明目疏脈片對鼠抗血栓、抗凝血、擴張血管的作用

魏 丹 韓 寧 高林林 蔡文瑞 王兆華 李亞萍 劉早霞

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院眼科中心，吉林 長春 130031)

明目疏脈片主要用于治療視網(wǎng)膜動脈硬化、血管阻塞等眼缺血性疾病及腦血管缺血性疾病等。本文對明目疏脈片的主要藥效學(xué)進行研究。

1 材料與方法

1.1儀器 紫外光可見光分光光度計UV-2000(上海尤尼克),高速冷凍離心機TGL-16G(上海安亭),恒溫水浴振蕩器DKZ-2B(上海一恒),DHG-9053A型鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒),體外血栓形成儀DY-S5(北京宇華國際技術(shù)公司)。

1.2試藥 明目疏脈片由當歸、桃仁、赤芍、紅花、熟地、川芎、枸杞、菟絲子、丹參、白蒺藜組成，0.3 g/片，為本課題組研制，批號070401。臨用前用蒸餾水配成含生藥0.2 g/ml混懸液。和血明目片，0.3 g/片，批準文號國藥準字Z20025067，西安碑林藥業(yè)股份有限公司，批號070901；血纖維蛋白原(批號140626-200608)、凝血酶(批號140626-200608)購自中國藥品生物制品檢定所；其他試劑均為國產(chǎn)分析試劑。

1.3動物 昆明種小鼠,雌雄各半,體重18～22 g;Wistar 大鼠,雌雄各半,體重180～220 g,購自長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK(吉)-2011-0003，合格證號：201600011928。

1.4方法

1.4.1凝血時間檢測〔1,2〕小鼠50 只,隨機分為5 組,每組10 只，為對照組(同體積生理鹽水)，陽性組(和血明目片1.0 g/kg)，低、中、高劑量組(明目疏脈片0.5、1.0、2.0 g/kg)。每組每天灌胃給藥1次，共7 d，末次灌胃給藥1 h 后,抽血1 ml，放進試管，37℃水浴3 min，檢測血液凝固時間。

1.4.2凝血酶原時間檢測〔2〕大鼠50 只,隨機分為5 組,每組10只，為對照組(同體積生理鹽水)，陽性組(和血明目片1.0 g/kg)，低、中、高劑量組(明目疏脈片0.5、1.0、2.0 g/kg)。每組每天灌胃給藥1次，共7 d，末次灌胃給藥1 h后,取血，加檸檬酸鈉(0.10 mol/L)抗凝,混勻,3 000 r/min離心15 min,取上清按文獻〔2〕方法進行。拿試管3只，每管放血漿、0.025 mol/L的CaCl2及兔腦浸出粉各0.1 ml，37℃恒溫水浴，同時開始計時，記錄液面不再變動時間，計算3管的時間平均值，計算凝血酶原時間。

1.4.3纖維蛋白原含量測定 將1.4.2中大鼠血漿加入離心管中,56℃加溫10 min,3 000 r/min離心10 min,按Bradford 法〔3〕測定血纖維蛋白原含量。

1.4.4血凝塊的溶解率計算〔4〕取小鼠血1 ml，凝結(jié)后，用生理鹽水洗60 min后，將凝塊烘干稱重為W。另用同樣方法取血漂洗，將凝塊直接加入試管中，明目疏脈片給藥組分別加明目疏脈片2 ml(0.8、0.4、0.2、0.1 mg/ml),陽性組放入等體積和血明目片2 ml(0.2 mg/ml),對照組加等體積生理鹽水。于37℃保溫1、2、4、6、8 h后，將凝塊取出，用生理鹽水洗60 min后，烘干稱重為G，按下式計算血凝塊溶解率。血凝塊溶解率(%)=〔(W-G)/W〕×100%。

1.4.5體內(nèi)血栓形成溶解實驗 大鼠分組與給藥同1.4.2。各組每天灌胃給藥1次，共7 d，末次灌胃給藥1 h后,各組腹腔注射3% 戊巴比妥鈉(1 ml/kg)麻醉,電刺激大鼠頸動脈以形成血栓,檢測血栓形成時間。

