HPLC指紋圖譜控制復方丹參片質量

宮君相

摘 要：目的：運用雙定性類型雙定量類型相似度作為基礎指標，構建復方丹參片指紋圖譜類型質量控制措施。方法：運用RP-HPLC檢測方式，并在試驗中使用CenturySIL柱。優化條件：在對指紋圖譜數據分析結果進行優化的時候，將指紋圖譜數據分析中的指數F當做為數據優化條件。流動相：本實驗中的流動相為質量分數百分之一醋酸水溶液以及質量分數為百分之一的醋酸甲醇水溶液，進行試驗中的流動洗。同時在實驗中的紫外檢測波的波長為290nm，控制實驗反應柱的柱溫數值在30℃左右，檢測設備當中的進樣量速度設定為5微升。確定雙定性類型相似度標準的時候，要對20批的CSMT進行系統的分析檢測，并以其中10批的CSMT數據檢測結果作為參照標準，生成相應的指紋圖譜。之后就以REP為實驗的計算標準，對實驗中共計20批次的CSMT進行雙定性類型雙定量類型的數據分析，以色譜圖當中指紋圖譜指數F為分析標準，對實驗分析中出現的42個實驗信息數據進行實際分析。結果：實驗分析中主要以異酚酸作為主要的參照物，根據數據分析確定了40個指紋峰峰位，確立了CMTS數據分析以及HPLC數據分析的指紋圖譜。在采用雙定性類型雙定量類型分析方式對20批次的實驗目標進行分析檢驗的時候，發現有8批次的實驗樣品在其化學組成成分數量方面、化學成分分布比例方面均為合的，其中有5批次實驗樣品在檢驗存在雙定性檢測數據不合格的問題，而剩余的7批次實驗分析數據顯示其含量偏低。結論：在采用隨機選擇方式抽查了20批次CMTS后，通過HPLC類型指紋圖譜鑒定檢測發現，各方面數據完全合格的產品共計有8批次，在雙定性類型檢測中結果不合格的共有5批次，在相似度數據檢測中顯示產品不合格的共計有7批次。因此，該實驗當中所建立的CSMT類型HPLC數據指紋圖譜檢技術能被用作于CSMT藥物生產中的質量控制環節。也表明了使用指紋圖譜類型數據分析技術以及變量類型的參數控技術能保證藥物生產當中的質量控制的效果。

關鍵詞：質量控制；指紋圖譜；復方丹參片；質量檢驗

復方丹參片療效確切、不良反應小且價格低廉，臨床應用廣泛，主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞等心血管疾病的預防和治療。復方丹參片主要含有水溶性的丹酚酸A、丹酚酸B、丹參素、原兒茶酸等酚酸類化合物和脂溶性的丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ等二萜醌類化合物及其他結構類型的丹參內酯類、生物堿類等多種化學成分。多數含量測定方法僅對其中的1種或幾種成分進行檢測分析，無法從整體上控制其質量。在本次實驗分析中收集了不同藥物生產廠家所生產的20批次藥物進行了分析，運用雙定性類型雙定量類型相似度作為基礎指標，構建復方丹參片指紋圖譜類型質量控制措施。

1 儀器與材料

Agilent1100型液相色譜儀（配有DAD、低壓四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進樣器，ChemStation工作站，美國Agilent公司），KQ-50B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），KDM型控溫電熱套（山東鄄城華魯儀器公司），旋轉蒸發儀RE52（上海亞榮生化儀器廠），SarturiusBS110S分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）。甲醇、乙腈（色譜純，山東禹王實業有限公司禹城化工廠），冰乙酸（色譜純，天津市科密歐化學試劑開發中心），其他試劑均為分析純，水為去離子水。

2 方法以及實驗條件

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取原兒茶醛對照品5.0mg，置25mL量瓶中，用體積分數為50%的甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取丹參酮ⅡA對照品5.0mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。精密稱取丹酚酸B對照品5.0mg，置25mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取5片復方丹參片（糖衣片去糖衣），研碎，加水50mL，回流提取2h，濾過，殘渣加水50mL繼續回流提取1.5h，濾過，合并2次濾液，減壓濃縮至20mL，加乙醇至體積分數為80%冷處避光放置、醇沉24h，濾過，將樣品液濃縮至12.5mL，用甲醇稀釋至25mL，搖勻備用。另取5片復方丹參片（糖衣片去糖衣），研碎，加體積分數為75%的乙醇溶液50mL，回流提取2h，濾過，殘渣加體積分數為75%的乙醇溶液50mL繼續回流提取1.5h，濾過，合并2次濾液，減壓濃縮至20mL，加水至體積分數為80%，冷處避光放置24h，濾過，將樣品液濃縮至12.5mL，用甲醇稀釋至25mL，搖勻備用。將上述2種溶液等體積混合即得供試品溶液。進樣前用0.45μm濾膜過濾。

