乳腺癌患者核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白 1和核因子相關(guān)蛋白κ B的表達(dá)水平及其相關(guān)性分析

趙莉娟，白中紅，許軟成

解放軍第九十一中心醫(yī)院腫瘤科，河南焦作4540030

乳腺癌是指乳腺上皮組織發(fā)生的惡性腫瘤。乳腺癌患者中99%為女性，1%為男性。乳腺癌約占女性常見(jiàn)惡性腫瘤的23%，占女性癌癥死亡例數(shù)的14%[1]。中國(guó)乳腺癌的發(fā)病率目前呈逐年上升趨勢(shì)[2]。目前乳腺癌的早期診斷和治療雖已取得較大進(jìn)展，但仍有50%的患者死于乳腺癌。因此，深入研究乳腺癌的發(fā)生仍具有重大價(jià)值。核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1（special AT-rich sequence binding protein 1，SATB1）和核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65（nuclear transcription factorr-kappa B p65，NF-κB p65）均參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。目前雖已分別報(bào)道了乳腺組織中SATB1和NF-κB p65的表達(dá)，但是未同時(shí)檢測(cè)二者在乳腺癌組織中的表達(dá)，未闡明二者之間的關(guān)系。

SATB1是一種組織特異性表達(dá)的核基質(zhì)附著區(qū)結(jié)合蛋白[3]，表達(dá)于胸腺細(xì)胞[4]。SATB1是乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制中的關(guān)鍵蛋白[5]。SATB1促使乳腺癌細(xì)胞獲得侵襲性表型，促進(jìn)乳腺癌生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移[6]。張英等[7]采用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）法發(fā)現(xiàn)SATB1蛋白及其mRNA表達(dá)水平增高與乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以上研究說(shuō)明SATB1是乳腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的重要調(diào)節(jié)因子。NF-κB p65在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)調(diào)控方面發(fā)揮關(guān)鍵作用，在腫瘤組織中呈活化狀態(tài)時(shí)，參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等過(guò)程[8]。在乳腺癌中，NF-κB p65參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展[9-10]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法同時(shí)檢測(cè)乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65蛋白表達(dá)，分析二者的關(guān)系，并結(jié)合乳腺癌患者的臨床特征，探討SATB1和NF-κB p65在乳腺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的重要作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月至2012年12月解放軍第九十一中心醫(yī)院手術(shù)切除的80例乳腺癌患者的乳腺標(biāo)本，均取癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織（距腫瘤邊緣2 cm）。患者年齡20～76歲，中位年齡47歲；患者術(shù)前均未進(jìn)行任何抗癌治療，所有病例均進(jìn)行術(shù)后隨訪1～5年，采用國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）2003版進(jìn)行腫瘤TNM分期，根據(jù)Patley和Scarff法劃分腫瘤組織級(jí)別[11]。

1.2 免疫組化法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達(dá)。SATB1濃縮型兔抗人多克隆抗體及NF-κB p65濃縮型鼠抗人單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，抗體稀釋濃度均為1∶100。即用型SABC免疫組化試劑盒購(gòu)自武漢博士德有限公司，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。采用DAB染色試劑盒染色，每批染色均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

采用雙盲法觀察每張切片。按切片中癌細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；同時(shí)按切片中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占百分比計(jì)分：陰性為0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分的乘積≥3分為免疫反應(yīng)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman法分析SATB1和NF-κB p65蛋白表達(dá)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果

SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中顯著表達(dá)，且定位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，詳見(jiàn)圖1。80例乳腺癌組織中SATB1陽(yáng)性表達(dá)56例，陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%；80例乳腺癌組織中NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)45例，陽(yáng)性表達(dá)率為56.25%。

2.2 SATB 1和NF- κB p65表達(dá)與乳腺癌臨床特征的關(guān)系

圖1 乳腺癌組織和癌旁良性乳腺組織中SATB 1和NF- κ Bp65的表達(dá)（DAB染色，×200）

SATB1和NF-κB p65的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER受體狀態(tài)和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡和TNM分期無(wú)關(guān)。腫瘤越小，組織中SATB1和NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)越多；與組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的乳腺癌組織相比，Ⅰ～Ⅱ級(jí)的乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)較多；ER陽(yáng)性組織中SATB1和NF-κB p65的陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)高于ER陰性組織；出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中SATB1和NF-κB p65的陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)少于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

2.3 SATB 1和NF- κB p65在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

在乳腺癌組織中，56例陽(yáng)性表達(dá)SATB1的樣本中，有38例NF-κB p65表達(dá)陽(yáng)性，24例陰性表達(dá)SATB1的樣本中，有7例NF-κB p65表達(dá)陽(yáng)性。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.357，P=0.001）。（表2）

