Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤性乳腺癌中的表達

陳 嬉，金海麗

(臺州恩澤醫療中心(集團)恩澤醫院 病理科，浙江 臺州 318050)

乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，發病率高，已成為我國重大公共衛生問題[1]。乳腺癌的病因尚未完全清楚，有研究認為，乳腺癌的發生和發展是多種因素綜合作用的結果，某些生物學標記物的表達可能與乳腺癌患者的預后有關[2]。Mel-18基因是多梳基因家族中的一員，在細胞增殖、衰老和腫瘤的發生中都具有重要的作用。Mel-18編碼負性調控蛋白，抑制腫瘤的發生、發展[3]；Notch-1的異常表達與多種腫瘤的發生發展密切相關[4]；PLK-1是廣泛存在于真核細胞中的絲/蘇氨酸激酶，與細胞的有絲分裂密切相關，PLK-1可以參與細胞凋亡的調控，有利于腫瘤的靶向治療[5]。浸潤性乳腺癌是乳腺癌中常見的病理類型，本研究分析生物標記物Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤性乳腺癌中的表達情況，探討三者在浸潤性乳腺癌的發生發展中可能的作用。

1 材料與方法

1.1 材料收集 2014年11月—2016年9月我院病理科的乳腺組織89例，其中正常乳腺組織40例，浸潤性乳腺組織49例。49例乳腺癌患者均為女性，年齡33～72歲，平均52.311.4歲。標本入選條件：術前未經任何抗癌治療，無重大手術及外傷史，且組織類型均經病理檢查證實。

1.2 主要試劑與設備 Mel-18鼠抗人單克隆抗體(Abcam公司，產品編號：ab203638)、Notch-1兔抗人抗體(博士德公司，產品編號：BA2743-2)、PLK-1兔抗人單克隆抗體(Abcam公司，產品編號：ab138496)、光學顯微鏡Nikon Eclipse E200(日本)。

1.3 操作方法 用4%中性甲醛溶液將所有標本固定，經過石蠟包埋并切片備用。Mel-18、Notch-1和PLK-1的工作濃度分別為1:200、1:100和1:200。采用羅氏全自動免疫組織化學染色儀進行染色，用PBS代替一抗做陰性對照。

1.4 陽性率判定 ①以著色細胞數占視野細胞總數(鏡下隨機取10個視野)的百分比計分。1分：≤10%的核陽性；2分：11%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。②根據染色強度進行計分。1分：陰性；2分：弱染色；3分：中度染色；4分：重度染色。將上述兩種方法的計分結果進乘積，若乘積≥4分，便認為陽性，否則為陰性。Mel-18和PLK-1主要在細胞核內表達，呈現棕褐色或者棕黃色顆粒。Notch-l主要在細胞質內表達，呈現棕黃色或黃色顆粒。

1.5 統計學處理 應用SPSS 19.0統計軟件分析數據，計數資料的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Mel-18、Notch-1及PLK-1的表達 Mel-18、Notch-1、PLK-1在正常乳腺組織中的陽性率與在浸潤性乳腺組織中的陽性率，差異均有統計學意義(P<0.05)；見表1。

表1 Mel-18、Notch-1及PLK-1

2.2 Mel-18、Notch-1及PLK-1與浸潤性乳腺癌臨床病理參數的相關性 Mel-18的表達與淋巴結轉移和臨床分期有關(P<0.05)，與患者年齡和組織學分級無關(P>0.05)；Notch-1和PLK-1的表達均與組織學分級、淋巴結轉移和臨床分期有關(P<0.05)，與患者年齡無關(P>0.05)。見表2。

3 討論

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，發病率高，但死亡率卻呈逐年下降趨勢。究其原因，一是乳腺癌篩查工作的開展，二是乳腺癌綜合治療的開展。因此，乳腺癌的早期篩查或診斷是降低乳腺癌死亡率的關鍵。隨著分子生物學的發展，乳腺癌生物標記物的研究也越來越深入。本研究對Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤性乳腺癌中的表達進行研究，以期為臨床浸潤性乳腺癌的研究和乳腺癌的預后提供有力支撐。

