中老年女性壓力性尿失禁患者盆底組織轉化生長因子-β1及雌激素受體的表達及臨床意義

劉兆春 劉曉婉 趙 霞

(石河子大學醫學院第一附屬醫院婦科，新疆 石河子 832000)

壓力性尿失禁(SUI)是尿失禁中最常見的類型，約占尿失禁患者總數的49%〔1，2〕。由于男女尿路解剖結構不同，SUI患者絕大部分為女性，且多為絕經后的女性。女性在絕經后生理上最大的改變為卵巢功能明顯下降，同時其雌激素分泌量也明顯降低，進而導致一系列的代謝紊亂，雌激素受體(ER)在其中發揮了重要的作用，因此可以推測絕經期的女性發生SUI可能與ER的變化有關〔3〕。轉化生長因子(TGF)-β1是一種具有調節細胞生長和分化功能的蛋白肽，能促進合成以膠原為主的間質蛋白質。Ⅰ型膠原蛋白(Collagen Ⅰ)是筋膜、皮膚、肌鍵中的主要成分，其含量可影響盆底結構。相關研究顯示〔4〕，TGF-β1能增加體外培養細胞Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA的表達，另有研究顯示〔5〕，SUI的發生與Ⅰ型和Ⅲ型膠原的含量有關，因此可以推測TGF-β1可能影響了SUI的發生發展。本研究通過探討中老年女性SUI患者盆底組織TGF-β1及ER的表達及臨床意義，進一步研究SUI的發生發展機制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年5月至2017年6月在石河子大學醫學院第一附屬醫院接受治療的中老年女性SUI患者200例作為SUI組，納入標準：(1)均符合《壓力性尿失禁的診斷》中相關標準〔6〕；(2)年齡≥40歲；(3)臨床病歷資料齊全。排除標準：(1)近3個月內服用過激素類藥物者；(2)合并有嚴重器質性疾病者；(3)患有惡性腫瘤者。選取同期收治的盆腔臟器脫垂(POP)患者50例納入POP組，另外選取無POP的良性子宮病變患者50例納入對照組，兩組均無尿失禁癥狀。三組患者一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。具有可比性。研究對象對本次研究涉及內容均知情同意，且本研究獲醫院倫理委員會審批通過。

表1 三組年齡、產次、體質量指數(BMI)比較

1.2方法

1.2.1組織標本 對照組和POP組患者在進行陰式子宮切除術或開腹子宮切除術時獲取陰道前壁12點處組織，SUI組患者在進行經陰道無張力尿道中段懸吊術或Burch手術時獲取陰道前壁12點處組織。用生理鹽水沖洗離體后組織上的血跡，之后將其置入10%甲醛液中固定24 h，再進行脫水、石蠟包埋、切片處理。

1.2.2蘇木素-伊紅(HE)染色 采用二甲苯對組織切片進行脫蠟處理，后置于梯度酒精中HE染色約10 min，置于分化液鹽酸乙醇30 s，水洗終止分化。用自來水浸泡返藍5 min，伊紅復染3 min，后用自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡檢。

1.2.3免疫組化法檢測ER、TGF-β1、Collagen I的表達 采用60℃恒溫烤箱對切片進行融蠟，二甲苯脫蠟，后置于梯度酒精中，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，每次3 min，0.3%過氧化氫孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min，置入枸櫞酸鹽緩沖液中進行抗原修復，PBS沖洗3次，每次3 min，滴加牛血清白蛋白(BSA)封閉20 min，滴加稀釋好的一抗(兔抗人TGF-β1多克隆抗體、鼠抗人ER多克隆抗體，鼠抗人Collagen I多克隆抗體)，4℃過夜。PBS沖洗3次，每次3 min，二氨基聯苯胺(DAB)顯色，在顯微鏡下對顯色情況進行觀察，顯色結果滿意后終止反應，自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡檢。

1.3判斷標準 在400倍高倍鏡下觀察每張切片的細胞染色情況。TGF-β1陽性著色為胞質或胞膜呈棕黃色，計算每組切片中陽性細胞的占比，若陽性細胞≤10%判為陰性(-)；若陽性細胞在11%～30%則判為弱陽性(+)；若陽性細胞在31%～70%判為陽性()，若陽性細胞>70%判為強陽性()，陽性表達率=〔(+)例數+()例數+()例數〕/總例數×100%。ER陽性著色為細胞核呈棕黃色，由于ER陽性細胞少，均以同種細胞中ER陽性率表示染色情況。以乳腺癌作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。Collagen I陽性著色為胞質呈黃色，利用圖像分析儀測量其灰度值。

