LRRFIP1在妊娠期高血壓疾病患者血清中的表達及臨床意義

吳 怡，代維棟，符喬珊

(西安市第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710038)

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorders of pregnancy, HDP)是妊娠期特有而又常見的一種并發(fā)癥，主要包括妊娠期高血壓、子癇前期、子癇、原發(fā)高血壓并妊娠、繼發(fā)高血壓并妊娠等[1]。HDP以妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、水腫及蛋白尿為主要特征，且伴有全身多器官功能損害，嚴重者可出現(xiàn)抽搐、昏迷、腦出血、心腎功能衰竭，甚至造成母嬰死亡[2]。研究表明凝血與纖溶系統(tǒng)平衡紊亂在HDP的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，且與產(chǎn)婦預后密切相關[3]。富亮氨酸重復序列相互作用蛋白1(leucine-rich repeat flightless-interacting protein 1, LRRFIP1)能與血小板細胞膜上的相關蛋白相互作用，進而改變血小板細胞的骨架結構，影響血小板的凝血功能[4]。本文通過檢測HDP患者和健康孕婦妊娠晚期血小板參數(shù)、凝血相關指標、血漿LRRFIP1、α-顆粒膜蛋白(alpha-granule membrane protein, GMP-140)和D-二聚體(D-dimer)的改變，探討LRRFIP1表達與HDP患者凝血功能及血栓前狀態(tài)的相關性，以期為HDP的診斷、評估和治療提供新的科學依據(jù)和思路。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年5月至2016年5月西安市第四醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的妊娠晚期HDP患者70例作為觀察組，正常孕婦30例作為對照組。按照第八版《婦產(chǎn)科學》診斷及分類標準[5]，將HDP患者分為妊娠高血壓組26例，平均(27.14±2.74)歲，孕(37.19±2.11)周；輕度子癇前期組24例，平均(27.33±2.91)歲，孕(36.33±1.99)周；重度子癇前期組20例，平均(27.45±2.65)歲，孕(35.25±1.87)周。正常妊娠組孕婦平均(26.30±2.31)歲，孕(37.60 ±1.63)周。各組孕婦年齡、孕周等一般資料的差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，有可比性。所有研究對象均為單胎妊娠，均無其他合并癥，近期未使用影響凝血/纖溶系統(tǒng)及血小板功能的藥物。所有研究對象及家屬均知情同意。

1.2血小板參數(shù)及凝血指標的檢測

抽取空腹安靜狀態(tài)下各組受試者的靜脈全血，部分注入檸檬酸鈉抗凝管，3000r/min離心10min，取血漿，采用STAGO全自動血凝分析儀檢測凝血酶原時間(PT)、部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(FIB)等凝血指標；另一部分注入乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)血常規(guī)專用抗凝管，采用希森美康XS800i全自動血細胞分析儀檢測血小板計數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)等血小板參數(shù)。

1.3血漿LRRFIP1、GMP-140和D-dimer的檢測

取各組受試者的新鮮抗凝靜脈全血，3 000r/min離心10min，分離血漿，采用 ELISA 法對檢測血漿LRRFIP1、GMP-140和D-dimer水平。ELISA試劑盒購自上海康朗生物科技有限公司，所有操作均按照試劑盒說明書規(guī)范進行。

1.4統(tǒng)計學方法

2結果

2.1 HDP患者與正常妊娠孕婦凝血指標比較

如表1所示，妊娠晚期HDP患者PT、APTT、TT值均低于正常妊娠婦女，4組PT、APTT、FIB比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。與正常妊娠組相比，輕度子癇前期組PT、APTT均顯著減少(t值分別為-2.264、-2.458，均P<0.05)；與輕度子癇前期組相比，重度子癇前期組PT、APTT亦顯著減少(t值分別為-2.026、-2.020，均P<0.05)；各組間TT值比較差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。妊娠晚期HDP患者FIB水平隨病情加重呈遞增趨勢，輕度子癇前期組較正常妊娠組FIB值顯著增加(t=2.031，P<0.05)，而重度子癇前期組較輕度子癇前期組FIB值亦顯著增加(t=2.196，P<0.05)。

