我國豬瘟疫苗免疫現狀及抗體檢測方法綜述

祖立闖，謝金文，王文秀，沈志強，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起一種高度接觸性、致死性的傳染病，是目前危害我國養豬業的頭號殺手，嚴重阻礙了我國養豬業的健康發展[1]。長期以來我國對豬瘟的防控采取以豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種為主，結合抗體監測、生物安全等綜合措施有效防止了豬瘟的大規模暴發和流行。但受到母源抗體干擾、疫苗質量、免疫劑量和方法、高密度免疫接種、其它病原體的免疫抑制作用、飼料霉變等因素的影響，豬瘟疫苗的免疫失敗現象仍時有發生，豬瘟在局部地區仍有發生與流行，甚至很嚴重[2-3]。豬瘟疫苗免疫后的抗體水平監測對及時發現免疫失敗現象、修訂免疫程序、確保豬瘟疫苗免疫效果均至關重要。鑒于此，本文通過對2010年以來我國豬瘟疫苗免疫后抗體監測文獻的整理與匯總，分析出了近幾年我國豬瘟疫苗的免疫現狀與特點，為我國當前豬瘟的防控提供了有效信息，并為進行針對性防疫措施的制定提供了科學依據。本文還對豬瘟疫苗免疫抗體檢測方法進行了綜述，比較分析了各種抗體檢測方法的優缺點以及發展前景，為獸醫部門及養殖單位選擇合理的抗體檢測方法提供參考。

1 豬瘟疫苗免疫效果監測情況

隨著養殖單位對豬瘟疫苗免疫和抗體監測工作的逐步重視，研究學者陸續對不同地區豬瘟疫苗免疫效果進行了大量的抗體監測。通過對2010年以來豬瘟疫苗免疫抗體監測結果的匯總分析，發現近幾年我國豬瘟疫苗的免疫現狀呈現出以下3個顯著特點。

1.1 疫苗免疫效果整體較好

如表1所示，從整體檢測結果來看，豬瘟疫苗的免疫狀況較好，在2010年以來的76份豬瘟疫苗免疫抗體監測文獻中，有64份的免疫抗體合格率超過了國家免疫方案中免疫抗體合格率≥70%的要求，即有84.21%（64/76）的文獻報道豬瘟疫苗免疫合格。

1.2 不同區域差異較大

如表1所示，不同區域免疫合格率差異較大，如2011—2013年貴州省9個地區免疫合格率僅為53.72%，而2011—2013年廣西14個市免疫合格率高達84.9%；如2013年河南信陽地區免疫合格率僅為75.5%，而2013年河北13個地市免疫合格率高達98.02%；如2016年新疆庫車縣免疫合格率僅為68.02%，而2016年安徽望江縣免疫合格率高達91.25%。這種差異產生的原因與不同地區對豬瘟疫苗免疫工作的重視程度、使用的豬瘟疫苗免疫程序不合理、養殖生產整體水平的參差不齊等均密切相關。

1.3 整體免疫合格率逐年提高

如表1所示，2012年以前的免疫抗體監測文獻中免疫合格率多數低于80%，且有部分文獻低于70%的國家標準要求，而2012—2014年免疫合格率超過80%的文獻逐步增多，至2015—2016年的文獻免疫合格率大部分均超過80%，且出現免疫合格率高達90%以上的文獻報道，如2013—2016年福建南平免疫合格率達95.45%，2014—2016年江西贛州免疫合格率達91.83%，2015年遼寧沈陽免疫合格率達96.56%，2016年安徽望江縣的免疫合格率達91.25%。

表1 2010年以來豬瘟疫苗免疫抗體監測情況匯總

2 豬瘟疫苗免疫抗體檢測方法綜述

2.1 中和試驗（VN）

中和試驗方法是將豬瘟病毒準確定量后，加不同稀釋度的被檢血清，通過測定被檢血清阻止病毒感染試驗兔或細胞的能力而測定其抗體效價。利用試驗兔進行中和試驗是《中國獸藥典》中法定的豬瘟抗體陰性豬篩選方法，可以認為是豬瘟抗體檢測的“金標準”，其準確性無需置疑，但該方法檢測結果易受試驗兔個體差異、健康狀況、飼養環境等因素影響，且檢測周期長、工作量大、成本高。利用細胞進行中和試驗，因豬瘟病毒在細胞培養中不產生細胞病變，故需借助標記抗體（如熒光標記）來檢測抗原抗體反應的信號，該方法涉及細胞培養和顯微鏡觀察，操作復雜，檢測周期較長，對儀器設備、操作人員技術水平要求均較高，基層實驗室由于不具備試驗條件很難展開，限制了其在基層的推廣應用。

