川牛膝藥材及其成方制劑薄層鑒別方法研究

宋國紅，李 卿

（重慶市中藥研究院，重慶 400065）

川牛膝 Cyathula offcinalis Kuan是川產(chǎn)道地藥材之一，其性善下行，可引血(火)下行，既能逐瘀通經(jīng)，又能補益肝腎[1]，為歷版《中國藥典》收載，在中醫(yī)臨床配方及中成藥制劑中廣泛應(yīng)用，發(fā)揮著重要作用[2－4]。2015年版《中國藥典(一部)》川牛膝藥材中鑒別項下收載以川牛膝對照藥材和杯莧甾酮對照品為陽性對照的薄層鑒別方法，與川牛膝配伍的中藥成方制劑有數(shù)10種，在薄層鑒別方法項下，有的收載有川牛膝的薄層鑒別方法，有的未收載；在收載有川牛膝薄層鑒別方法的中藥制劑中，有的以川牛膝對照藥材為陽性對照，有的以杯莧甾酮對照品為陽性對照，特征性不完全一致。川牛膝化學(xué)成分主要為蛻皮甾酮類、皂苷類、異黃酮類、脂肪酸類及多糖類化合物等，川牛膝中杯莧甾酮有促進蛋白質(zhì)合成、抗血小板聚集等活性，已作為川牛膝藥材及中藥成方制劑重要特征性成分[5－6]。在試驗過程中發(fā)現(xiàn)，按照現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進行試驗，川牛膝藥材薄層色譜分離清楚，斑點清晰，但操作過程不易控制；該方法用于川牛膝中藥成方制劑進行薄層鑒別時，大部分上市品種供試品不能達到純化效果，色譜鑒別困難，斑點不明晰，易造成判斷偏差。本試驗中針對現(xiàn)行方法的不足，改進了試驗方法，修訂后的方法斑點清晰、準(zhǔn)確、專屬性強。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：薄層成像色譜儀（瑞士卡瑪公司）；HH－S型水浴鍋（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；BP211D型電子天平（德國 Satorius公司）；中性氧化鋁（上海陸都化學(xué)試劑廠）；D101型大孔樹脂（天津市海光化工有限公司）；硅膠G板（青島海洋化工廠）。

試藥：川牛膝對照藥材（批號為121065－20110)、杯莧甾酮對照品(批號為111804－201303），均由中國食品藥品檢驗檢測研究院提供；天麻祛風(fēng)補片，獨活寄生合劑，穿龍骨刺片，痛風(fēng)定膠囊，腰痛寧膠囊，瘀血痹膠囊，瘀血痹顆粒，均購自零售藥房。

2 方法與結(jié)果

2．1 溶液制備

取樣品適量（相當(dāng)于川牛膝藥材2 g），加80 mL乙醇，水浴回流1 h，濾過，回收乙醇，加水50 mL溶解，過D101大孔樹脂柱（長 10 cm，內(nèi)徑 1 cm），用 100 mL水洗脫，棄去水洗液，再用50%乙醇80 mL洗脫，收集50%乙醇洗脫液，回收乙醇，再加50 mL水溶解，繼用40 mL水飽和正丁醇提取2次，正丁醇液用40 mL氨試液洗滌2次，棄去氨試液，回收正丁醇，用乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。取川牛膝對照藥材2 g，加60 mL水，提取1 h，濾過，用40 mL水飽和正丁醇提取2次，正丁醇液用40 mL氨試液洗滌2次，棄去氨試液，回收正丁醇，加乙醇1 mL溶解，作為川牛膝對照藥材溶液。取杯莧甾酮對照品適量，加乙醇制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2．2 薄層色譜鑒別

吸取供試品溶液5～10 μL、對照藥材溶液和對照品溶液各5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。供試品溶液色譜中，與川牛膝對照藥材溶液色譜和杯莧甾酮對照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。色譜圖見圖1。

2．3 特征性鑒別

參照2015年版《中國藥典（一部）》川牛膝藥材的鑒別方法，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應(yīng)位置上，色譜帶分離不清晰，斑點不明確，不能顯示明顯的特征斑點，色譜圖見圖2。采用改進后的供試品溶液制備方法，在相同層析條件下展開、檢視，結(jié)果色譜分離良好，斑點清晰；以川牛膝藥材配伍的中藥成方制劑，采用改進后的試驗方法，結(jié)果在擬訂層析條件下，色譜分離度好，在與杯莧甾酮對照品溶液相應(yīng)位置上，斑點顏色一致，清晰可見。

