CD62P在過敏性紫癜和紫癜性腎炎中的變化和臨床意義

葉樂珍 康國貴★

HSP（Henoch-Sch?nlein purpur，HSP）是兒童時期最常見的系統性血管炎，臨床常表現為雙下肢典型皮疹，并多伴有消化道﹑關節等多系統器官受損，當HSP累及腎臟，出現血尿﹑蛋白尿等臨床表現時，即為 HSPN（Henoch-Sch?nlein purpur nephritis，HSPN）。HSP的發病機制目前仍不明確，研究表面粘附分子異常激活可能在HSP的血管損傷中發揮重要作用。P-選擇素（P-selectin，CD62P）是粘附分子選擇素家族主要成員之一，參與機體炎癥反應﹑血栓形成等多種病理過程［1］，在腎臟疾病及風濕免疫性疾病的發生發展中起著重要作用［2-4］。但目前關于血﹑尿CD62P的動態研究并不多，因此開展本項實驗來探討CD62P在HSP及HSPN中的變化及作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2014年10月至2015年6月本院住院的HSP患兒共80例，均為初發病例，符合HSP或HSPN標準，并排除血小板減少性紫癜﹑系統性紅斑狼瘡，川崎病及合并嚴重心﹑肝﹑腎疾病等。所有患兒治療并隨訪6個月，根據病程中有無出現腎臟損害分為HSP組（n=48）及HSPN組（n=32）。其中HSP組男22例，女26例，平均年齡（6.69±2.60）歲；HSPN組中男20例，女12例，平均年齡（7.53±2.66）歲。另外選取同期來本院體檢的40例健康兒童作為健康對照組，其中男19例，女21例，平均年齡（7.05±2.35）歲。HSP組﹑HSPN組及健康對照組三組間的年齡﹑性別均無明顯差異（χ2=2.401，P=0.301；t=1.199，P=0.305）。

1.2 血CD62P的測定 采集入院當日及治療8周后患兒的外周靜脈血1ml，1h內送檢。取血標本0.1ml加入CD62P PE熒光單克隆抗體試劑10μl（美國BD公司），暗箱中避光反應30min后加入PBS液800μl，采用流式細胞儀（美國BD公司）技術檢測CD62P陽性血小板的百分比。

1.3 尿CD62P測定 收集入院當天及治療8周后患兒的小便50ml于干凈尿杯中，1h內送檢。將50ml尿液離心（1500rpm），（5min），留尿沉渣加PBS制成尿懸液，加CD62P PE熒光單克隆抗體試劑10ul，暗箱中避光反應30min后取出，加入溶血素1ml，離心（1500r/min，5min），PBS液洗滌3次，采用流式細胞儀（美國BD公司）技術進行檢測，上機后檢測104個血小板。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（）表示。各組別血﹑尿CD62P水平的比較采用t檢驗（三組間資料比較時采用SNK檢驗），相關性分析采用直線相關分析法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組別血CD62P水平變化及比較 見表1。

表1 各組別血CD62P水平的變化［%，（）］

表1 各組別血CD62P水平的變化［%，（）］

注：與對照組比較，*P＜0.05，與HSP組治療后比較，#P＜0.05

組別 治療前 治療后 t值 P值HSP組 1.95±1.42* 1.33±0.79 5.219 0.025 HSPN組 1.98±2.11* 2.04±2.97*# 0.630 0.430健康對照組 0.91±0.72 0.91±0.72 F值 6.844 1.808 P值 0.002 0.184

2.2 不同組別尿CD62P水平變化及比較 見表2。

表2 各組別尿CD62P水平的變化［%，（）］

表2 各組別尿CD62P水平的變化［%，（）］

注：與對照組比較，*P＜0.05，與HSP組治療后比較，#P＜0.05

組別 治療前 治療后 t值 P值HSP組 2.84±2.76* 1.69±1.31 14.244 0.000 HSPN組 13.82±10.28* 6.68±4.63*# 10.499 0.002健康對照組 1.67±1.47 1.67±1.47 F值 49.379 35.056 P值 0.000 0.000

2.3 血清及尿液CD62P相關性 比較HSP組及HSPN組患兒入院時的血清﹑尿CD62P水平，發現兩者均無顯著相關性（分別為r=-0.025，P=0.865；r=0.087，P=0.636，P 值均 ＞0.05）。

3 討論

作為兒童時期最常見的系統性血管炎，中性粒細胞及嗜酸性粒細胞等免疫炎性細胞的粘附遷移在HSP中發揮了關鍵的作用。病理顯示HSP患兒的中小型動脈壁上存在中性粒細胞的浸潤及其壞死性核碎片的沉積［7］，而動物研究亦表明患有HSP的大鼠及家兔的皮膚﹑腎臟及胃腸道等多個組織中存在炎性細胞的浸潤﹑血管充血滲出及病灶組織的壞死［8］。因此，炎癥是HSP發病的重要組成部分，而CD62P被認為是炎癥的重要介質和靶分子。在受到腺苷﹑凝血酶﹑胸苷磷酸化酶等刺激時，活化的血小板及內皮細胞weibelpalade小體可瞬時釋放CD62P，并與白細胞表面的CD62P糖蛋白配體 1（P-selectin glycoprotein ligand，PSGL-1）結合，使得白細胞運動減緩，并通過粘附級聯過程穿越血管遷移至病灶，進而啟動炎癥反應。同時，CD62P亦被認為是血小板和內皮細胞的活化標志，其可以活化血小板﹑減緩血液流速并促使血管內微血栓形成，而抑制P選擇素的表達不僅能夠減少CD62P介導的內皮細胞與白細胞的相互作用，還可以促進血管內血栓溶解。

