防老化血液分離膠的制備與應用

近年來，生物醫學和醫院實驗室面臨越來越多的常規、專業的血液診斷測試?，F代的儀器已能夠自動裝載血液樣本，并程序化進行測試。臨床檢驗中檢測很多需要以血清成分作為分析樣本，多數情況需要及時分離血清,以避免纖維蛋白和溶血的影響。如何快速、簡單地分離血清, 是醫學檢驗中迫切需要解決的問題[1]。傳統的血清分離方法是將凝固后的血液在高速離心條件下，使血清與血細胞分離，但初步分離后的血液組分常規放置條件下會相互擴散，且需進行樣本轉移。采用血液分離膠是目前解決這個問題的最好方法。但在實際應用中，常遇到血液分離膠采血管分離效果不佳的情況，例如：采血管中出現分離膠碎片或油滴漂浮在血清表面或懸浮于血清中；分離膠還會對某些檢測結果產生一定的干擾[2，3]。

目前,血液分離膠的制備方法在我國較少文獻及專利報道,某些大醫院使用的分離膠都是國外產品。國外專利報道的血液分離膠的主要成份為聚酯_硅石粉和聚苯乙烯- 苯甲醛衍生物,存在著制備復雜和成本較高等缺點, 為此筆者進行了充分論證，選用天然橡膠為主要原料進行血液分離膠的制備研究[4，5]。

一、材料與方法

(一)研究對象

研究防老化血液分離膠在采血管中粘度、密度及溶血率的變化，研究防老化分離膠制備的采血管與無添加劑管、日本積水血液分離膠制備的采血管臨床生化24項檢測結果的一致性。

(二)儀器與試劑

貝克曼CX7、CX9 全自動生化分析儀及其原裝配套試劑。

電子分析天平FA2104 上海恒平科學儀器有限公司

旋轉粘度計NDJ-5S(N) 上海上天精密儀器有限公司

無添加劑采血管 批號：150706 福州長庚醫療器械有限公司

防老化血液分離膠 批號：D160128 福州長庚醫療器械有限公司

日本積水血液分離膠 批號：150705 福州長庚醫療器械有限公司

獻血者血液

(三)采血管制備

按照實驗要求通過“預置添加劑→添加劑干燥→預置真空→貼標標識”工序制備防老化血液分離膠采血管300支、日本積水血液分離膠采血管50支。生產過程各工序控制能力經過確認(各工序控制能力Cpk[6]均達到A+級)，采血管產品質量要求通過歐盟標準(EN14820-2004)[7]和行業標準(YY0314-2007)[8]全項目檢測。

(四)檢測方法

1.粘度：取防老化血液分離膠20克，使用旋轉粘度計檢測粘度，檢測50次，記錄產品粘度；產品常溫保存24個月后再次取20克防老化血液分離膠檢測粘度，檢測50次。

2.密度：取防老化血液分離膠采血管50支，根據重量與體積測產品密度；常溫保存24個月后取同批產品50支再次根據重量與體積測產品密度。

3.溶血率：取防老化血液分離膠采血管50支，按《醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學試驗方法》[9]中“溶血試驗”要求測定產品溶血率；常溫保存24個月后取同批產品50支再次檢測產品溶血率。

4.生化檢測：取防老化血液分離膠制備的采血管(試驗組)和無添加劑采血管(對照組1)、日本積水血液分離膠制備的采血管(對照組2)各50支，并一一對應，按靜脈采血法要求每組抽取同一獻血者血液進行臨床常規生化24項(BUN、CRE、UA、TP、ALB、ALT、AST、ALP、r-GT、CFA、TB、DB、CK、CK-MB、LDH、HBDH、CHO、TG、P、GLU、K、NA、CL、CA)檢測。