表1 HDP患者與正常孕婦凝血指標的比較

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.2 HDP患者與正常妊娠孕婦血小板參數(shù)比較

如表2所示，與正常妊娠組相比，輕度子癇前期組PLT顯著減少(t=-2.206，P<0.05)，重度子癇前期組PLT值較輕度子癇前期組亦顯著減少(t=-2.037，P<0.05)。輕度子癇前期組MPV、PDW均較正常妊娠組顯著增加(t值分別為2.413、2.017，均P<0.05)，重度子癇前期組MPV、PDW較輕度子癇前期組亦顯著增加(t值分別為2.488、2.192，均P<0.05)。

Table 2 Comparison of platelet parameters in HDP patients and normal pregnant

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.3 HDP患者與正常妊娠晚期孕婦血清LRRFIP1、GMP-140、D-dimer的表達

與正常妊娠組相比，妊娠晚期HDP患者血漿LRRFIP1、GMP-140、D-dimer表達水平均隨病情加重呈遞增趨勢，見表3。輕度子癇前期組LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值較正常妊娠組顯著增加(t值分別為3.965、3.759、4.364，均P<0.05)，而重度子癇前期組LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值較輕度子癇前期組亦顯著增加(t值分別為2.220、3.496、3.309，均P<0.05)。

Table 3 Expressions of LRRFIP1, GMP-140 and D-dimer in HDP patients and normal pregnant

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.4 LRRFIP1表達與HDP患者凝血功能的相關分析

為探討LRRFIP1的表達上調是否與HDP患者凝血功能異常相關，分別對LRRFIP1表達與PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer水平作相關性分析，結果顯示LRRFIP1的表達與PLT呈顯著負相關(r=-0.28，P<0.05)，與FIB呈顯著正相關(r=0.25，P<0.05)，與D-dimer呈顯著正相關(r=0.42，P<0.01)，與GMP-140呈顯著正相關(r=0.44，P<0.01)，見表4。

表4 HDP患者LRRFIP1表達與PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer的相關性

Table 4 Correlation between LRRFIP1 expression and PLT, FIB, GMP-140 and D-dimer in HDP patients

3討論

3.1 LRRFIP1在HDP患者血清中的表達及其意義

LRRFIP1蛋白能與富含亮氨酸重復序列的蛋白相互作用，參與調控NF-κB活性，Wnt/β-catenin信號通路及細胞骨架重排等多種生物學過程[6]。作為血小板細胞骨架的組成部分，LRRFIP1可與肌動蛋白重塑蛋白Flightless-1相互作用，影響血小板活化進程，進而影響血小板凝血功能，且敲除LRRFIP1可顯著減少血栓區(qū)域[4]。此外，干擾LRRFIP1基因的表達被證實能夠抑制小鼠下肢深靜脈血栓的形成[7]。這些研究提示LRRFIP1可能通過影響血小板的結構與功能進而影響機體凝血功能及血栓形成。

妊娠期間，尤其是妊娠晚期，孕婦體內的凝血、抗凝和纖溶功能均會發(fā)生明顯的生理變化，以適應胎兒的健康生長和順利娩出[3]。因此，在正常孕婦妊娠晚期，其體內的凝血與纖溶系統(tǒng)往往處于一種高水平的動態(tài)平衡。當患上HDP時，患者體內的凝血因子及凝血系統(tǒng)活性增加，而抗凝因子活性減少，致使凝血和纖溶系統(tǒng)失衡，纖溶亢進，使其與正常孕婦相比更具血栓形成或產(chǎn)后出血傾向[8]。在本研究中，與正常晚期妊娠孕婦相比，HDP患者，尤其是重度子癇前期患者的PT、APTT、PLT值均顯著低于正常孕婦，而表明其體內凝血因子含量顯著增加，血小板顯著減少，凝血纖溶系統(tǒng)處于紊亂狀態(tài)。此外，HDP患者的FIB、MPV、PDW值均隨病情加重呈遞增趨勢，且輕度子癇和重度子癇前期患者FIB、MPV、PDW值均顯著高于正常孕婦，表明HDP患者凝血酶活性升高，血小板聚集加快，纖溶亢進，血液處于高凝和血栓前狀態(tài)，并且機體內存在血小板的異常活化和增生。