圖1 川牛膝薄層色譜圖

圖2 藥典方法川牛膝薄層色譜圖

2．4 驗證試驗

取天麻祛風(fēng)補片、獨活寄生合劑、穿龍骨刺片、痛風(fēng)定膠囊、腰痛寧膠囊、瘀血痹膠囊、瘀血痹顆粒等10個不同上市銷售的與川牛膝配伍的中藥成方制劑樣品適量（相當(dāng)于川牛膝藥材2 g），按供試品溶液制備方法進行試驗。結(jié)果10批次樣品中，均檢出與杯莧甾酮對照品相應(yīng)的特征斑點。

3 討論

川牛膝藥材供試品溶液制備：藥典方法采用甲醇回流提取，過中性氧化鋁柱，甲醇－乙酸乙酯(1∶1)洗脫，改進后的方法采用加水提取，水飽和正丁醇萃取，氨試液洗滌，改進后的方法與現(xiàn)行方法比較，操作性更強，易于掌握、控制，利于推廣應(yīng)用。

與川牛膝配伍的中藥成方制劑供試品溶液的制備：藥典收載了數(shù)十個與川牛膝配伍的中藥成方制劑，劑型包括酊劑、膏劑、片劑、膠囊劑、丸劑等，川牛膝入藥方式有生藥直接粉碎、水煎煮提取、乙醇回流提取、乙醇滲漉入藥等多種，制劑成型工藝各不相同，輔料亦有差異，選用不同處理方法[7－12]。藥典方法用甲醇回流提取、過中性氧化鋁柱；甲醇提取，三氯甲烷再萃取；樣品加水溶解，乙醚除雜，再用三氯甲烷萃?。粯悠芬掖蓟亓魈崛。^大孔樹脂，水飽和正丁醇提取，氨試液洗滌。結(jié)果表明，改進后的供試品溶液制備方法，各個不同劑型、不同入藥方式、不同生產(chǎn)工藝的上市產(chǎn)品，供試品溶液色譜純化效果理想，色譜分離良好，斑點清晰。

原藥典收載的川牛膝鑒別方法：某些展開系統(tǒng)中用到甲苯等劇毒溶劑，通過改進供試品溶液制備方法后，選用更具代表性的杯莧甾酮作為鑒別川牛膝的對照品，避免了劇毒試劑的使用，對操作人員和管理人員都有很好的保護作用，在生產(chǎn)和質(zhì)量控制中方法專屬性更強，判斷準(zhǔn)確性更高。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：38．

[2]李 成，馬新建．道地藥材之懷牛膝、川牛膝的本草考證[J]．中醫(yī)學(xué)報，2011，26（11）：1336 － 1337．

[3]葉品良，彭 娟，劉 娟．川牛膝研究概況[J]．中醫(yī)藥學(xué)報，2007，35（2）：51 － 53．

[4]黎萬壽，陳 幸，王曉陽．川牛膝的品質(zhì)研究[J]．現(xiàn)代中藥研究與實踐，2003，17（4）：18 －20．

[5]孔飛飛，郭良君，譚興起．川牛膝中杯莧甾酮的提取、分離及純化工藝研究 [J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22（18）：2023－2026．

[6]譚玉柱，童婷婷，潘曉麗．川牛膝的HPLC指紋圖譜研究[J]．成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，34（3）：75 －77．

[7]郭 晶，孫傳鑫，王秋紅．川牛膝化學(xué)拆分組分性味藥理學(xué)評價——川牛膝化學(xué)拆分組分降血脂作用研究[J]．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，18（7）：16 －19．

[8]劉晶晶，陳 幸．大孔吸附樹脂富集純化川牛膝中杯莧甾酮的研究[J]．時珍國醫(yī)國藥，2010，21（9）：2274 － 2275．

[9]李金亭，胡正海．牛膝類藥材的生物學(xué)與化學(xué)成分的研究進展[J]．中草藥，2006，37（6）：952 － 956．

[10]盧樹杰，張 綱，甄蘭敏．舒筋通絡(luò)顆粒中牛膝的薄層色譜鑒別[J]．中國藥業(yè)，2010，19（6）：26．

[11]何 穎，谷 勇，侯杰榮．牛膝與川牛膝及華澤蘭牛膝的鑒別[J]．實用中醫(yī)藥雜志，2011，27（8）：562 － 563．

[12]徐金鳳，孫 妍，張洪娟．續(xù)斷接骨丸制劑工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)薄層鑒別方法的研究[J]．黑龍江中醫(yī)藥，2014，43（3）：47 － 48．