(五)數據統計分析

所有實驗數值以均數±標準差(x±s)表示，以t檢驗進行統計學處理，P﹤0.01表明差異有統計學意義，差異顯著；P>0.05表明差異無統計學意義。

二、結 果

(一)實驗組防老化血液分離膠粘度為20.78±0.91KPa·s，對照組為20.82±0.94KPa·s(t =0.131，P>0.05)。

(二)實驗組防老化血液分離膠密度為1.047±0.002g/cm3，對照組為1.048±0.002 g/cm3(t =1.520，P>0.05)。

(三)實驗組防老化血液分離溶血率為4.67%±0.71%，對照組為4.69%±1.01%(t =0.069，P>0.05)。

1.組采血管血液生化24項指標檢測結果比較見表1。

表1 2組采血管血液生化24項指標檢測結果比較

由表1可見，實驗組和對照組1相比較24項生化指標均無顯著性差異(P﹥0.05)。

表2 2組采血管血液生化24項指標檢測結果比較

由表1可見，實驗組和對照組2相比較24項生化指標均無顯著性差異(P﹥0.05)。

三、討 論

血液分離膠的制備方法在我國的文獻及專利報道都比較少，1991年中國科學院大連化學物理研究所和大連臨床檢驗中心，在國內首次研制出國產的血液分離膠[10]。這種分離膠結構中含有大量氫鍵，氫鍵鍵能低，易斷裂，業內認為血液分離膠具有觸變性，在離心力的作用下，血液分離膠中網狀結構上的氫鍵會發生斷裂，變成粘度較低的溶膠，從而和血清/血漿、血細胞才能形成按密度從低到高排列的三個分層。離心力消失后，血液分離膠又隨著氫鍵的重新形成從粘度較低的溶膠狀態恢復為粘度較高的半固體狀，在血清/血漿與血細胞之間形成隔層。這種分離膠在投入臨床應用后，證明完全能夠滿足使用要求；但現今適用的分離膠的有效期較短。2011年-2012年間國內多家分離膠生產企業研發出耐γ-射線血液分離膠。雖然其延長了保存時間，但是一致性差，有些還有濃重的刺激性氣味。

1973年美國PECTON公司以硅油和硅石為原料制成凝膠并裝入玻璃試管中投放市場，1982年日本積水化學工業及其同行用塑料試管代替玻璃試管實現商品化；其血液分離膠制備技術成熟，各項性能滿足臨床應用要求，且產品有效期長。但據國外專利報道的血液分離膠的主要成份為聚酯-硅石粉和聚苯乙烯-苯甲醛衍生物，存在著制備復雜和成本較高等缺點。

防老化血液分離膠選擇最合適的天然橡膠主料，比重調節劑，粘度調節劑，防老化劑作為組分。天然橡膠是由異戊二烯組成的線型高分子，是各種長度不一的聚異戊二烯混合物，具有較好的疏水性能和加工性能。其配制的血液分離膠具有封閉隔離效果好的特點[11,12]；并通過調節比重調度劑，粘度調節劑的組成比例，最終制備出粘度在18±8Kpa·S，密度在1.045～1.050 g/cm3的防老化血液分離膠。

實驗制備采血管，各工序過程控制能力Cpk均達到A+級，產品質量符合歐盟EN14820-2004)和行業標準(YY0314-2007)要求，確保了實驗的順利實施。防老化血液分離膠在采血管中的常溫保存24個月粘度、密度、溶血率性能均符合要求；且其在臨床檢驗中的應用與無添加劑管及著名品牌日本積水血液分離膠均無顯著差異[13，14，15]，表明防老化血液分離膠采血管在臨床檢測中應用可行。

通訊作者：鐘德優

【參考文獻】

[1]張利萍，羅嘯秋，白洪強.血液分離膠制備研究現狀及展望[J].化工新型材料, 2013，41(2)：7-8+26.

[2]趙立飛，徐建華，解傳芬等.臨床應用采血管需注意的問題[J].臨床檢驗雜志, 2012，(7)：543-545.

[3]郭新勝，周位強.分離膠真空采血管在臨床上的應用進展[J].現代檢驗醫學雜志, 2007，22(2)：123-124.

[4]Kazunori M, Hirshi S, Kazumi S. Blood Separation Compostion,EP.537. 507(1993)

[5]楊小鋼，鄧兆群，邱方城等.血液分離膠的制備研究[J].湖北醫科大學學報, 2000，21(2)：117-118.

[6]柴 永.正確地認識和使用過程能力指數Cp和Cpk[J].中國質量,2007,(2)：77-82.

[7]EN14820-2004, Single-use containers for human venous blood specimen collection.[S]

[8]YY0314-2007, 一次性使用人體靜脈血樣采集容器[S]

[9]GB/T14233.2-2007, 醫用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學試驗方法[S]

[10]王永安，吉本秋雄，徐維家等.血清分離膠促凝采血管的理論基礎及臨床應用[J].中國檢驗醫學與臨床, 2003，4(3)：3-4.

[11]王曉琳.臨床檢驗中血液分離膠采血試管的應用效果分析[J].中國農村衛生, 2015，(4)：31-32.

[12]梁文龍，謝會娟，王鳳華.血液分離膠采血試管在臨床檢驗中的應用效果觀察[J].中國保健營養旬刊, 2014，24(2)：1157

[13]范小斌，謝紅東.血液葡萄糖在分離膠血液采集管中的穩定性觀察[J].江西醫學檢驗, 2004，22(1)：25-26+28.

[14]張韶斌，張旭，何國堅等.血清分離膠真空采血管與普通促凝干燥管使用結果比較[J].檢驗醫學與臨床, 2008，5(7)：392-393.

[15]楊滿文.分析臨床檢驗中血液分離膠采血試管的應用效果[J]. 中國保健營養旬刊, 2016，26(19)：153-154