VEGF在子宮肌瘤發生發展中的表達及其意義

陳芳芬 楊澤妹 許愛玲 吳海莉

子宮肌瘤屬于一種性激素依賴性腫瘤，孕激素和雌激素與子宮肌瘤的發生和發展有密切的關聯性[1]。一般情況下成人血管生成是正常癥狀，病理情況下異常血管生成導致一系列疾病的發生，包括腫瘤病理過程、腫瘤發生和轉移等等[2]。VEGF作為人體重要的血管生長因子在各種腫瘤發生和發展中有重要的作用，目前有關研究顯示VEGF在子宮肌瘤發病中作用較明顯[3]。本文主要通過正常肌層組織和子宮肌瘤發病的對比，研究VEGF在子宮肌瘤中的作用，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2015年5月至2016年10月期間在我院接受治療的60例子宮肌瘤患者，年齡35～56歲，平均年齡(45.36±3.45)歲；病史15天到12年，平均病程(5.78±2.63)年；病灶直徑3.8～10.5 mm，平均直徑(5.02±0.45)mm；單發32例，多發患者28例；40例肌壁間肌瘤,20例其他肌瘤。所有入選患者均沒有接受過藥物治療，患者沒有嚴重的肝腎疾病、慢性疾病、傳染性疾病等，術后根據患者子宮內膜病理情況分析患者月經周期的發生情況。

1.2 方法

1.2.1 收集標本 對患者行子宮肌瘤手術后，從患者病理組織中取3 cm3左右新鮮肌瘤組織，取正常肌層組織做對比分析，而后利用生理鹽水清洗標本，并將清洗后的標本放入液氮中做冰凍儲存。

1.2.2 儀器和試劑 選購Santa-Cruz公司生產的鼠抗人VEGF和VEGFR1、VEGFR2單抗；電泳、顯影及轉膜等常規配套設備選自Bio-Rad公司；PVDF膜選自Dupont公司；BCA蛋白定量試劑盒和HRP標記二抗購自上海康成生物有限公司；酶標儀可以選擇購買Themo公司的儀器，而低溫高速離心機可以從Beckman公司選購。

1.2.3 Westem blot檢測 對患者標本實施檢測之前，首先取事先準備好的100 mg液氮凍存的組織標本，并對標本實施剪碎處理，而后將其放入1×PBS緩沖液中實施洗滌處理，標本的洗滌次數一般為2次，洗滌完畢后可以加入1 ml總蛋白質提取液，將液體搖勻后可以放入冰浴中實施30 min的振搖處理。而后對溶液實施離心處理。離心處理需要在低溫高速離心機下實施，離心處理環境為：4 ℃，離心速率：15 000 r/min，離心時間：20 min。而后可以將離心處理后的上清液稀釋出來，將其放入-30 ℃環境中保存；取50 μg總蛋白樣品液實施DSD-PAGE電泳處理，電鍍處理完畢后對溶液實施轉膜處理，而后做封閉處理，封閉后可以實施一抗、二抗處理。對PVDF膜實施處理的過程中采用KCTM顯色處理，而后將檢測的結果曝光在X膠片上，同時可以對樣本實施顯影、定影處理。處理完以上的步驟后可以對內參照鼠抗GAPDH單抗(1∶5000)。

1.3 統計學分析

本次研究所有數據分析均采用SPSS 20.0軟件進行分析，計量資料用卡方值表示，t檢驗，如果P<0.05，表示2組數據之間的差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達

經過一系列的分析，發現子宮肌瘤組織中的VEGF及其受體蛋白均較正常子宮肌層高，差異有統計學意義，見表1。

2.2 VEGF、VEGFR1、VEGFR2與月經周期的關系分析

在子宮肌瘤組織中不管是分泌期還是增生期，患者的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達水平與正常肌層組織之間比較，均有明顯的差異性(P<0.05)，見表2。

2.3 VEGF VEGFR1、VEGFR2蛋白表達關系

經過分析，發現患者子宮肌瘤組織中的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達水平和子宮肌瘤數量之間的關系呈現正比例關系，P<0.05；與子宮肌瘤體積、最大肌瘤直徑沒有明顯的關系，P>0.05；而VEGFR1與VEGF、VEGFR2沒有顯著的關系，P>0.05，見表3。

表1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達比較(±s)

表1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達比較(±s)

組織例數VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤組織600．75±0．300．45±0．130．75±0．40肌層組織600．15±0．060．36±0．150．31±0．21t值/15．1913．5127．544P值/0．0000．0010．000

表2 VEGF及其受體蛋白表達與月經周期的關系(±s)

表2 VEGF及其受體蛋白表達與月經周期的關系(±s)

組織增生期VEGFVEGFR1VEGFR2增生期VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤組織0．78±0．260．44±0．130．66±0．360．67±0．360．46±0．110．85±0．48肌層組織0．15±0．170．35±0．150．29±0．140．13±0．070．38±0．130．33±0．28t值15．7093．5127．42011．4053．6397．248P值0．0000．0010．0000．0000．0000．000