表2 Mel-18、Notch-1及PLK-1與浸潤性乳腺癌臨床病理參數的相關性

Mel-18定位于染色質17q12，由13個外顯子組成，通過結合序列5'-GACTNGACT-3'起轉錄抑制作用，此序列位于c-myc，bcl-2，hox基因的非編碼區或調控區。Mel-18基因通過下調c-myc基因的表達，調節細胞增殖，加速細胞衰老[6]，從而抑制腫瘤生長。本研究結果發現，Mel-18在正常乳腺組織中的表達高于浸潤性乳腺組織，且Mel-18的表達與淋巴結轉移和臨床分期有關，這與贠田等[7]研究結果相似，對于乳腺癌的預后具有重要的意義。

Notch-1定位于染色體9q34，是許多重要信號通路(調節細胞增殖)的交匯點，在細胞分化、發育中具有一定的作用，且影響其下游多種癌基因參與細胞的增殖、分化及凋亡過程[8]。本研究結果發現，Notch-1在浸潤性乳腺組織中的表達高于正常組織，且Notch-1的表達與組織學分級、淋巴結轉移和臨床分期有關(P<0.05)，表明在一定程度高表達Notch-1加劇了乳腺癌浸潤和轉移，預后不良。

人類的PLK基因定位于16p12.3，PLK-1是調節細胞周期的重要分子，位于細胞周期的中心環節。PLK-1穩定分裂細胞基因組，參與了細胞周期各個檢測點功能，在細胞DNA修復后，進入有絲分裂，從而抑制細胞增殖，促進細胞凋亡[9]。本研究結果顯示PLK-1在浸潤性乳腺組織中的表達高于正常組織，且PLK-1的表達與組織學分級、淋巴結轉移和臨床分期有關，說明PLK-1在腫瘤中高表達與腫瘤的生物學行為及預后有密切關系，這與King等[10]研究結果相似。

綜上所述，Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤性乳腺癌的發生發展中具有一定的作用，與淋巴結轉移和臨床分期密切相關，可能是影響浸潤性乳腺癌預后的重要指標。

參考文獻：

[1] 吳驥, 管小青, 顧書成, 等. 乳腺浸潤性導管癌組織中COX-2和Ki-67的表達及相關性分析[J]. 中國普外基礎與臨床雜志, 2014, 21 (2): 197-201.

[2] 李慶霞, 邢雅軍, 閆曉路, 等. 乳腺浸潤性導管癌Survivin和AIB-1表達及其相關性研究[J]. 中華腫瘤防治雜志, 2013, 20 (12): 935-938.

[3] Lee JY, Kong G. Mel-18, a tumor suppressor for aggressive breast cancer[J]. Oncotarget, 2015, 6 (18): 15710-15711.

[4] 張奇, 宋鑫. Notch信號通路在腫瘤干細胞中的研究進展[J]. 中國腫瘤, 2014, 23 (7): 585-590.

[5] 王沖, 余建, 黃河. Plk1磷酸化修飾PinX1對宮頸癌HeLa細胞有絲分裂及凋亡的影響[J]. 鄭州大學學報：醫學版, 2013, 48 (3): 323-327.

[6] Won HY,Lee JY,Shin DH,etal.Loss of Mel-18 enhances breast cancer stem cell activity and tumorigenicity through activating Notch signaling mediated by the Wnt/TCF pathway[J].FASEB J,2012,26(12): 5002-5013.

[7] 贠田,王仰坤,原旭濤,等. Mel-18、Notch-1和PLK-1在不同乳腺組織中的表達及臨床意義[J]. 診斷病理學雜志,2017,24(1):30-33.

[8] Yuan X,Zhang M,Wu H,etal.Expression of Notch1 Correlates with Breast Cancer Progression and Prognosis[J].PLoS One,2015,10(6):e0131689.

[9] 錢鋒. 吉西他濱對胰腺癌細胞增殖、凋亡及PLK-1表達的影響[J]. 解放軍醫藥雜志,2015,27(7):53-55.

[10] King I Sharon,Colin PA,Susan BE,etal.Immunohistochemical detection of Polo-like kinase-1(PLK1)in primary breast cancer is associated with TP53 mutation and poor clinical outcome[J].Breast Cancer Res,2012,14(2):R40.