端粒酶、M2型丙酮酸激酶、乳酸聯合檢測鑒別診斷結核性及惡性胸腔積液的價值

劉 然， 李 峰， 李玉梅， 劉佃香

（大慶市第二醫院檢驗科，黑龍江 大慶 163461）

良、惡性胸腔積液的鑒別診斷一直是臨床的一大難題。在臨床上，結核性及惡性胸腔積液所占比例非常大，脫落細胞學檢查是診斷特異性最強的方法，但受到腫瘤細胞數量的影響，敏感性低，僅為50%左右。現在臨床開展的與腫瘤有關的一些生化、免疫檢測項目均存在敏感性和特異性問題。腫瘤細胞增殖極其旺盛，為了防止異常增殖的腫瘤細胞染色體末端端粒的丟失，端粒酶（telomerase，TE）活性明顯增強。另外，由于腫瘤細胞糖無氧酵解極其旺盛，因此無氧酵解的關鍵酶——M2型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase，M2-PK）活性明顯增強，無氧酵解產生的乳酸水平也會明顯升高。本研究探討了TE、M2-PK、乳酸聯合檢測在結核性和惡性胸腔積液鑒別診斷中的價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2016年5月—2017年5月大慶市第二醫院結核科住院的結核性胸腔積液患者30例以及腫瘤門診就診的胸腔積液患者30例。所有患者均經臨床診斷、實驗室檢查、病理學檢查、胸水細胞學檢查等明確診斷。胸腔積液標本均用無菌管收集，離心20 min，收集上清于-75 ℃保存。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 PHOMO型酶聯免疫分析測定試劑盒（上海酶聯生物公司）。酶標儀（鄭州安圖公司）。

1.2.2 測定方法 采用雙抗體夾心法測定胸腔積液中的TE、M2-PK、乳酸水平。用純化的相應抗體捕獲抗體，包被微孔板，制成固相抗體，按照試劑說明書進行操作。終止顯色后，用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（A）值，通過標準曲線計算標本中的TE、M2-PK、乳酸水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。呈正態分布的計量數據以±s表示，組間比較采用t檢驗。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 惡性胸腔積液組與結核性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平及陽性率比較

惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平均高于結核性胸腔積液組（P＜0.05）。見表1。

30例結核性胸腔積液患者中TE陽性2例（6.7%）、M2-PK陽性4例（13.3%）、乳酸陽性5例（16.7%）。30例惡性胸腔積液患者中TE陽性24例（80.0%）、M2-PK陽性23例（76.7%）、乳酸陽性20例（66.7%）。見表2。

表1 結核性及惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平的比較 （±s）

表1 結核性及惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸水平的比較 （±s）

組別 例數 端粒酶（ng/mL） M2-PK（U/mL） 乳酸（mol/L）結核性胸腔積液組 30 0.58±0.41 7.78±4.15 2.25±1.71惡性胸腔積液組 30 2.55±1.72 29.12±3.71 9.45±3.31

表2 結核性胸腔積液組和惡性胸腔積液組TE、M2-PK、乳酸的定性分析 [例（%）]

2.2 TE、M2-PK和乳酸單項與聯合檢測的敏感性和特異性分析

TE、M2-PK和乳酸聯合檢測鑒別結核性胸腔積液與惡性胸腔積液的敏感性和特異性高于3項指標單項檢測。見表3。

表3 TE、M2-PK、乳酸單項與聯合檢測鑒別結核性和惡性胸腔積液的敏感性和特異性

3 討論

端粒是存在于真核細胞染色體末端的一段特殊的DNA和蛋白質的復合物，能穩定染色體，保護染色體結構基因，是細胞凋亡的信號[1]。TE是一種特殊的DNA聚合酶，具有逆轉錄酶活性，能以自身的RNA為模板，在端粒的末端加上新的重復序列，使端粒延長[2]。有研究發現，癌細胞往往會產生額外的TE，TE的激活使癌細胞不斷地分裂、增殖。

腫瘤細胞與人體正常細胞在能量代謝上有很大的不同。正常細胞的能量代謝特點是通過葡萄糖在線粒體內進行氧化磷酸化獲得能量，只有在缺氧時才進行無氧糖酵解，而腫瘤細胞即使在氧供應充分的條件下也主要以糖酵解（Warburg效應）獲得能量[3-4]，并產生大量乳酸，其原因可能與癌細胞的酶譜變化有關，特別是與糖酵解關鍵酶M2-PK活性增強有關[5]。

結核性及惡性胸腔積液的鑒別診斷一直是臨床面臨的一大難題。本研究結果表明，惡性胸腔積液患者TE、M2-PK、乳酸水平明顯高于結核性胸腔積液患者（P＜0.05）；3項指標單項檢測鑒別診斷結核性及惡性胸腔積液的敏感性最高為80.0%，特異性最高為86.7%，而聯合檢測的敏感性可達90%，特異性可達96.9%。因此，TE、M2-PK、乳酸聯合檢測可用于結核性胸腔積液及惡性胸腔積液的鑒別診斷。

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