3 討論

子宮肌瘤是女性生殖系統比較常見的一種良性腫瘤，多發于30歲以上的婦女，發病機制尚不清晰[4]。臨床上一般采用手術切除治療，缺乏有效的非手術治療方法。所以臨床上子宮肌瘤的治療一般采用手術治療，但是手術創傷比較大，容易產生并發癥。有關研究發現子宮肌瘤的發生與飲食有一定的關系，而且患者可能存在免疫功能改變，比如NK細胞活動比較低[5]。從遺傳性的角度分析，7號染色體長壁的缺失與子宮肌瘤系統發生有明顯的關系。也有些學者認為子宮肌瘤疾病與卵巢性激素依賴性表現，而且疾病與血管生成有重要的關聯性[6]。

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達關系(±s)

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達關系(±s)

項目VEGFtPVEGFR1tPVEGFR2tP腫瘤數量/個 ≥24．21±0．502．4000．0262．37±0．540．5570．2513．63±0．536．2840．036 <21．22±0．512．28±0．551．04±0．52體積/mm3 ≥300130．53±10．321．3090．315126．89±10．46-0．3660．542128．45±10．310．1230．525 <300120．64±10．63123．50±10．57125．56±10．20直徑/mm ≥57．35±1．541．0580．3557．11±1．380．1350．5416．97±1．50．0320．305 <56．86±1．556．42±1．596．58±1．29

VEGF是人體內的一種比較特殊的血管內皮生產因子，這種因子在人體內可以分為多種類型結構，而且能夠促進血管生成。VEGFR在通常情況下屬于膜蛋白受體，在人體結構組織中可以將VEGFR可以分為3種亞型，這3種亞型分別為VEGFR1、VEGFR2和VEGF,其中VEGFR1和VEGFR2相互結合發展相當于EGF-A特異性結合，能夠發揮很多功能作用，比如他們聯合應用能夠促進人體內皮細胞分裂增長，另外還能夠有效促進新生血管的形成，從而促進人體血管通透性的提高[7]。一般情況下血管生長是腫瘤發展的一個重要條件，同時也是促進腫瘤發展的一個重要環節。沈楊等[8]研究發現，沒有人體血液的供養，人體內的實體血液供養僅僅只能限制在1～2 mm范圍內。可見VEGF屬于人體比較重要的一個促進因子，而且這種因子在腫瘤發生、發展中也有重要的作用，從這個方面進行分析發現VEGF在很多腫瘤組織血管生成中都有重要的表達作用[9]。VEGF在腫瘤細胞中的分泌形式也不同，包含2種分泌形式，分布為自分泌和旁分泌，子宮肌瘤的生長和發展也能夠促進血液供應，同時也能夠促進局部血管的生長和發展。

我國臨床中研究VEGF及其受體在子宮疾病中作用報道并不多，有關專家研究發現[10]，人體血管內皮細胞增殖指數在正常人體組織和子宮肌瘤患者的病理組織中有更高的表達。另外，有關研究也發現20例子宮肌瘤組織中有16例患者肌瘤組織中VEGF表達明顯升高，而身體其他部位的正常組織VEGF表達并不明顯。Dai等[11]研究發現，與其他零星發病家族比較肌瘤組織中的VEGF的表達率比發病率較高的子宮肌瘤家庭患者中的表達率要高很多，前者表達率是28.0%，后者表達率為64.0%。本次研究結果顯示VEGF蛋白表達水平在肌瘤中的基層值中表達高很多，而且不會受患者月經周期變化的影響。這個結果說明VEGF高表達在人體中的變化具有持續性特點，而且這種高表達和月經周期并沒有太大的關聯性。這個研究結果還說明VEGF表達量和肌瘤數量之間的關系為正比例關系，說明VEGF與子宮肌瘤病變程度之間有內在聯系性。Scharpfeneeker等[12]在子宮肌瘤組織中檢測出VEGFR1、 VEGFR2 的表達率分別為80%、33.3%。

本次研究結果顯示VEGFR1、VEGFR2在正常組織中的表達比較低，而在肌瘤組織中的表達比較高，說明VEGFR在肌瘤組織中受到機制調控的影響比較大，同時也說明了VEGFR與VEGF的表達增強是相對應的關系，所以說VEGFR同樣對肌瘤的發病有重要的參與作用[13]。在月經周期中VEGF受體不管是在增生期還是在分泌期表達水平明顯高于正常肌層組織。在研究的過程中我們看到VEGF受體在肌瘤組織中表達比較高，而且VEGFR2表達水平明顯高于VEGFR1，說明VEGFR2在肌瘤組織中的表達比較活躍，從這個方面來看VEGFR2表達水平與子宮肌瘤病變之間聯系更加緊密。

綜上所述，VEGF及其受體對子宮肌瘤血管生成均發揮著重要的作用，表現為VEGF及其受體在子宮肌瘤組織中有明顯的高表達。所以，在子宮肌瘤的治療中如果能夠研制出VEGF及其受體蛋白拮抗劑，就能夠很好地起到干擾子宮肌瘤的作用，促使子宮肌瘤逐漸萎縮和消亡，有效提高子宮肌瘤治療效果。

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