擬南芥SSP1基因GFP載體構建及GFP植株篩選

吳席 樊婷婷 方雪

摘要 [目的]以野生型擬南芥為材料構建SSP1基因GFP載體及GFP轉基因植株。[方法]通過提取野生型擬南芥的RNA，反轉錄成為cDNA，并以cDNA為模板，利用高保真酶，進行SSP1基因的克隆，將克隆所獲得SSP1基因和pXB94-GFP質粒進行雙酶切，利用T4-DNA ligase進行連接，并轉化進大腸桿菌DH5α感受態細胞中，通過菌落PCR和測序獲得陽性單克隆。通過質粒抽提試劑盒提出構建好的重組質粒，并將其轉入農桿菌GV3101中，通過菌落PCR鑒定出陽性單菌落。將獲得的陽性菌通過花序浸染法轉入野生型擬南芥中，并通過抗性篩選獲得陽性植株。[結果]克隆SSP1基因成功，菌落PCR顯示SSP1基因成功連接到pXB94-GFP質粒上并成功轉入農桿菌中，抗性篩選獲得了SSP1-GFP轉基因植株。 [結論]成功獲得SSP1-GFP轉基因植株，為接下來進一步研究SSP1基因功能奠定了基礎。

關鍵詞 擬南芥；SSP1；載體；GFP轉基因植株

中圖分類號 Q939.9 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）21-0119-03

Abstract [Objective]To build up the vector of Arabidopsis SSP1GFP and transgenic lines. [Method]Reverse transcription to cDNA by extracting the RNA of wild type Arabidopsis. The CDS fragment of SSP1 gene was amplified by PCR. After treatment with restriction enzymes and T4DNA ligase， the gene was connected to plasmid. Transfer the connection product to DH5α and a positive clone was identified. Then， transfer the recombinant to GV3101. The floraldip method was used to transfer it into wild type Arabidopsis. Finally， we obtained positive plants through resistance screening.[Result]We succeeded in cloning SSP1 gene. The recombinant plasmid was obtained and we got the transgenic lines. [Conclusion]The successful acquisition of SSP1GFP transgenic lines laid the foundation for further research on the function of SSP1 gene.

Key words Arabidopsis；SSP1；Vector；GFP transgenic lines

土壤鹽堿化是世界范圍內限制農業發展和作物生產的重要因素之一，探索鹽脅迫的作用機理以及提高植物抗鹽性的途徑具有重要的理論和實際意義[1-3]。尋找提高植物抗鹽性的關鍵基因并利用轉基因技術對植物品種進行優化改良是解決上述問題的一種行之有效的方法 [4-7]。筆者通過鹽脅迫篩選試驗發現SSP1基因可以使擬南芥對鹽脅迫有所響應。通過克隆SSP1基因，并通過基因工程手段構建SSP1-GFP轉基因植株，以進一步探究SSP1基因在擬南芥響應鹽脅迫中所起到的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料。

植物材料為擬南芥（Arabidopsis thaliana），購于美國擬南芥種質資源中心，均為哥倫比亞（Columbia，Col）遺傳背景，后由合肥工業大學植物分子生物學實驗室繁殖所得。……