1.4統計學方法 應用SPSS19.0軟件，計數資料采用χ2檢驗，計量資料三組比較采用單因素方差分析，采用Spearman相關性分析研究ER、TGF-β1、Collagen Ⅰ的相關性。

2 結 果

2.1三組TGF-β1、ER陽性率比較 SUI組TGF-β1陽性率為22.00%(44例)，且均為+；POP組TGF-β1陽性率為18.00%(9例)，且均為+；對照組TGF-β1陽性率92.00%，+11例，22例，13例。SUI組、POP組TGF-β1陽性率低于對照組(P<0.05)，SUI組和POP組之間TGF-β1陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。SUI組、POP組、對照組的ER陽性率分別為0.50%(1/200)、2.00%(1/50)、4.00%(2/50)，SUI組、POP組ER陽性率低于對照組，差異有統計學意義(χ2=3.014，2.810；P=0.014，0.032)，SUI組和POP組之間ER陽性率比較差異無統計學意義(χ2=1.862，P=0.089)。

2.2三組Collagen Ⅰ灰度值比較 SUI組、POP組及對照組的Collagen Ⅰ灰度值分別為(96.36±0.31)、(98.61±0.40)、(101.14±0.24)，SUI組、POP組的Collagen Ⅰ灰度值低于對照組，差異有統計學意義(t=4.151，3.742，P=0.015，0.023)，而SUI組和POP組之間的Collagen Ⅰ灰度值比較差異無統計學意義(t=2.018，P=0.083)。

2.3ER與Collagen Ⅰ相關性分析 ER與Collagen Ⅰ表達呈正相關(r=0.267，P=0.028)。

3 討 論

SUI是泌尿外科常見的老年性疾病，同時常合并POP〔7〕。國際尿控協會(ICS)將SUI定義為一種在進行大笑、咳嗽、噴嚏或提重物等腹壓增高活動時出現不自主的尿液溢出的疾病〔8〕。SUI雖然不會對患者的生命構成威脅，但會對患者日常活動造成嚴重的影響，并可導致患者出現抑郁、焦慮、自尊感下降等心理疾病。女性盆底主要由封閉骨盆出口的肌肉和筋膜組成，當尿道支持系統及括約肌關閉系統異常時將會出現控尿問題，同時完整的下尿路神經纖維支配也對控制排尿有重要的作用，因此SUI患者常伴有膀胱括約肌或神經功能受損〔9〕。絕經后的女性SUI發生率明顯高于未絕經的女性，這提示SUI的發生與雌激素及其受體ER有關〔10〕。相關研究結果顯示〔11〕，SUI女性患者的盆底支持組織膠原蛋白含量明顯降低，使得盆底支持組織出現彈性下降，盆底肌收縮功能異常，出現盆底松弛。TGF-β1是一種關鍵性的生長因子，可抑制膠原酶等金屬蛋白酶的分泌，同時增加金屬蛋白酶抑制劑的活性，進而抑制膠原降解。因此，TGF-β1水平可直接影響盆底支持組織的功能，進而影響SUI發生與發展〔12〕。