進一步研究顯示，與正常孕婦相比，HDP患者血漿LRRFIP1水平隨病情加重呈遞增趨勢，且輕度子癇和重度子癇前期患者LRRFIP1值較正常孕婦顯著增加，表明HDP患者體內存在LRRFIP1的異常表達，提示LRRFIP1可能通過影響HDP患者的血小板結構和功能破壞其凝血與纖溶系統(tǒng)的平衡，進而導致其凝血功能障礙。

3.2 LRRFIP1與HDP患者凝血指標的相關性

有效的血小板質量和數(shù)量在人體生理性和病理性凝血、止血過程中均發(fā)揮著至關重要的作用[3]。FIB是凝血途徑的重要環(huán)節(jié)之一，它能與活化的血小板相互作用，介導血栓的形成[8]。在本研究中，HDP患者PLT值顯著低于正常妊娠婦女，而FIB顯著高于正常孕婦，且相關性分析表明HDP患者血漿LRRFIP1水平與PLT呈顯著負相關，而與FIB顯著正相關。這些結果提示LRRFIP1可能參與HDP患者血小板的數(shù)量與功能的改變，進而影響機體凝血與纖溶系統(tǒng)的平衡。

特異性纖維蛋白降解產(chǎn)物D-dimer表達增加，提示機體纖溶功能亢進[9]；血小板α顆粒膜蛋白GMP-140表達增加，標志著血小板的活化[10]。本研究中，HDP患者血漿D-dimer和GMP-140均表達上調，且隨病情加重呈遞增趨勢，進一步表明HDP患者機體中存在血小板的異常活化，血液高凝和纖溶亢進現(xiàn)象。相關性分析表明，HDP患者血漿LRRFIP1水平與GMP-140、D-dimer顯著正相關，提示LRRFIP1可能通過影響血小板活化參與了HDP患者凝血纖溶系統(tǒng)的生理變化，致使HDP患者處于血液高凝狀態(tài)，血栓形成危險增加。

綜上所述，LRRFIP1在妊娠高血壓疾病中存在表達上調，可能通過促進血小板的異常活化使患者處于血液高凝和血栓前狀態(tài)。因此，本研究將為臨床檢測和預防血栓形成提供新的監(jiān)測指標和判斷、治療依據(jù)。然而，LRRFIP1影響妊娠高血壓疾病患者凝血功能的具體靶標和機制尚不清楚，還需要后續(xù)探討。

[參考文獻]

[1]Ohkuchi A,Hirashima C,Takahashi K,etal.Prediction and prevention of hypertensive disorders of pregnancy[J].Hypertens Res,2017,40(1):5-14.

[2]Ye C,Ruan Y,Zou L,etal.The 2011 survey on hypertensive disorders of pregnancy (HDP) in China: prevalence, risk factors, complications, pregnancy and perinatal outcomes[J].PLoS One, 2014,9(6):e100180.

[3]Han L,Liu X,Li H,etal.Blood coagulation parameters and platelet indices: changes in normal and preeclamptic pregnancies and predictive values for preeclampsia[J].PLoS One,2014,9(12):e114488.

[4]Goodall A H,Burns P,Salles I,etal.Transcription profiling in human platelets reveals LRRFIP1 as a novel protein regulating platelet function[J].Blood,2010,116(22):4646-4656.

[5]謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學[M].8版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:64-71.

[6]Gubern C,Camós S,Hurtado O,etal.Characterization of Gcf2/Lrrfip1 in experimental cerebral ischemia and its role as a modulator of Akt, mTOR and β-catenin signaling pathways[J].Neuroscience,2014,268:48-65.

[7]Yin X,Wu S,Wang Z,etal.Anti-thrombosis effect of LRRFIP1 shRNA lentivirus in a mouse model of deep vein thrombosis[J].Thromb Res,2013,132(1):127-131.

[8]周三琴.妊娠高血壓疾病纖溶及凝血指標的變化及臨床意義[J].中國婦幼健康研究, 2016,27(8):1009-1011.

[9]何雪儀,王晨虹.外周血sFlt-1、PlGF、25-羥基維生素D、D-二聚體、vWF及P-選擇素等指標預測子癇前期的價值[J].國際婦產(chǎn)科學雜志,2016,43(3):308-311.

[10]石磊,顧漢平.HDCP與子癇各期外周血D-二聚體及單側子宮動脈血流比較[J].中國婦幼健康研究,2017,28(7):871-873.