1.4.6體外血栓形成實驗 大鼠分組給藥同1.4.2，末次灌胃給藥1 h后,3% 戊巴比妥鈉(1 ml/kg)腹腔注射麻醉,沿腹中線打開腹壁,腹主動脈抽血約1.8 ml,加進硅化膠管中,將膠管兩端對接緊密,放入血栓形成儀中,37 ℃恒溫15 min,拿出膠管中血栓置于濾紙上,吸凈表面血液,測血栓長度、濕重、干重,并記錄。

1.4.7改善微循環(huán)、擴張血管作用 小鼠分組與給藥同1.4.1。每組每天灌胃給藥1次，共7 d，末次灌胃給藥1 h后,3 % 戊巴比妥鈉(1 ml/kg)腹腔注射麻醉,用WX-7533型多部位微循環(huán)生物顯微鏡(80倍)觀測給藥前后小鼠耳廓靜脈直徑及血液流態(tài)。以每只小鼠給藥前后變化做自身對照。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS22.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組凝血時間、凝血酶原時間、纖維蛋白原含量、血凝塊溶解率、血栓形成時間比較 與對照組比較，陽性組，高、中、低劑量組凝血時間、凝血酶原時間、血栓形成時間均顯著延長(P<0.05,P<0.01,P<0.001)；纖維蛋白原含量顯著降低(P<0.05,P<0.01)；見表1。對照組、陽性組、明目疏脈片0.8 mg/ml、0.4 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1 mg/ml組血凝塊溶解率分別為：(14.87±1.98)%、(25.94±3.01)%、(35.96±4.75)%、(31.65±4.11)%、(29.87±3.87)%、(25.81±3.13)%。與對照組比較，其余5組血凝塊溶解率均顯著升高(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。

表1 各組凝血酶原、凝血時間、血栓形成時間、纖維蛋白含量比較

與對照組比較：1)P<0.05,2)P<0.01，3)P<0.001；下表同

2.2各組血栓濕重、干重、長度比較 與對照組比較，陽性組、高、中、低劑量組血栓濕重、干重、長度均顯著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。見表2。

表2 各組血栓濕重、干重、長度比較

2.3各組耳廊靜脈血管直徑比較 見表3。給藥后小鼠耳廓靜脈血流由粒流變?yōu)榫€流增多，流速加速，血流量顯著增加。明目疏脈片高、中、低劑量組給藥后靜脈血管直徑差值顯著高于對照組(P<0.05,P<0.001)。明目疏脈片對小鼠耳廓血管具有擴張、增進血流量及改進微循環(huán)作用。

表3 各組耳廓靜脈血管直徑比較

3 討 論

本研究證明，明目疏脈片低、中、高劑量組均能明顯增加小鼠、大鼠凝血酶原時間；并且同劑量時，與和血明目片相比，作用略強。明目疏脈片具有較好的溶解血凝塊作用，強于和血明目片〔5〕。明目疏脈片能顯著減少大鼠體外血栓長度，降低血栓的濕重及干重，顯著延長大鼠頸動脈血栓形成時間，與和血明目片相比，作用略強，說明明目疏脈片具有明顯抗血栓作用。本實驗初步探討明目疏脈片抗血栓作用機制，可能為明目疏脈片能減低纖維蛋白原含量,抑制血液凝固過程，從而抑制血栓的形成。和血明目片是目前眼科臨床上常用的促進玻璃體腔積血吸收、擴張視網(wǎng)膜微血管增加視網(wǎng)膜供血供氧作用的藥物，根據(jù)我們實驗結(jié)果，明目舒脈片可較和血明目片有更明顯的抗血栓和擴張血管作用。

4 參考文獻

1Zhang YL,Xi MZ,Choi YB,etal.Antithrombotic effect of fermented ophiopogon japonicus in thrombosis-induced rat models〔J〕.J Med Food,2017;20(7):637-45.

2徐淑云.藥理學(xué)實驗方法學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1270.

3Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding〔J〕.Anal Biochem,1976;72:248-54.

4付曉春,李少鵬,汪小根,等.葒草苷的抗血栓作用研究〔J〕.中國藥房，2006;17(17):1292-4.

5陳 修，陳維洲，曾貴云.心血管藥理學(xué)〔M〕.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997:570.