3 討論

SATB1和NF-κB p65是乳腺癌發(fā)生中重要的調(diào)節(jié)因子。SATB1為一種特異性核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白。NF-κB p65存在于細(xì)胞質(zhì)中，以p50/p65異二聚體形式特異性結(jié)合免疫球蛋白的輕鏈基因增強(qiáng)子κB序列。SATB1參與調(diào)節(jié)乳腺癌發(fā)生相關(guān)的1000余個(gè)基因[5]，上調(diào)參與細(xì)胞轉(zhuǎn)移的基因，下調(diào)抑癌基因，從而改變?nèi)橄侔┘?xì)胞的基因表達(dá)譜。Ordinario等[12]發(fā)現(xiàn)SATB1促使非惡性乳腺上皮細(xì)胞株惡性化，而沉默具備侵襲轉(zhuǎn)移特性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中SATB1的表達(dá)，可以改變其侵襲表型并抑制腫瘤生長(zhǎng)。涂剛等[13]采用Western blot法和凝膠電泳遷移率法發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中 NF-κB p65蛋白表達(dá)水平及 NF-κB p65的DNA結(jié)合活性均明顯高于癌旁組織。盧勇[14]采用免疫組織化學(xué)法發(fā)現(xiàn)NF-κB p65在乳腺癌組織的表達(dá)水平顯著高于乳腺良性組織。姚志強(qiáng)等[15]采用免疫組織化學(xué)法發(fā)現(xiàn)NF-κB p65在乳腺癌組織、癌旁乳腺組織、乳腺增生組織中表達(dá)的陽(yáng)性率分別為42.4%、13.6%、7.14%。韓中保等[16]采用免疫組織化學(xué)法發(fā)現(xiàn)NF-κB在乳腺癌和乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中的陽(yáng)性表達(dá)率與正常乳腺組織有明顯差異。以上研究說(shuō)明NF-κB p65是乳腺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的重要調(diào)節(jié)因子。Biswas等[17]證實(shí)了NF-κB在乳腺癌形成中的促細(xì)胞增殖作用。研究發(fā)現(xiàn)NF-κB p65可能通過(guò)調(diào)控與細(xì)胞增殖、抗凋亡、血管生成和轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因，加快腫瘤的惡性化[18]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)NF-κB p65的組成型激活與致瘤性轉(zhuǎn)化有關(guān)[19]。Hou等[20]的研究結(jié)果表明NF-κB活化能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和遷移。本研究同時(shí)檢測(cè)了SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達(dá)，SATB1和NF-κB p65的表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER受體狀態(tài)和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡和TNM分期無(wú)關(guān)。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌組織中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。以上結(jié)果提示SATB1和NF-κB p65在乳腺癌的發(fā)生中具有相關(guān)性，調(diào)節(jié)癌癥的發(fā)生。

表1 乳腺癌組織中SATB 1和NF-κ B p65表達(dá)與乳腺癌臨床特征的關(guān)系

表2 乳腺癌組織中SATB 1和NF-κ B p65表達(dá)的關(guān)系

通過(guò)泛素化、乙酰化和磷酸化修飾，SATB1可調(diào)節(jié)其DNA結(jié)合能力和細(xì)胞核內(nèi)亞結(jié)構(gòu)的定位，SATB1通過(guò)與多種蛋白相互作用，募集組蛋白修飾酶和染色質(zhì)重塑復(fù)合物，參與組蛋白乙酰化、染色體重塑和甲基化等過(guò)程，并且與脫氧核糖核酸酶Ⅰ超敏感位點(diǎn)具有密切的相關(guān)性[20-21]。通過(guò)以上作用，SATB1特異性調(diào)控目標(biāo)基因的表達(dá)，進(jìn)一步調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、凋亡與轉(zhuǎn)移。這可能是SATB1在乳腺癌中發(fā)揮作用的機(jī)制。當(dāng)受到外源性刺激時(shí)，NF-κB則由細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮功能[22]。NF-κB p65在受到適宜刺激或存在組成型表達(dá)時(shí)，在細(xì)胞質(zhì)中與其抑制劑IKB分離，p65/p50轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，調(diào)控其下游基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)癌細(xì)胞生長(zhǎng)分化相關(guān)通路。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)SATB1和NF-κB p65呈正相關(guān)，說(shuō)明二者在癌癥發(fā)生中協(xié)同發(fā)揮作用。SATB1屬于上游調(diào)控因子，而NF-κB p65是核內(nèi)信號(hào)調(diào)控的主要因子。因此，SATB1發(fā)出的調(diào)節(jié)信號(hào)，進(jìn)入核內(nèi)后會(huì)激活NF-κB p65，從而使調(diào)節(jié)信號(hào)到達(dá)核內(nèi)，發(fā)揮作用。

綜上所述，SATB1和NF-κB p65在乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、ER受體狀態(tài)和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且二者顯著相關(guān)。

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