2.2 間接血凝試驗（IHA）

IHA是將抗原包被于紅細胞表面，使之成為致敏的載體，然后將與相應的抗體結合，從而使紅細胞拉聚在一起，出現可見的凝集反應。IHA方法采用全病毒作為抗原，受抗原制備過程與病毒純化等方面的限制，IHA不同批次抗原的穩定性和重復性均較差，同時該方法還存在血清樣品需經過滅活處理，血清的質量嚴重影響檢測結果，且檢測結果需肉眼判讀，受主觀因素影響大，但該方法操作簡便、檢測快速、無需特殊儀器設備，特別適合基層實驗室使用。

2.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA檢測方法具有敏感性和特異性強、操作簡單、檢測快速、高通量、無輻射、價格低廉等特點，是當前動物疫病診斷廣泛采用的免疫學技術。ELISA既可測定抗原也可測定抗體，常用的有直接法、間接法、夾心法、阻斷法。目前應用于豬瘟抗體檢測的主要有間接法和阻斷法。間接ELISA方法中首先用特異性抗原包被固相載體，加入待測抗體（一抗），待測抗體與包被固相抗原發生特異性結合；再加入酶標記的抗體（酶標二抗），酶標抗體與待測抗體發生特異性結合，再加入底物顯色液，底物顯色液與酶標抗體發生特異性結合，最后顯色顏色的深淺與待測抗體的量成正比。阻斷ELISA是用特異性抗原包被固相載體，用酶標記的抗特異性抗原的單克隆抗體作為競爭抗體，使之阻斷待檢血清與特異性抗原的反應，根據阻斷率的大小判定陰陽性結果。ELISA檢測的敏感性和特異性均較高，阻斷ELISA的敏感性較間接ELISA更高，且ELISA方法具有微量、高通量等優點，特別適合臨床大批量樣品的檢測，但ELISA方法尤其是阻斷ELISA方法操作較復雜，操作人員需要具有一定的專業技術水平，且需要酶標儀等儀器設備，隨著我國基層獸醫實驗室的不斷建設與完善，ELISA方法將具有廣闊的發展空間和應用前景。

2.4 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA是結合膠體金標記技術、免疫檢測技術和層析分析技術發展起來的一種新型免疫學檢測技術，其以膠體金作為示蹤標志物，將其標記抗原或抗體后形成標記物，樣品中的待測物與標記物形成的絡合物通過層析作用在層析材料上泳動，與層析材料上針對該待測物的受體發生免疫反應形成免疫復合物，免疫復合物中的膠體金大量聚集形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點。該方法特異性強、靈敏度高、檢測反應時間短、操作簡便、操作人員不需培訓、樣品不需預處理、無需特殊儀器設備、特別適合現場檢測。但該方法檢測豬瘟抗體只能提供一個定性的檢測結果，無法對抗體滴度進行準確定量，只能初步篩查豬瘟抗體，隨著膠體金免疫標記技術的不斷發展，該方法將會逐步得到完善。

3 結語

通過對2010年以來我國豬瘟疫苗免疫情況的匯總分析，發現我國豬瘟疫苗總體免疫效果較好，免疫合格率逐年提高，但不同區域間豬瘟免疫抗體水平差異較大，部分區域豬瘟疫苗的免疫效果還不夠理想，應該加強免疫和抗體監測，及時調整免疫程序。基層獸醫部門和養殖單位應意識到豬瘟的危害性，疫苗免疫的必要性，抗體監測的重要性，以及豬瘟綜合防控工作的持久性和嚴峻性，加強豬瘟疫苗免疫和抗體監測工作，確保豬瘟疫苗免疫效果。通過對豬瘟幾種抗體檢測方法的比較，發現每種檢測方法都有自己的優點和缺點，各實驗室可根據自身的情況選擇適合自己的方法，或選擇二種方法聯合使用。隨著免疫學技術的不斷發展，各種豬瘟免疫抗體檢測方法均將會得到進一步完善，不斷為豬瘟疫苗的免疫監測提供技術保障，在豬瘟的綜合防控中實現更加理想的價值，逐步實現我國豬瘟的根除。

[1]祖立闖，李嬌，謝金文，等.豬瘟病毒實驗室檢測方法研究進展[J].養豬，2016（6）：117-118.

