丁香枝枯病病原菌的分離和測定

楊小萌

摘 要：我們對山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)的丁香進行了抽樣調(diào)查。通過調(diào)查，發(fā)現(xiàn)丁香花的枝枯病病菌一般在枝梢上進行侵染且發(fā)病率為30%。患病部分與健康部分分界明顯，其上散生黑色小粒點。用剪刀將發(fā)生病害與健康部分的交界處剪取一小段。此類病原菌在病部越冬，降雨的年份易發(fā)病。

關(guān)鍵詞：丁香；抗病性；分離；測定

文章編號：1004-7026（2018）07-0073-02 中國圖書分類號：S435 文獻標(biāo)志碼：A

丁香學(xué)名Syringa oblate Lindl.木樨科丁香屬，落葉灌木或小喬木，高達5m，枝條粗壯無毛。葉廣卵型，通常寬大于長，寬5～10cm；先端銳尖，基部心型或截形，全緣。圓錐花序長6～15cm；花冠白色或紫色，先端4裂，開展；雄蕊生于花筒中部或中上部。蒴果長圓形，頂端尖，平滑。花期4～5月，果期9月[1]。

丁香的枝葉茂密，花美麗而芬芳，花期較早，是我國北方地區(qū)園林中最常用的花木之一。廣泛栽植與庭園、機關(guān)、居民區(qū)等處，常叢植于建筑物前、散置于園路兩旁或草坪之中景觀效果甚好[2]。

丁香的抗病性較強，常見的丁香病有花瓣斑病[3]、白粉病[4]、炭疽病[5]和枝枯病。我們對山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)的丁香枝枯病進行了調(diào)查，病菌侵染后丁香形成枯枝，枯死段有黑褐色微突起小點，感病枝與健康枝之間形成明顯的分界線，感染部位以上全部枯死[6]。

1 材料與方法

1.1 樣品處理

采集好標(biāo)本以后，制作PDA培養(yǎng)基[9]。 取七個無菌培養(yǎng)皿，分別標(biāo)上號：酒精—水-升汞-無菌水1-無菌水2-無菌水3-做容器，并放入相應(yīng)的溶液。依次放入滅過菌的超凈工作臺中。

（1）從采集的枝條標(biāo)本上將病害部分切下2mm的小段4節(jié)。

（2）將病害部分和健康部分交界處切下2mm的8節(jié)。

全程滅菌操作三次之后放入容器中。取三個培養(yǎng)皿，然后將標(biāo)本成對角線接種到平面培養(yǎng)基上，如圖1所示。完后將培養(yǎng)皿倒置。用特種鉛筆在培養(yǎng)皿背面做標(biāo)記DX-1。

將病害部分和健康部分交界處切下的8小段用同樣的方法接種到另兩個培養(yǎng)基上 DX-2、DX-3。

將DX-1、DX-2、DX-3置入生化培養(yǎng)箱中，蓋上報紙遮光，進行培養(yǎng)菌落觀察，3d后長出呈灰綠色絨毛狀菌落。一個星期后，三個培養(yǎng)基中的菌絲覆蓋了整個培養(yǎng)基，以下就要對其進行純化，讓每一個培養(yǎng)基上只生長一種菌落。通過培養(yǎng)對比，選取具有代表性的DX-2并將其純化。

生長量的測定。每天下午4點對每個培養(yǎng)皿中菌落的生長量進行測量以測定該種真菌的生長速度。經(jīng)過測量計算，菌落每天的平均直徑從而可以看出菌落和生長速度。如菌落生長直徑圖表。

1.2 病原菌的觀察與測量

1.2.1 顯微標(biāo)本的制作。將白色菌落中灰黑色部分挑出一小塊放到載玻片上的colley試劑中，用解剖針撥勻。蓋上蓋玻片即準(zhǔn)備好了一個切片，標(biāo)為（1）；同樣的方法，再做一個標(biāo)本，標(biāo)為（2）。然后在標(biāo)定了刻度的顯微鏡下觀察菌絲和孢子的性狀并測量孢子的大小。

