腔臟器移位引發盆腔器官的位置和功能異常[1]。PFD的發病機制尚不十分清楚，目前研究認為，PFD的發生與盆底支持組織結構功能完整性的破壞密切相關，細胞外基質（ECM）是盆底結締組織的主要成分，RECK[2]是近年來發現的新型基質金屬蛋白酶（MMP）抑制劑，可保護ECM免于被降解，從而保證ECM的完整性。本實驗通過測定人類盆腔臟器脫垂患者主韌帶、陰道壁中RECK的表達情況，旨在探討盆腔臟器脫垂發生發展的分子生物學機制，對POP發病機制的基礎研究具有一定意義。

1 資料與方法

1.1 資料來源：收集沈陽市婦嬰醫院婦科2014年1月至2016年6月診斷為盆腔臟器脫垂并行陰式子宮切除術+全盆底重建術患者的主韌帶及陰道前壁組織。術中切取主韌帶0.5 cm及陰道前壁1 cm，實驗組及對照組所有患者均已婚，有陰道分娩史，無其他結締組織疾病，術后病理回報無雌激素相關性疾病。診斷標準依據1996年國際尿控協會公布的POP-Q分度標準，分為Ⅰ度～Ⅳ度，共40例，患者年齡為52～74歲，其中絕經前6例，絕經后34例。另取非脫垂組10例（同期相應年齡因宮頸癌行廣泛子宮切除術患者的主韌帶及陰道前壁組織）做對照，其中絕經前4例，絕經后6例。POP組與對照組在年齡、產次、體質量指數等方面差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 方法：采集兩組患者主韌帶及陰道前壁組織，甲醛固定，石蠟包埋。用SP免疫組化染色法進行染色，將切片進行脫蠟處理，采用胃酶抗原修復法進行抗原修復，進行DAB顯色及蘇木素復染，并采用PBS代替一抗作為陰性對照品進行相關檢測。

1.3 免疫組化染色結果判定：RECK主要位于細胞質，出現淡黃色至棕黃色細胞為陽性細胞。以PBS代替一抗作為陰性對照。兩名病理醫師對切片染色情況分析，隨機選取5個具有代表意義的高倍視野（400倍），應用計算機圖像分析儀分析各組RECK陽性區平均灰度值。染色的強弱與灰度值成正比，陽性物質越高，染色越深，灰度值越大。

1.4 統計學方法：運用SPSS13.0統計軟件進行處理。計數資料以（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，進行t檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

RECK在主韌帶及陰道壁組織中的表達情況：RECK在盆底組織表達陽性呈黃色或棕黃色，主要位于細胞外基質。POP組和對照組盆底組織中均見RECK陽性表達，RECK在對照組的灰度值明顯高于Ⅱ度、Ⅲ度和Ⅳ度POP患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；III度和Ⅳ度患者中的灰度值明顯低于Ⅰ度和Ⅱ度者的灰度值，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組RECK蛋白表達的比較（±s）

表1 各組RECK蛋白表達的比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05；與I度相比，bP＜0.05；與II度相比，cP＜0.05

組別 主韌帶RECK平均灰度值陰道壁RECK平均灰度值對照組(n=10) 90.7±2.90 90.3±3.84 POP組(n=40)Ⅰ度 90.2±3.66 89.9±3.75Ⅱ度 86.4±3.44a 86.1±4.35aⅢ度 82.2±3.20abc 81.3±4.04abcⅣ度 81.9±3.06abc 80.2±2.66abc

3 討 論

盆腔器官脫垂是中老年婦女的常見病，從解剖結構上來說，女性盆腔是由肌肉、韌帶及骨盆所支撐，完整的結締組織是支撐和固定盆腔臟器于其解剖位置的重要因素，任何組織結構改變都可能導致POP的發生。

1998年Takahashi等[2]在v2Ki2ras轉染的NIH3T3細胞中發現RECK基因，其通過RAS信號通路，作用于細胞外基質，促進ECM降解，RAS同時釋放抑制劑，抑制RECK基因表達。MMP通過對細胞外基質的降解作用，可分解膠原使其含量減少，影響盆底結構的穩定性，促進PFD的發生和發展。RECK是近年來發現的新型基質金屬蛋白酶抑制劑[3-4]，細胞外基質是結締組織的主要成分，此成分的含量或結構發生改變都可引起組織彈性降低，導致盆底臟器脫垂。

本研究結果顯示，RECK在對照組及試驗組患者的主韌帶及陰道壁中均有表達，但對照組表達高于實驗組，而實驗組根據盆腔臟器脫垂程度不同，其RECK表達量也不同。RECK在盆腔臟器脫垂中的低表達說明其在此疾病的發生發展中起一定的作用，RECK表達的缺失可能是盆腔臟器脫垂發生機制之一。綜上所述，本實驗結果提示盆腔臟器脫垂患者主韌帶及陰道前壁中RECK表達下降，并與脫垂嚴重程度相關，盆底組織中RECK減少可能引起盆底結締組織支持能力減弱，最終導致POP發生發展的重要環節。但RECK在POP發生發展中的具體作用機制還不清楚，尚待進一步深入研究。

[1] Lin SY,Tee YT,Ng SC,et al.Changes in the extracellular matrix in the anterior vaginal of women with or without prolapse[J].Int Urogynecol J Pelvic Floor Dysfunct,2007,18(1):43-48.

[2] Takahashi C,Sheng Z,Horan TP,et al.Regulation of matrix metallop roteinase-9 and inhibition of tumor invasion by the membraneanchored glycoprotein RECK[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(22):13221-13226.

[3] Chen Y,Tseng SH.The potential of RECK inducers as antitumour agents for glioma[J].Anticancer Res,2012,32(20):2991-2998.

[4] Sakurai F,Nanjo Y,Okamoto S,et al.Up-regulation of RECK gene expression by small double stranded RNA targeting the promoter region[J].Cancer Gene Ther,2014,21(2):164-170.