HPLC測定半夏瀉心湯中不同劑量黃芩配伍前后黃芩苷的煎出量

梁惠珍，高明焱，王佳佳，馬晶晶

半夏瀉心湯出自張仲景《傷寒雜病論》，主治寒熱互結之痞證[1]。由半夏、黃連、黃芩、人參、干姜、炙甘草、大棗7 味藥組成，全方能通過辛開苦降以調脾胃氣機，又有培土生金之意[2]。臨床上主要用于治療胃腸動力障礙性疾病，如反流性食管炎、慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌等[3-4]。方中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效[5]，現代研究證實黃芩中的黃芩苷成分對于幽門螺桿菌相關性胃炎模型有顯著的改善作用[6]，可見黃芩含苷量的多少關系到該方在臨床上的療效。本研究采用高效液相色譜法，探討配伍中黃芩劑量的不同對半夏瀉心湯中黃芩苷煎出量的影響。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1260系列高效液相色譜儀，包括二元泵、在線脫氣機、VWD檢測器；KQ3200E超聲提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA/JA1004萬分之一電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；梅特勒AB135-S/FACT 電子分析天平（METTLER梅特勒集團）。

1.2 試藥

半夏、黃芩、黨參、黃連、炙甘草、干姜藥材購于山西維康堂中藥飲片有限公司，大棗為市售，由山西中醫藥大學中藥鑒定教研室裴香萍副教授鑒定為正品。黃芩苷對照品（含量測定用，批號：110715-201318）購自中國食品藥品檢定研究院，甲醇（4 L）為色譜純（迪馬科技有限公司），乙醇（500 mL）為分析純（天津市科密歐化學試劑有限公司），水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 黃芩單煎樣品的制備

稱取黃芩藥材90 g，加8倍量水，浸泡10 min，煎煮2次，每次30 min，濾過，收集濾液，濃縮，60℃低溫干燥，即得。

2.2 半夏瀉心湯復方合煎樣品（含9 g黃芩）的制備

稱取復方各藥材10倍量，按照黃芩單煎樣品的制備方法制備，即得。

2.3黃芩陰性樣品的制備

稱取缺黃芩的復方各藥材10倍量，按照黃芩單煎樣品的制備方法制備，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 對照品溶液的制備 取在60 ℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得[7]。

2.4.2 供試品溶液Ⅰ的制備 取黃芩單煎樣品0.3 g，精密稱定，置100 mL具塞三角瓶中，加70 %乙醇30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液置50 mL量瓶中，加70 %乙醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得[7]。

2.4.3 供試品溶液Ⅱ的制備 取半夏瀉心湯復方合煎樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ的制備方法制備，即得。

2.4.4 陰性供試品溶液的制備 取黃芩陰性樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ的制備方法制備，即得。

2.4.5 色譜條件與系統適用性試驗 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，甲醇-0.4 %磷酸水溶液(53∶47)為流動相，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為280 nm，理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2500[7]。

2.4.6 測定法 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液Ⅰ、供試品溶液Ⅱ和陰性供試品溶液各10 μL，采用高效液相色譜儀測定。計算，以每克黃芩原藥材提出的黃芩苷的量作為提取效率計算依據。結果陰性無干擾。

圖1 單煎和合煎樣品的HPLC圖

2.4.7 線性考察 精密吸取黃芩苷對照品溶液2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、15 μL，分別采用高效液相色譜儀測定其峰面積。以黃芩苷質量（μg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=5555.3X - 44.949，r = 0.9998，表明黃芩苷在0.125μg～0.941 μg線性關系良好。

2.4.8 精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μL，采用高效液相色譜儀測定峰面積，重復6次，結果RSD為0.91 %，表明儀器精密度良好。

2.4.9 穩定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、6、10、12 h采用高效液相色譜儀測定峰面積，結果供試品溶液Ⅰ和供試品溶液Ⅱ中黃芩苷峰面積的RSD分別為1.82 %和1.25 %，說明樣品在12 h內測定結果穩定。

