一種微生態制劑對流行性腹瀉疫苗免疫效果的影響

阮 強，余金海，李 琪

（1.龍川東瑞農牧發展有限公司，廣東 河源 517000；2.廣東省動物源性人獸共患病預防與控制重點實驗室，廣東 廣州 510642）

流行性腹瀉近年在國內眾多養殖場發生，給養殖場帶來巨大損失。對于哺乳仔豬，7日齡內一旦發生流行性腹瀉，死亡率高達95%～100%。被動乳汁免疫被認為是保護新生哺乳仔豬免受豬流行性腹瀉（PED）等腸道疾病危害的最有希望和有效的方法[1]。已有研究證明微生態制劑具有增加免疫器官指數以及增強機體對疫苗的抗體應答的功能[2]。“豐強生泰”是一種四聯活菌微生態制劑，含雙歧桿菌、乳酸菌、糞鏈球菌、酵母菌。本次試驗，在腹瀉疫苗免疫期間，添加“豐強生泰”，通過測定母乳中IgA的含量，用于評價使用微生態產品對于PED免疫效果的提升作用，為PED免疫提供新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

20頭經產2～3次已妊娠3個月的長大二元雜種豬流行性腹瀉病毒陰性母豬，由廣東省河源東瑞公司提供。試驗于2017年11—12月在廣東河源市龍川縣豐稔鎮十二排村龍川東瑞農牧發展有限公司豬場進行。

1.2 試驗藥品

微生態制劑“豐強生泰”由江蘇恒豐強生物技術有限公司提供；豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）-豬流行性腹瀉病毒（PEDV）-豬輪狀病毒（PoRV）三聯弱毒疫苗（簡稱“TPR”三聯弱毒疫苗）由哈爾濱維科生物技術開發公司提供；豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）-豬流行性腹瀉病毒（PEDV）二聯滅活疫苗（簡稱“PT”二聯滅活苗）由武漢科前生物股份有限公司提供。

1.3 主要試劑

豬PED-IgA抗體酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒購自韓國安捷公司。

1.4 試驗母豬群分組及免疫程序

PED免疫組母豬20頭，每組10頭分為兩組。試驗組與對照組一免接種PED二聯滅活苗1.5頭份，二免接種PED三聯弱毒疫苗1頭份，三免接種PED二聯滅活苗1頭份。試驗組在二免和三免注射疫苗前2 d開始至注射后5 d飼喂“豐強生泰”2 g/（頭·d）。對照組不飼喂“豐強生泰”。試驗期間，試驗組與對照組的飼養管理條件相同。

1.5 乳汁及血液采集

PED免疫組中的試驗組和對照組母豬分娩后0、1、2、3、5、7、10、14 d 收集乳汁，放入密封瓶內，-20 ℃保存備用。

1.6 PEDV組乳汁中IgA測定

使用前，先將采集的乳汁樣品和試劑盒進行回溫，回溫結束，并輕輕混勻乳汁和試劑，乳汁樣品10 000 r/min離心2 min。參照說明書進行測定。

1.7 數據分析

試驗數據用Excel 2010軟件進行初步統計及整理，用其SPSS22.0軟件進行統計分析，利用ANOVA、LSD進行差異顯著性檢驗和多重比較，SAS軟件進行協方差分析（analysis of covariance），試驗結果以平均值±標準差表示[3]。

2 結果

按試劑盒說明書判斷推薦S/P值大于0.6認為是有保護力的乳汁，低于或等于0.6是不具備保護力。按每個處理組為因子，各個采集天數為因變量進行方差分析，兩組在 0、1、3、5、7、10、14 d 組群之間，豐強生泰組PEDV-IgA的S/P值均高于對照組，但經單因素方差分析顯示差異不顯著（圖1）。但豐強生泰組 0、5、7、10、14 d 的 S/P 值均高于 0.6 的保護閾值，而對照組的S/P值僅在5 d時高于0.6的保護閾值，其它時間均低于0.6的保護閾值。

圖1 豐強生泰組和對照組IgA變化

3 討論與小結

PED疫苗免疫期間使用微生態制劑豐強生泰能夠提高母乳中PEDV的IgA的抗體水平，說明豐強生泰能明顯促進免疫過程中IgA抗體的產生，增強對仔豬的免疫保護。

近年來，由于病毒的變異，PED疫苗的保護力逐漸降低，流行性腹瀉的防控越來越棘手，需要提高PED免疫效果，從而增強豬群對于流行性腹瀉病毒的抵抗力。而使用微生態制劑豐強生泰可以提高母豬母乳中IgA抗體水平，仔豬獲得更高水平的母源抗體，降低流行性腹瀉暴發可能性。此次試驗證明免疫流行性腹瀉疫苗期間添加微生態制劑可以提高免疫效果，可為臨床上防控流行性腹瀉提供一種新的方法和思路。

[1]陳靜，劉德清，張寧，等.7種常用豬流行性腹瀉疫苗臨床免疫效果觀察和評估[J].養豬，2013（2）：106-108.

[2]Langel Stephanie N,Paim Francine Chimelo,Lager Kelly M,et al.Lactogenic Immunity and Vaccines for Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV)：Historical And Current Concepts[J].Virus Research,2016,226(11)：93-107.

[3]Lilly D M,Stillwell R H.Probiotics-Growth promoting factor produced by microorganisms[J].Science,1965(147)：747-748.