[2]彭潔，高洪，嚴玉霖，等.云南省2013—2015年間部分豬場豬瘟感染情況調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2017（2）：114-116.

[3]孫東豐，高順，于波，等.豬瘟免疫失敗原因分析[J].畜牧獸醫科技信息，2017（7）：90-91.

[4]王健青，尹建波，洪偉彬，等.東莞市2008—2012年豬瘟血清學調查與分析[J].畜牧獸醫科技信息，2013（7）：23-25.

[5]馬秀玲.豬瘟免疫抗體檢測分析報告[J].青海畜牧獸醫雜志，2012，42（2）：22-23.

[6]盧寒梅，謝國懷，謝柱彬，等.廣東省東莞市豬瘟抗體水平調查[J].畜牧獸醫科技信息，2012（2）：47-48.

[7]鄒正舉.赤水市豬瘟免疫抗體監測[J].貴州畜牧獸醫，2012，36（4）：35-36.

[8]張艷，羅宏琴，孟惠惠.2009—2014年安順市豬瘟免疫抗體檢測[J].貴州畜牧獸醫，2015，39（5）：35-38.

[9]查日華，王必達.2010年安徽省繁昌縣豬瘟抗體水平監測報告[J].畜牧與飼料科學，2011，32（3）：115-116.

[10]吳悌霖.福建省三明地區種豬群豬瘟免疫抗體監測與分析[J].養豬，2010（2）：68.

[11]黃寶學，韋顯凱，蒙振畝，等.2010年-2012年田東縣豬瘟、口蹄疫和高致病性禽流感抗體檢測及分析[J].動物醫學進展，2013，34（8）：133-136.

[12]徐國群，何永強，杜愛芳.2010-2012年浙江省部分地區規模豬場豬瘟抗體的檢測分析[J].浙江畜牧獸醫，2013（3）：4-5.

[13]陳蓓蓉，杜愛芳.杭州市豬瘟免疫抗體水平檢測及效果評估[J].浙江畜牧獸醫，2016（1）：5-7.

[14]劉濤，王瑞，曲哲會，等.信陽地區豬瘟與偽狂犬病免疫狀況血清學調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2012（22）：79-80.

[15]劉萬年，陳繼明，白鵬飛，等.陜西省綏德縣2011年秋季豬瘟免疫狀況監測及分析[J].畜牧與飼料科學，2012（1）：114-115.

[16]程漢，曹軍平，胡新崗，等.泰州地區規模化豬場豬瘟抗體水平的血清學調查[J].江蘇農業科學，2012，40（10）：194-195.

[17]張明敬，李峰，單玉平，等.連云港規模化豬場豬繁殖與呼吸綜合征和豬瘟血清學調查[J].中國動物保健，2012，14（3）：44-45.

[18]李淞，朱玲，吳江江，等.2011年四川省部分規模化豬場豬瘟抗體水平監測[J].養豬，2012（3）：114-115.

[19]潘容洲，冷董碧，阮記明.江西省部分地區規模化豬場偽狂犬病及豬瘟血清學監測報告[J].國外畜牧學（豬與禽），2012，32（6）：71-72.

[20]嚴兵，李新盛，甄長豐，等.安徽省合肥地區規模化豬場豬瘟抗體水平監測和免疫效果分析[J].豬業科學，2012，29（10）：46-47.

[21]馬琳，郭建剛，覃芳蕓，等.2011—2013年廣西地區豬瘟抗體監測及免疫效果分析[J].現代農業科技，2014（5）：281.

[22]王海軍，李永賓，龐豐豐，等.吉林省部分地區豬瘟病毒抗體水平調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2015（20）：113-114.

[23]席銳，馬偉，蘇艷，等.2011—2013年奇臺縣豬群中定點監測豬瘟免疫效果評估[J].新疆畜牧業，2015（1）：38-39.

[24]馮旭芳，尹鑫，云婷，等.近3年貴州省豬瘟流行病學初步調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2016（4）：97-99.

[25]陳建清，戎青，吳敏秋.2011-2014年規模豬場豬瘟抗體的檢測及分析[J].中國豬業，2016（3）：52-54.

[26]劉建營，樊福好.2012年上半年廣東部分豬場豬瘟抗體檢測結果分析與防控對策[J].廣東畜牧獸醫科技，2012，37（5）：20-21.[27]何成偉，田生花.湟中縣豬瘟免疫抗體調查與分析[J].畜牧與獸醫，2013，45（8）：120-121.

