RP-HPLC測(cè)定益腎降濁膠囊中淫羊藿苷的含量

趙宏峰 劉新瑞

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012）

益腎降濁膠囊為吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院應(yīng)用多年的醫(yī)院內(nèi)部制劑，批準(zhǔn)文號(hào)為吉藥制字Z20130290。益腎降濁膠囊全方由熟地、杜仲、淫羊藿、補(bǔ)骨脂等十二味中藥組成，具有健脾補(bǔ)腎，降逆清濁的功效，適用于慢性腎功能衰竭（脾腎氣虛證），證見：倦怠乏力，食少納呆，腰酸膝軟，惡心嘔吐，脘腹脹滿，便溏，口中黏膩，舌苔黃膩，脈沉細(xì)等。益腎降濁膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定了藥物的定性鑒別方法，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。原有標(biāo)準(zhǔn)已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)有國(guó)家法規(guī)及廣大病患對(duì)中成藥質(zhì)量可控性和應(yīng)用安全性的要求。本文建立了益腎降濁膠囊中主要藥物淫羊藿所含淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，采用高效液相法測(cè)定，并規(guī)定了制劑中淫羊藿苷的含量限度，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

日本島津LC-10ATVP高效液相色譜儀；日本島津SPD-10AVP紫外檢測(cè)器；7725i手動(dòng)進(jìn)樣器；美國(guó)科學(xué)系統(tǒng)公司SS420X型色譜工作站；日本島津AUW120D電子分析天平（十萬(wàn)分之一）。

益腎降濁膠囊（批號(hào)：150601，150602，150603），由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供。淫羊藿苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110737-201516，供含量測(cè)定用）。甲醇，乙腈均為色譜純，美國(guó)Fisher公司出品，水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：WondaCract ODS-2色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（30∶70）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；柱溫35 ℃。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備：淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷對(duì)照品0.1 mg的溶液，0.45 μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品20粒，傾出內(nèi)容物，混勻，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率150 W，頻率20 kHz）30 min，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，上清液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：分別精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液4、7、10、13、19 μL注入液相色譜儀，測(cè)定，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，淫羊藿苷在0.428～1.712 μg范圍內(nèi)，峰面積與淫羊藿苷量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為 Y=-48597.070+1102665.498X，相關(guān)系數(shù)r=0.9996。

2.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法檢測(cè)，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為1.96%，表明儀器系統(tǒng)精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10 μl，分別于放置0、3、6、9、12、15 h時(shí)進(jìn)樣，依法檢測(cè)，結(jié)果淫羊藿苷峰面積的RSD值為2.33%，表明供試品溶液在15 h內(nèi)能保持良好的穩(wěn)定性。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批次的益腎降濁膠囊（批號(hào)：150601）樣品，制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，計(jì)算淫羊藿苷含量，結(jié)果平均含量為0.73 mg/g，RSD值為0.76%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)：取同一批次的益腎降濁膠囊（批號(hào)：150601；淫羊藿苷含量為0.73 mg/g）樣品0.5 g，共計(jì)6份，精密稱定，分別精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液（3.69 mg/mL）1.0 mL，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為96.5%，RSD值為0.93%，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.9 陰性試驗(yàn)：取除去“淫羊藿”的處方，按完全相同的制備方法制備成陰性樣品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果色譜圖中，在淫羊藿苷對(duì)照品保留時(shí)間處無(wú)任何色譜峰，表明陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.10 樣品含量測(cè)定及含量限度的確定：按含量測(cè)定項(xiàng)下方法，測(cè)定了10批“益血合劑（無(wú)糖型）”中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果見表2。

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，10批益腎降濁膠囊中淫羊藿苷的平均含量為0.22毫克/粒，且均高于0.19毫克/粒。為有效保證制劑質(zhì)量，同時(shí)考慮原料藥材產(chǎn)地、加工及生產(chǎn)等因素的影響，限定本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計(jì)，不得少于0.19 mg。

表1 淫羊藿苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

實(shí)驗(yàn)中采用分光光度法[1-3]，取淫羊藿苷對(duì)照品溶液（0.1 mg/mL）適量，以溶劑為空白，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)繪制吸收曲線，結(jié)果淫羊藿苷在270 nm處有最大吸收，故確定本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。

綜上，本實(shí)驗(yàn)建立了益腎降濁膠囊中淫羊藿苷的含量測(cè)定方法，作為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的定量控制指標(biāo)，新標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格，更規(guī)范，增強(qiáng)了成品制劑的可控性，也進(jìn)一步保證了臨床用藥的安全和有效。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010年版一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010.

[2] 陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測(cè)定[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997.

[3] 苗明三.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.