2.3 實驗條件分析

運用RP-HPLC檢測方式，并在試驗中使用CenturySIL柱。優化條件：在對指紋圖譜數據分析結果進行優化的時候，將指紋圖譜數據分析中的指數F當做為數據優化條件。流動相：本實驗中的流動相為質量分數百分之一醋酸水溶液以及質量分數為百分之一的醋酸甲醇水溶液，進行試驗中的流動洗。同時在實驗中的紫外檢測波的波長為290nm，控制實驗反應柱的柱溫數值在30℃左右，檢測設備當中的進樣量速度設定為5微升。確定雙定性類型相似度標準的時候，要對20批的CSMT進行系統的分析檢測，并以其中10批的CSMT數據檢測結果作為參照標準，生成相應的指紋圖譜。之后就以REP為實驗的計算標準，對實驗中共計20批次的CSMT進行雙定性類型雙定量類型的數據分析，以色譜圖當中指紋圖譜指數F為分析標準，對實驗分析中出現的42個實驗信息數據進行實際分析。

3 結果分析

3.1 精密度試驗

精密吸取S2供試液5μL，連續進樣6次，以丹酚酸B為參照物峰，計算各指紋峰相對保留時間RSD<1.0%，相對峰面積RSD<3.0%，表明檢測系統進樣精密度合格。

3.2 穩定性試驗

取S2樣品制備供試液后，分別在0、3、6、12、24、36、48h進樣檢測，記錄色譜圖。以丹酚酸B為參照物峰，計算樣品在24h內各指紋峰相對保留時間RSD<1.0%，相對峰面積RSD<3.0%。36h后個別小指紋峰相對峰面積RSD超過6%，表明樣品在24h內穩定。

3.3 重復性試驗

取S2樣品5份，照“2.3”條平行制備6份供試液，在HPLC儀上進樣檢測，記錄色譜圖。以丹酚酸B為參照物峰，計算各指紋峰相對保留時間RSD<1.0%，相對峰面積RSD<3.0%。表明方法重復性良好。

3.3 數據分析

實驗分析中主要以異酚酸作為主要的參照物，根據數據分析確定了40個指紋峰峰位，確立了CMTS數據分析以及HPLC數據分析的指紋圖譜。在采用雙定性類型雙定量類型分析方式對20批次的實驗目標進行分析檢驗的時候，發現有8批次的實驗樣品在其化學組成成分數量方面、化學成分分布比例方面均為合的，其中有5批次實驗樣品在檢驗存在雙定性檢測數據不合格的問題，而剩余的7批次實驗分析數據顯示其含量偏低。

4 實驗討論

在采用隨機選擇方式抽查了20批次CMTS后，通過HPLC類型指紋圖譜鑒定檢測發現，各方面數據完全合格的產品共計有8批次，在雙定性類型檢測中結果不合格的共有5批次，在相似度數據檢測中顯示產品不合格的共計有7批次。因此，該實驗當中所建立的CSMT類型HPLC數據指紋圖譜檢技術能被用作于CSMT藥物生產中的質量控制環節。也表明了使用指紋圖譜類型數據分析技術以及變量類型的參數控技術能保證藥物生產當中的質量控制的效果。

參考文獻

[1]孫國祥，池劍玲，趙新.用HPLC指紋圖譜對復方丹參片的信息質量控制研究[J].中南藥學，2008，6（5）：747-752.

[2]孫國祥，池劍玲，宋宇晴.HPLC指紋圖譜控制復方丹參片質量[J].沈陽藥科大學學報，2008，25（12）：971-978.

[3]嚴玉平，同利琪，郭聰，等.復方丹參片指紋圖譜及含量測定研究[J].中成藥，2009，31（8）：1149-1151.

[4]張青云.復方丹參片脂溶性成分HPLC指紋圖譜初探[J].淮海醫藥，2004，22（1）：71-72.