[28]朱清妹.張家港地區規模豬場豬口蹄疫和豬瘟抗體水平的血清學調查[J].中國畜牧獸醫文摘，2012，28（7）：128.

[29]黃玉，蔣法成，范磊，等.對清浦區豬瘟等抗體水平監測及免疫效果分析[J].中國畜禽種業，2012（4）：65-66.

[30]鄒建煌.進賢縣豬瘟、口蹄疫免疫抗體監測與分析[J].養殖與飼料，2012（12）：22-24.

[31]侯文博.山東省諸城市規模化豬場豬瘟抗體水平的監測[J].中國豬業，2013（7）：45-46.

[32]薛喜娟，徐崢嶸，王文莉，等.甘肅地區豬瘟免疫抗體水平調查[J].國外畜牧學（豬與禽），2015，35（1）：42-43.

[33]胡東方，張振東，任慶海，等.山東省中小規模豬場豬瘟抗體水平的血清學調查與分析[J].養豬，2013（4）：99-101.

[34]項朝榮，項黎麗，王路，等.濟源市豬瘟抗體血清學調查研究[J].中國畜牧獸醫文摘，2014，30（11）：110-111.

[35]許追，齊向濤，齊亞銀，等.新疆石河子地區豬瘟免疫抗體水平檢測與分析[J].養豬，2013（5）：97-99.

[36]馬琳，郭建剛，覃芳蕓，等.2012-2013年廣西部分規模豬場豬瘟群體免疫合格率與抗體離散度監測及免疫效果分析[J].黑龍江畜牧獸醫，2014（20）：68-69.

[37]楊國麗，王軍，魏澍，等.2012-2013年遼寧省豬瘟免疫抗體監測分析[J].現代畜牧獸醫，2014（12）：30-36.

[38]宋建國，薛喜娟，周峰，等.甘肅省豬瘟免疫抗體檢測及結果分析[J].畜牧獸醫雜志，2015，34（6）：19-21.

[39]張華，李照偉，李濤，等.貴州省豬瘟血清學調查研究[J].貴州畜牧獸醫，2015，39（6）：1-4.

[40]談國倉.湟源地區豬瘟疫苗免疫效果監測與分析[J].青海畜牧獸醫雜志，2014，44（6）：22-23.

[41]臺凡力，李佳.廣東湛江市規模化豬場豬瘟免疫抗體水平檢測分析[J].養豬，2014（3）：94-96.

[42]哈西巴特，趙炎，馬修國，等.河北省防豬瘟免疫抗體監測評估與分析[J].今日畜牧獸醫，2014（1）：32-33.

[43]馬超鋒，張軼，高均偉，等.2013年河南信陽地區豬瘟防疫狀況調查[J].養豬，2014（2）：89-90.

[44]莊培德，張阿娥.泉州市洛江區豬瘟抗體水平檢測效果分析[J].福建畜牧獸醫，2015，37（1）：1-2.

[45]李澤宇.新疆昌吉地區規模化豬場豬瘟免疫抗體水平檢測與分析[J].畜牧獸醫雜志，2015，45（4）：6-10.

[46]孫彬彬，王銀，于三科.閻良區豬瘟和豬O型口蹄疫免疫效果檢測與分析[J].動物醫學進展，2015，36（4）：128-130.

[47]李志勇，張敏.焦作地區豬群豬瘟免疫狀況及流行情況調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2016（6）：107-108.

[48]崔曉峰，袁潔，景瑞.志丹縣豬瘟免疫抗體監測及結果分析[J].中國畜牧獸醫文摘，2017，33（2）：134.

[49]黃劍鋒，陳聰，江明清，等.延平區規模豬場豬瘟免疫效果檢測與分析[J].中國畜禽種業，2016（11）：23-24.

[50]王路，惠永華，趙建東，等.濟源市豬瘟免疫現狀及免疫效果評價[J].中國畜牧獸醫文摘，2014，30（12）：92.

[51]董骎，高洪，嚴玉霖，等.云南省楚雄部分地區豬場豬瘟血清學調查[J].上海畜牧獸醫通訊，2015（1）：38-39.

[52]張俊，邱建東，任笠恩.山西晉中地區豬瘟抗體水平血清學調查[J].豬業觀察，2015（1）：108-109.

[53]梅小偉，馬濤，艾洋，等.湖北某地區豬瘟血清學調查[J].湖北畜牧獸醫，2015，36（2）：41-42.