2.4.10 重復性考察 取黃芩單煎樣品0.3 g，6份，再取半夏瀉心湯復方合煎樣品2.0 g，6份，精密稱定，分別按照供試品溶液Ⅰ制備方法進行制備，測定峰面積，計算黃芩苷煎出量。結果黃芩單煎樣品和半夏瀉心湯復方合煎樣品中黃芩苷的平均煎出量（相當于黃芩原藥材中的量）分別為48.79 mg·g-1和42.93 mg·g-1，RSD分別為1.62 % 和2.26 %，表明本方法重復性良好。

2.4.11 加樣回收率考察[8-9]取黃芩單煎樣品0.15 g，6份，再取半夏瀉心湯復方合煎樣品1.0 g，6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品20 mg，按照供試品溶液Ⅰ制備方法進行制備，測定峰面積，計算回收率。結果見表1、2。

表1 黃芩單煎樣品回收率測定結果

表2 半夏瀉心湯復方合煎樣品回收率測定結果

2.4.12樣品測定 取黃芩單煎樣品0.3 g和半夏瀉心湯復方合煎樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ制備方法進行制備，測定峰面積，計算黃芩苷煎出量。結果見表3。

表3 不同劑量黃芩配伍前后黃芩苷煎出量的測定

3 討論

3.1 本試驗主要是研究半夏瀉心湯在傳統煎煮法中黃芩配伍前后黃芩苷煎出量的變化，故沒有對提取溶劑進行選擇，直接采用水提取獲得樣品。

3.2 本試驗對黃芩苷進行紫外掃描，最大吸收波長出現在210 nm和280 nm，結合相關文獻[10]和藥典[7]記載，選擇280 nm作為測定波長。

3.3 試驗結果表明，半夏瀉心湯配伍后，黃芩苷的煎出量有所減少，可能是由于黃芩苷與黃連中的小檗堿發生了酸堿反應。而且，隨著黃芩劑量的減少，黃芩苷的煎出量逐漸降低。黃芩苷屬于黃芩中的有效成分，在半夏瀉心湯中能發揮瀉熱消痞的作用，但又有一定的副作用，可引起胃部不適、腹瀉、血壓下降等。故黃芩的劑量要把握準確，既能最大程度發揮其有效作用，又能避免副作用的發生。目前臨床上應用半夏瀉心湯方時，黃芩的常用劑量為9 g，效果很好。

[1]蔡巧玲, 王瑩, 崔波, 等.半夏瀉心湯及不同配伍對大鼠肝微粒體中黃芩苷和黃芩素代謝的影響[J].中藥材,2012, 35(8):1286-1290.

[2]黃少君, 范 良, 王寶愛, 等.半夏瀉心湯加減配合拔罐治療胃食管反流性咳嗽[J].中國實驗方劑學雜志,2013, 19(2):305-307.

[3]崔姍姍, 陳玉龍, 周發祥, 等.半夏瀉心湯及其拆方誘導胃腺癌SGC-7901細胞凋亡機制[J].中華中醫藥雜志2015, 30(4):1287-1289.

[4]童榮生, 肖開春, 李晉奇, 等.半夏瀉心湯調節胃腸動力的物質基礎研究[J].中國實驗方劑學雜志,2015, 21(3): 160-163.

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[6]羅桂香, 尹抗抗, 譚達全.半夏瀉心湯及其有效組分黃芩苷對幽門螺桿菌相關性胃炎胃黏膜保護作用和對TNF-α影響的研究[J].中國中醫藥現代遠程教育,2009, 7(1): 19-20.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) [ S].北京:化學工業出版社, 2015:301-302.

[8]鄢長華, 陳俊林, 趙海濤.HPLC法對不同栽培年限及不同產地的黃芩中黃芩苷的含量測定分析研究[J].內蒙古醫學雜志,2006, 38 (6):515-517.

[9]張曉東.半夏瀉心湯不同煎法對黃芩苷的影響[J].中醫藥臨床雜志,2007, 19(5): 495-496.

[10]呂士杰, 李妍, 蘆曉晶, 等.HPLC測定芩丹顆粒中黃芩苷、梔子苷和丹皮酚[J].中國實驗方劑學雜志,2010, 16(6):81-84.