低氧誘導因子-1α聯合p53蛋白在宮頸癌患者中的表達及對預后的影響

馬園園 孫延霞 李艷菊

宮頸癌是現代婦科疾病中的高發腫瘤，目前臨床醫學中尚未清楚該病的發生機制，有學者認為其的出現與細胞凋亡異常有密切的相關性[1-3]。細胞凋亡受多種抑癌基因和癌基因的調控，因此低氧誘導因子-1α聯合p53蛋白基因成為研究熱點。有關低氧誘導因子-1α聯合p53蛋白基因對宮頸癌關系的國外研究報道比較多，國內研究報道尚不夠多[4-5]。筆者將根據相關工作經驗，綜合分析低氧誘導因子-1α聯合p53蛋白在宮頸癌患者中的表達及對預后的影響展開分析，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

在2012年1月至2016年12月，對手術切除的宮頸組織石蠟包埋標本(宮頸上皮內瘤樣變組、宮頸癌組)，采用免疫組化SP法，檢測91例宮頸癌患者(宮頸癌組)、91例宮頸上皮內瘤樣變者(宮頸上皮內瘤樣變組)、91例宮頸鱗狀上皮組織者(對照組)中低氧誘導因子-1α、p53蛋白的表達情況。對照組標本來源于子宮肌瘤切除術后的標本。宮頸上皮內瘤樣變組中有30例CINⅠ、31例CINⅡ、30例CINⅢ，宮頸癌組中有50例宮頸鱗癌者、41例宮頸腺癌者。CINⅠ組平均年齡為(44.26±10.28)歲，平均體重為(58.58±12.26)kg；CINⅡ組平均年齡為(44.35±10.25)歲，平均體重為(58.51±12.38)kg；CINⅢ組平均年齡為(43.99±10.34)歲，平均體重為(58.57±12.31)kg。

1.2 試劑和方法

試劑：①羊抗人多克隆低氧誘導因子-1α、羊抗人多克隆p53蛋白；②兔抗羊低氧誘導因子-1α、兔抗羊p53蛋白；③HIGH-SABC免疫組織化學試劑盒；④DAB顯色試劑盒；⑤二甲苯；⑥無水乙醇；⑦3%H2O2。所有標本均經過常規石蠟包埋，進行免疫組織化學染色處理。實驗過程嚴格按照相關試劑盒說明書來進行[6,7]。

1.3 陽性結果判定標準

低氧誘導因子-1α存在于細胞質中，呈現黃色顆粒；p53蛋白主要存在于細胞核中，呈現棕黃色顆粒。

低氧誘導因子-1α判斷標準：陽性細胞數≤10%為1分、11%～50%為2分、51%～80%為3分、>80%為4分；再按照陽性細胞染色強度計分： 3分為強、2分為中、1分為弱；上述兩者之和最終判定結果為：“-”為陽性細胞數小于20%、“+”為2分～3分、“++”為4～5分、“+++”為6～7分。

p53蛋白判斷標準：陰性為無陽性細胞，陽性細胞率<10%為弱陽性；陽性細胞率為10%～60%為中度陽性“++”，陽性細胞率>60%為強陽性“+++”。

1.4 統計學方法

應用SPSS 12.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料用(±s)表示，組間差異、組內差異采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗 ，P<0.05時為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組患者的低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率比較

對照組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率分別為0(0/91，91例-、0例+、0例++、0例+++)、0(0/91，91例-、0例+、0例++、0例+++),宮頸上皮內瘤樣變組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率分別為36.26%(33/91，33例-、32例+、18例++、8例+++)、36.26%(33/91，33例-、28例+、26例++、4例+++),宮頸癌組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率分別為68.13%(62/91，62例-、6例+、9例++、14例+++)、68.13%(62/91，62例-、12例+、10例++、7例+++),宮頸癌組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率顯著高于宮頸上皮內瘤樣變組和對照組(P<0.05)，見表1。

表1 3組患者的低氧誘導因子-1α、p53蛋白陽性表達情況比較/例

2.2 宮頸上皮內瘤樣變組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率

宮頸上皮內瘤樣變組CINⅠ者低氧誘導因子-1α陽性率為0(0/30)、p53蛋白陽性率為0(0/30)，CINⅡ者低氧誘導因子-1α陽性率為35.48%(11/31)、p53蛋白陽性率為38.71%(12/31)，CINⅢ者低氧誘導因子-1α陽性率為63.33%(19/30)、p53蛋白陽性率為56.67%(17/30)，CINI者低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率顯著低于CINII和CINIII者(P<0.05)。