[54]顧冬花.部分規模化豬場種豬豬瘟抗體監測及免疫效果分析[J].山東畜牧獸醫，2015（10）：41-42.

[55]劉功成，張倩，屈勇剛，等.新疆石河子地區規模化豬場豬瘟抗體檢測及分析[J].豬業科學，2016，33（1）：80-81.

[56]余亮彬，石浪濤.黃岡市豬瘟免疫效果監測與分析[J].中國畜禽種業，2016（3）：3-4.

[57]張輝，羅厚強，李坤，等.林芝部分地區藏豬豬瘟的血清學調查[J].畜牧與獸醫，2016，48（6）：155.

[58]劉鴿，張培生，于會舉，等.北疆地區規模化豬場豬瘟抗體水平檢測與分析[J].中國豬業，2016（7）：46-49.

[59]楊凡，呂文婷，許思遙，等.2014-2016年四川省豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征病毒的血清學調查[J].豬業科學，2017，34（1）：106-109.

[60]葉華富，戴朝洲.贛州某規模化豬場豬瘟、藍耳病抗體監測結果分析[J].江西畜牧獸醫雜志，2016（6）：12-13.

[61]雷蕾.沈陽地區豬瘟病毒免疫抗體水平監測及分子流行病學調查[J].畜牧獸醫科技信息，2016（2）：24.

[62]羅潤波，王剛，云旦平措，等.西藏林芝地區豬瘟流行的抗原及免疫抗體檢測[J].中國獸醫雜志，2016，52（8）：54-55.

[63]劉嫦，苗淑淑，高洪，等.云南省曲靖部分地區豬瘟病毒抗體水平調查[J].上海畜牧獸醫通訊，2016（4）：38-39.

[64]王慧真，王會娟.邯鄲地區豬瘟抗體檢測及結果分析[J].黑龍江畜牧獸醫，2015（24）：134-135.

[65]汪洋，孔祥華，王士榮，等.濟南市部分規模化豬場豬瘟抗體監測結果與分析[J].山東畜牧獸醫，2016，37（10）：52-53.

[66]沈洪文.合川區2015年度豬瘟免疫抗體監測及結果分析[J].當代畜牧，2016（5）：95-96.

[67]趙洪秋，楊麗，周霞，等.藁城市規模化豬場豬瘟抗體的血清學調查[J].中國畜牧獸醫文摘，2016，32（3）：132.

[68]甘一波，黃宇，張紅云，等.玉林市大中型規模化豬場豬瘟抗體合格率調查[J].廣西畜牧獸醫，2017，33（1）：27-29.

[69]程龍，王皓婷，孫冰玉，等.邯鄲地區規模化豬場豬瘟抗體檢測報告[J].黑龍江畜牧獸醫，2017（2）：135-137.

[70]周婷婷，劉煒，賈松濤，等.河南某地區4個規模化豬場豬瘟免疫抗體檢測及免疫程序制訂[J].黑龍江畜牧獸醫，2017（4）：139-140.

[71]葛陽春.庫車縣豬瘟血清學調查研究[J].畜牧獸醫科學，2017（2）：7.

[72]魏鳳，張文通，李峰，等.魯北地區豬瘟疫苗免疫血清抗體測定及分析[J].養豬，2017（2）：116-117.

[73]王謝忠，游瀟倩，孫生禎，等.青海省主要生豬養殖區豬瘟免疫抗體水平監測報告[J].青海畜牧獸醫雜志，2017，47（2）：32-34.

[74]劉永波，宋春蓮，謝相悅，等.云南4個規模化豬場豬瘟抗體水平監測及免疫效果分析[J].中獸醫學雜志，2017（1）：84-86.

[75]黃小紅，黃恩福，范寅，等.江西某豬場豬瘟抗體水平檢測與分析[J].江西畜牧獸醫雜志，2017（2）：11-13.

[76]劉濤.豬瘟免疫抗體監測分析[J].山東畜牧獸醫，2017，38（5）：6-7.

[77]吳婷婷.亭湖地區豬瘟抗體免疫水平分析[J].山東畜牧獸醫，2016，37（12）：16-17.

[78]劉玉才.山東五蓮縣規模豬場豬瘟免疫效果監測[J].養殖與飼料，2017（6）：62-63.

[79]曹立松，李少炎.望江縣2016年生豬口蹄疫、豬瘟、藍耳病等血清學調查[J].農技服務，2017，34（2）：142.