鑒于HSP在病理上存在炎癥及微血栓的改變，推測血CD62P參與了HSP的發病過程。而本研究結果顯示HSP及HSPN患兒的血CD62P較對照組明顯增高，也進一步證實了推測。但是HSPN組患兒的血CD62P水平并未高于HSP組，兩者無顯著差異，提示血CD62P可能僅代表了全身血管炎性狀態及血小板功能變化，并不能較好的反映腎臟的受累情況。

Wu T等［9］的動物模型研究表明，給小鼠注射抗腎小球基底膜（GBM）抗體后CD62P即在腎小球內皮細胞表達，應用Elisa方法檢測尿CD62P水平明顯增高，表明尿CD62P可以反映腎臟局部的病變情況。在本研究中HSP組及HSPN組患兒的尿CD62P高于健康對照組，提示尿CD62P參與了HSP及HSPN的發生。而HSPN組患兒的尿CD62P又顯著高于HSP組，可能與血﹑尿CD62P的來源不同有關。尿CD62P中僅有小部分來自于從腎小球中濾過的血CD62P，其余大部分由腎臟局部的上皮細胞﹑內皮細胞及血小板活化而產生。同時，作者在血﹑尿CD62P的相關性研究中也發現兩者并不成正比，血CD62P增高并不代表尿CD62P也隨之增長，表明血CD62P反映了全身的炎性狀態，而尿CD62P則代表腎臟局部的病變情況，也更能準確顯示腎臟的損傷程度。

在本研究中經過8周治療后HSP組患兒的血CD62P已較前明顯下降，而HSPN組患兒的血CD62P值仍處于高水平，與治療前無顯著差異，提示HSPN組患兒全身炎癥持續時間明顯長于HSP組患兒，其病程更持久。治療8周后HSP組患兒的尿CD62P已與對照組無明顯差異，而HSPN組患兒的尿CD62P雖較前有下降，但仍高于對照組，提示HSP組患兒病情明顯改善，未出現腎臟損害，而HSPN組患兒腎臟局部病變程度雖較前有好轉，但尚未完全恢復正常，需警惕腎炎復發或加重。臨床中應盡量延長HSPN患兒的隨訪時間，推薦＞10年甚至終生隨訪。因此，血﹑尿CD62P的表達水平基本與患兒的病情變化基本相一致，且因為創傷小，家長易于配合等優點，臨床中可將血﹑尿CD62P作為反映HSP及HSPN病情變化的無創或微創指標。

本研究不足之處在于HSP患兒的隨訪問題，有14例HSP患兒因為各種原因失訪，導致低估了HSPN的發病率。而32例HSPN患兒中僅有3例患兒失訪，提示家長對于HSPN的重視程度明顯高于HSP。因此，對于尿CD62P明顯增高的患兒，需要警醒家長并注意密切監測，必要時及早干預，這對HSPN的早期發現及提高其治愈率具有重要的意義。

［1］ Zuchtriegel G, Uhl B, Hessenauer ME, et al． Spatiotemporal expression dynamics of selectins govern the sequential extravasation of neutrophils and monocytes in the acute inflammatory response．Arterioscler Thromb Vasc Biol,2015,35(2):296-302．

［2］ Wassel CL, Berardi C, Pankow JS, et al． Soluble P-selectin predicts lower extremity peripheral artery disease incidence and change in the ankle brachial index:The Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis(MESA)．Atherosclerosis,2015,239(2):405-411．

［3］ Schmitt-Sody M,Metz P,Gottschalk O．Platelet P-selectin is significantly involved in leukocyte-endothelial cell interaction in murine antigen-induced arthritis．Platelets,2007,18(5):365-372．

［4］ Wu T,Xie C,Wang HW,et al．Elevated urinary VCAM-1,P-selectin,soluble TNF receptor-1,and CXC chemokine ligand 16 in multiple murine lupus strains and human lupus nephritis．J Immunol,2007,179(10):7166-7175．

［5］ 中華醫學會兒科學分會免疫學組．兒童過敏性紫癜循證診治建議．中華兒科雜志,2013,51(7):502-507．

［6］ 中華醫學會兒科學分會腎臟病組．紫癜性腎炎的診治循證指南(試行)．中華兒科雜志,2009,47(2):911-913．

［7］ Ebert EC．Gastrointestinal manifestations of Henoch-Schonlein Purpura．Dig Dis Sci,2008,53(8):2011-2019．

［8］ Yanhong Li,Xiaochun Feng,Lan Huang,et al．Hematologic and immunological characteristics of Henoch-Schonlein purpura in rat and rabbit models induced with ovalbumin based on type III hypersensitivity．Sci Rep,2015,2015,5(2):8862-8868．

［9］ Wu T,xie C,Bhaskarabhatla M,et al．Excreted urinary mediators in an animal model of experimental immune nephritis with potential pathogenic significance．Arthritis Rheum,2007,56(3):949-959．