2.3 宮頸鱗癌組p53蛋白陽性率比較

宮頸鱗癌p53蛋白陽性率為76.00%(38/50)，宮頸腺癌p53蛋白陽性率為75.61%(31/41)，兩者p53蛋白陽性率比較無統計學意義(P>0.05)。

3 討論

隨著生活節奏的加速以及工作壓力的增加，現代女性癌癥發生率呈增長的趨勢。宮頸癌是1種常見的婦科腫瘤，對女性的正常工作和生活造成嚴重影響[8-9]。因此，有效的篩查是盡早發現宮頸癌的重要渠道。相關研究指出[10-11]，低氧誘導因子在宮頸癌患者中多出現異常表達的現象，證實其與宮頸癌的出現有密切的相關性。p53蛋白基因是1種關鍵的抑癌基因，能夠有效抑制腫瘤的發生。已有資料表明，p53蛋白基因結構或者表達異常時人類各種惡性腫瘤中最為常見的基因改變，其中有51%左右的人類中，惡性腫瘤有p53蛋白基因突變。免疫組化可以有效檢測到p53蛋白基因，且具有癌基因的功能。應用免疫組織化學方法檢測低氧誘導因子-1α、p53蛋白在宮頸癌組織、宮頸上皮內瘤樣變、宮頸鱗狀上皮組織的表達，繼而探討出低氧誘導因子-1α、p53蛋白在宮頸癌發生以及發展中的相互關系[11-13]。

低氧誘導因子-1α是低氧誘導結合蛋白，主要由α和β兩個亞基構成。低氧誘導因子-1α是誘導低氧基因和修復細胞氧內環境的核心調節因子，是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物體內的1種轉錄因子，其生物學效應主要由低氧誘導因子-1α亞基實現的。低氧誘導因子-1α在維持細胞能量代謝、腫瘤血管形成和細胞增殖等方面有著重要的價值和作用，低氧誘導因子-1α尤其在宮頸癌患者的發生發展過程中以及預后等有著重要的作用。本文研究結果顯示宮頸癌組低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率顯著高于宮頸上皮內瘤樣變組和對照組(P<0.05)。從上述研究數據不難看出，低氧誘導因子-1α在惡性進展過程中起著關鍵的作用，正常對照組人群中無低氧誘導因子-1α和p53蛋白表達，宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的低氧誘導因子-1α陽性表達率和p53蛋白陽性表達率呈現顯著上升趨勢。本文結果還顯示CINⅠ低氧誘導因子-1α陽性率、p53蛋白陽性率顯著低于CINⅡ和CINⅢ者陽性率(P<0.05)。低氧誘導因子-1α、p53蛋白的陽性率表達在正常宮頸組織中無表達，在宮頸上皮內瘤樣變組患者中的陽性表達和淋巴結轉移以及腫瘤的臨床分期密切相關，與組織類型無關。在宮頸癌的癌前病變階段中，低氧誘導因子-1α、p53蛋白陽性表達率呈現升高趨勢，指導宮頸癌中低氧誘導因子-1α、p53蛋白異常表達提示其是癌變過程的早期行為，在宮頸癌的發生和發展過程中有著重要的作用。隨著腫瘤逐漸往深層發展， 所以其低糖狀態逐漸加重，繼而導致低氧誘導因子-1α、p53蛋白過度表達。本文研究結果還顯示宮頸鱗癌、宮頸腺癌p53蛋白陽性率比較無統計學意義(P>0.05)。上述研究數據說明宮頸鱗癌組患者p53蛋白與宮頸癌的發生相關，是發生宮頸鱗癌的早期現象，p53蛋白的過度表達可以作為早期診斷宮頸癌的客觀指標[14-15]。

綜上所述，低氧誘導因子-1α聯合p53蛋白在宮頸癌患者中的表達發揮著重要作用，低氧誘導因子-1α和p53蛋白能夠作為宮頸癌診療的靶點。

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