本研究結果顯示，SUI和POP的發生或與TGF-β1、ER含量降低有關。對上述結果進行分析，雌激素通過與ER發生作用，能改善盆底血液循環、促進盆底組織修復、增加盆底肌力等。中老年女性由于卵巢功能減退，導致雌激素含量降低，出現盆底血供減少，陰道黏膜上皮退化，盆底肌肉組織退化萎縮，尿道上皮萎縮，黏膜下血管減少，上述變化綜合導致尿道閉合障礙，進而發生SUI〔13〕。康建萍等〔14〕的研究表明，妊娠晚期SUI患者孕激素受體(PR)和ER的含量低于無尿失禁者，這與本研究結果類似，同時也說明PR的含量也與SUI有關。TGF-β1隸屬具有調節細胞生長和分化能力的TGF-β家屬，能促進膠原合成，增加以膠原為主的間質蛋白質合成，并且可以影響平滑肌中Smad2及基質金屬蛋白酶的表達，從多個方面影響盆底組織的功能〔15〕。SUI患者盆底組織中的TGF-β1含量降低，可導致盆底組織中的總膠原蛋白含量降低，出現盆底組織松弛，無法維持正常尿道閉合壓，出現尿失禁〔16〕。本文結果說明SUI患者盆底組織的Collagen Ⅰ含量較低，筋膜、皮膚、肌鍵、韌帶中均富含Collagen Ⅰ，膠原的總含量、構成可影響盆底結締組織的張力和松弛性，進而影響到尿道閉合功能。因此，SUI的發生與Collagen I含量降低有直接的關系。本研究結果說明二者存在一定的聯系，通過協同作用影響SUI的發生與發展，但其聯系的內在機制還有待進一步研究。

4 參考文獻

1鄒艷芬，洪 莉，譚愛麗，等.不同治療方式對產后壓力性尿失禁的療效評估〔J〕.現代生物醫學進展，2016；16(32)：6256-60.

2楊冬來，艾 浩.絕經后壓力性尿失禁患者盆底肌電圖特征研究〔J〕.實用婦產科雜志，2016；32(8)：589-92.

3鄭文力，鄭斌嬌，陳雙忠，等.妊娠期壓力性尿失禁與雌、孕激素受體表達的相關性分析〔J〕.中國婦幼保健，2016；31(11)：2268-70.

4高 亮，陳 默，岳 萍，等.溫針灸對膝骨關節炎兔膝關節軟骨轉化生長因子β1和胰島素生長因子Ⅰ水平的影響〔J〕.針刺研究，2015；40(3)：229-32.

5Tang J，Liu C，Min J，etal.Potential therapeutic role of punicalagin against mechanical-trauma-induced stress urinary incontinence via upregulation of Nrf2 and TGF-β1 signaling：Effect of punicalagin on mechanical trauma induced SUI〔J〕.Int Urogynecol J，2017；28(6)：947-55.

6楊 欣，談 誠，安 方，等.尿動力學檢查與陰道前壁重度脫垂患者手術前后膀胱過度活動癥癥狀關系的前瞻性研究〔J〕.中華婦產科雜志，2014；49(11)：829-33.

8羅曉梅，駱迎春，楊 靜，等.仿生物理治療聯合補中益氣丸對子宮全切術患者盆底功能康復效果的影響〔J〕.現代中西醫結合雜志，2015；24(20)：2171-3，2178.

9戴 星.生物反饋治療絕經后婦女壓力性尿失禁的效果〔J〕.中國老年學雜志，2016；36(24)：6214-5.

10劉 娟，曾 潔，王海蘭，等.生物反饋盆底肌訓練治療壓力性尿失禁的療效分析〔J〕.中華婦產科雜志，2014；49(10)：754-7.

11盧燕燕，蔣美萍.多種因素對女性壓力性尿失禁的影響研究〔J〕.中國婦幼保健，2014；29(17)：2705-7.

12張旭勇，夏 杰，楊 濤，等.TGFβR Ⅰ和TGFβR Ⅱ在肝細粒棘球蚴外囊壁中的表達〔J〕.醫學研究生學報，2016；29(1)：66-9.

13姜 麗，王霞紅，吳氫凱，等.妊娠期發生盆底功能障礙的影響因素分析〔J〕.國際婦產科學雜志，2014；41(2)：204-6.

14康建萍，沈 霞，耿茂林，等.雌、孕激素相關受體表達和松弛素水平與妊娠晚期壓力性尿失禁相關性研究〔J〕.中國婦幼保健，2016；31(11)：2285-7.

15Sj?str?m M，Umefjord G，Stenlund H，etal.Internet-based treatment of stress urinary incontinence：1-and 2-year results of a randomized controlled trial with a focus on pelvic floor muscle training〔J〕.BJU Int，2015；116(6)：955-64.

16馬雙玲，王魯文，馬學玲，等.TGF-β1/CTGF信號傳導通路在女性壓力性尿失禁發生中的研究〔J〕.中國婦幼保健，2014；29(11)：1763-6.