1.2.2 病原菌孢子的測量。經(jīng)過確定，052028號顯微鏡上，目鏡測微尺在10倍物鏡下刻度為6.5μm，40倍物鏡下刻度為1.6μm。經(jīng)過測量在40倍物鏡下測量的20個孢子的大小如下表：

設(shè)：X為每個孢子的長度 Y為每個孢子的寬度

病原菌孢子的長與寬各自的平均值為：長17.42μm 寬2.6μm

病原菌菌絲的粗度的平均值為：4.20μm

病原菌孢子的長與寬各自的標(biāo)準(zhǔn)差：長5.3μm 寬2.0μm

病原菌菌絲的粗度的標(biāo)準(zhǔn)差：0.86μm

病原菌孢子的長與寬各自的標(biāo)準(zhǔn)誤：長1.2μm 寬0.45μm

病原菌菌絲的粗度的標(biāo)準(zhǔn)誤：0.26μm

病原菌孢子的長與寬各自的變異范圍：長12.96～20μm 寬12.08～9.36μm

病原菌菌絲的粗度的變異范圍：3.33μm～4.87μm

孢子的大小為（12.96～20）μm×（12.08～9.36）μm

2 菌種鑒定

我們在載玻片上觀察到的病原菌形態(tài)特征為：分生孢子梗淡欖褐色，分枝，頂端長擴大而具有多個孢子痕，形狀橢圓形、卵形，有橫隔膜，縱隔膜，孢子有喙或無喙[11]。根據(jù)《真菌鑒定手冊》記載，可以確定我們分離出來的病原菌屬細交鏈孢霉[Alternaria.tenuis Nees]，隸屬半知菌亞門，叢梗孢目，[Alternaria Nees ex Wallr]。此種菌就是引起枝枯病的病原菌[12]。

結(jié)束語

通過本次實驗，使我們對丁香枝枯病的病原菌有了初步了解。在生產(chǎn)實踐中，防治方法建議如下：

（1）發(fā)現(xiàn)病枝及時剪除燒掉，防止傳播蔓延。

（2）加強栽培管理，提高植株抗病能力，盡量避免各種機械創(chuàng)傷。剪口可用1%硫酸銅溶液消毒，再涂以1：1：160倍等量式波爾多液予以保護。

（3）藥劑防治，休眠期選用波美3～5度石硫合劑噴灑，生長期選用1：1：160倍等量式波爾多液、70%甲基托布津可濕性粉劑500～1000倍液等殺菌劑噴灑，并著重噴布枝干，預(yù)防病菌侵染。

參考文獻：

[1]卓麗環(huán)，陳龍清.園林樹木學(xué)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，2003年11月.

[2]金波.花卉資源原色圖譜[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，1999年9月.

[3]徐志華.園林花卉病蟲害圖監(jiān)[M].北京林業(yè)出版社，2006年1月.

[4]張寶棣.園林花木病蟲害診斷與防治[M].金盾出版社，2002年9月.

[5]楊子琪，曹華國.園林植物病蟲害防治圖鑒[M].中國林業(yè)出版社，2002年1月.

[6]岑炳沾，蘇星.景觀植物病蟲害防治[M].廣東科技出版社，2003年1月.

[7]顧鶴松.山西省地圖集[M].山西省測繪局，1995年.

[8]郭書普.木本花卉病蟲害防治原色圖鑒[M].安徽科技出版社，2003年6月.

[9]項存悌.林病研究法[M].東北林業(yè)大學(xué)出版社，1991年.

[10]普冠勤，毛建平.桑植枯菌核病病原菌的生物學(xué)特性研究[J].蠶業(yè)科學(xué)，2002年28.

[11]邵力平.真菌分類學(xué)[M].中國林業(yè)出版社，1984年12月.

[12]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社，1979年9月.