2017年山東省豬瘟病毒病原及抗體檢測與分析

王宏宇，馬梓承，孟凡亮，劉照虎，劉思當

（山東農業大學動物科技學院，山東 泰安 271000）

豬瘟（Classical swine fever,CSF），是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種高度接觸性熱性傳染病。以全身性出血和發熱為主要特征，并引起妊娠母豬流產、免疫抑制、繼發或并發感染等臨床表現，呈急性或慢性，是一種對我國養豬業危害極大的傳染病。1984年被世界動物衛生組織（OIE）列為A類傳染病。因此豬瘟的診斷防治歷來是全世界豬瘟存在國家極為重視的課題，我國每年都投入大量人力、物力進行豬瘟的免疫防控及科研工作。疫苗免疫防控是控制豬瘟的重要的手段，使該病在很大程度上得到了控制，但因種種原因，近年來仍有豬瘟發生。因此，定時進行豬瘟病原和抗體檢測，不僅可以了解豬場的感染狀態及免疫效果，實時監測群體免疫狀況，而且能夠及時發現免疫存在的問題及潛在風險，以便更好地做好豬瘟的防控工作。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源與處理 2017年 2月至 2018年1月，從山東泰安、濟寧、青島、臨沂、煙臺、萊蕪和濰坊等地送檢的579份檢測豬瘟病原的病料及4 554份檢測豬瘟抗體的血清。于山東農業大學動物科技學院臨床病理學研究室進行檢測前處理，將病料研磨后9 000 r/min，離心3 min，置于-20℃待檢；血清置于 1.5 mL 離心管中，6 000 r/min，離心 5 min，吸取上清液至新的離心管中，-20℃待檢。

1.1.2 主要儀器與試劑 EasyPure Viral DNA/RNA Kit和 EasyScript One-Step RT-PCR SuperMix均購自北京全式金生物技術有限公司，豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測試劑盒購自韓國MEDIAN公司，Eppendorf移液器，酶標儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 檢測方法 病原檢測參照 EasyPure Viral DNA/RNA Kit說明書對組織研磨液進行RNA提取，PCR擴增體系按照One Step RT-PCR試劑盒的說明書進行，用PCR儀進行擴增，將擴增產物用1%的瓊脂糖凝膠檢測；抗體嚴格按照抗體檢測試劑盒的說明書進行，酶標儀檢測樣品的OD450，按照說明書中的計算公式進行計算。

1.2.2 結果判斷 本實驗室豬瘟特異性引物擴增的序列長度為599 bp，瓊脂糖凝膠上在599 bp處有條帶的為豬瘟陽性；豬瘟抗體檢測的標準：阻斷率≥40%為陽性，阻斷率＜40%為陰性。

2 檢測結果

2.1 病原檢測結果

經瓊脂糖凝膠檢測，在579份樣品中，43份豬瘟陽性，檢出率為7.43%，全年檢出率按月份分布如圖1。5份同時檢出豬圓環病毒2型（PCV2），1份與豬藍耳病病毒（PRRSV）共感染，1份CSFV、PRRSV、PCV2三重感染，另1份CSFV、PRRSV、偽狂犬病病毒（PRV）三重感染，分別占陽性檢出數的11.63%、2.33%、2.33%、2.33%。

圖1 豬瘟病毒年檢出率月份分布

2.2 抗體檢測結果

經檢測，CSFV抗體的總體陽性率為76.46%，其分群的抗體檢測數、陽性率及抗體免疫水平結果匯總如表1。

表1 豬瘟抗體分群結果匯總

3 結果分析

3.1 病原檢測結果分析

經檢測，本實驗室2017年在579份送檢病料中豬瘟陽性檢出率為7.43%，陽性檢出率較高，檢出月份主要集中在1月、5月和7月，分別占年總檢出的15.00%、12.73%和14.63%。同時，豬瘟作為免疫抑制病，與圓環病毒2型感染、藍耳病和偽狂犬病的混感現象較為普遍，尤其是存在二重或三重感染，使病情復雜化。目前，我國豬瘟的免疫防控和監測凈化工作仍面臨不少困難和挑戰。

3.2 抗體檢測結果分析

2017年豬瘟抗體的總體陽性率為76.46%，據《2018年國家動物疫病強制免疫計劃》指示，存欄豬群豬瘟的抗體陽性率大于70%為免疫合格，總體而言山東省豬瘟免疫水平尚屬合格。如表1所示，種公豬、經產母豬、后備母豬的陽性率分別為88.92%、88.01%、76.20%，免疫效果較好；而哺乳仔豬和肥育豬的陽性率分別為69.10%和67.71%。對于哺乳仔豬，母源抗體水平較高，仍能持續給予仔豬一定的免疫保護，但對于肥育豬而言，整體陽性率不高，阻斷率較低，懷疑免疫程序、免疫操作或疫苗質量等可能存在問題，問題豬場需要篩查原因，選取高質量疫苗，優化免疫程序，加強免疫監測評估，提高豬瘟免疫效果。

4 討論

當前，我國豬場的疾病防控現象依然嚴峻，豬瘟暴發的現象時有發生，尤其是中小規模的豬場。根據病原檢測及抗體檢測結果分析，對造成這種現象的主要因素提出幾條建議：第一，選擇高效的豬瘟疫苗，根據豬場的實際情況制定科學的免疫程序并嚴格執行，避免因操作失誤而造成免疫失敗現象的出現；第二，及時做好哺乳仔豬的疫苗免疫，在其抗體下降期及時免疫，重視肥育豬的疫苗免疫情況；第三，定期抽取一定比例的血清樣品進行豬瘟抗體檢測，這樣不但能實時監控豬瘟抗體的免疫動態，而且能夠對其免疫效果進行評估，不斷地優化豬瘟免疫程序，取得良好的免疫效果；第四，加強豬場的飼養管理，改善養殖環境，完善生物安全措施，尤其要做好其他疫病的免疫檢測工作。