血清免疫球蛋白等因素對分離膠采血管血液分離效果的影響

張靖宇， 范 洪， 路炳通， 胡海濤

（河北省滄州中西醫結合醫院實驗診斷科，河北 滄州 061001）

分離膠采血管由于具有分離血清較快，在血細胞和血清之間形成隔離層，能有效阻止血細胞和血清之間的物質交換，同時可提高工作效率以及能分離出較多血清的特點，已被廣泛應用于臨床。有關分離膠采血管對檢驗結果影響的報道較多[1-4]，但分離膠采血管對特殊血液分離效果的報道卻較少見。本研究通過觀察多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者血液樣本在分離膠采血管中的分離效果，探討免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）等因素對分離膠采血管血液分離效果的影響及相應的處理辦法。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取河北省滄州市3家醫院（河北省滄州中西醫結合醫院、滄州市中心醫院、滄州市人民醫院）2012年6月—2016年12月收治的MM患者、自身免疫性疾病患者以及貧血患者。納入標準：（1）所有MM病例的診斷均符合《中國多發性骨髓瘤診治指南（2015年修訂）》[5]中的診斷標準；（2）所有MM病例均未經過任何藥物治療；（3）自身免疫性疾病患者總蛋白（total protein，TP）＞80 g/L；（4）貧血患者排除單克隆免疫球蛋白病且血細胞比容（hematocrit，HCT）＜40%；（5）所有患者均知情同意并簽署知情同意書。排除標準：（1）從透析管中采集的血液；（2）近期應用過造影劑的患者。

根據納入和排除標準選取MM患者221例（IgG型149例、IgA型65例、IgM型7例），分別采用免疫透射比濁法、雙縮脲法和血細胞分析儀檢測Ig、TP和HCT水平（采用肝素鋰抗凝）。根據Ig水平分組，將IgG型患者分為IgG≤47 g/ L組（A組，84例）和IgG＞47 g/L組（B組，65例），將IgA型患者分為IgA≤38 g/L 組（C組，39例）和IgA＞38 g/L組（D組，26例），所有IgM型患者IgM≤63 g/L，為IgM≤63 g/L組（E組，7例）；根據TP水平將50例自身免疫性疾病患者分為TP≤90 g/L組（F組，27例）和TP＞90 g/L組（G組，23例）；根據HCT水平將55例貧血患者分為HCT≤30%組（H組，26例）和HCT＞30%組（I組，29例）。各組年齡及性別構成比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。各組其他資料比較見表1。其中B、D和E組的Ig水平明顯高于A、C、F、G、H、I組（P＜0.05），B、D和G組TP水平明顯高于A、C、E、F、H、I組（P＜0.05），B、D和H組HCT水平明顯低于A、C、E、F、G、I組（P＜0.05）。

表1 各組間Ig、TP、HCT水平的比較 （±s）

表1 各組間Ig、TP、HCT水平的比較 （±s）

注：與A組比較，*P＜0.05；與C組比較，#P＜0.05；與E組比較，△P＜0.05；與F組比較，▲P＜0.05；與G組比較，●P＜0.05；與H組比較，◆P＜0.05；與I組比較，★P＜0.05

組別 例數 Ig（g/L） TP（g/L） HCT（%）A組 84 34.4±8.2 86.6±5.8 32.7±3.8 B組 65 63.4±8.1*#▲●◆★ 106.1±7.1*#△▲◆★ 22.3±3.4*#△▲●★C組 39 31.5±5.1 83.5±4.9 31.5±4.0 D組 26 56.9±10.5*#▲●◆★ 105.9±7.6*#△▲◆★ 23.4±5.1*#△▲●★E組 7 48.5±6.8*#▲●◆★ 87.8±7.0 33.2±3.6 F組 27 33.4±7.4 83.1±4.3 35.1±3.5 G組 23 38.7±4.9 99.5±3.7*#△▲◆★ 33.7±3.2 H組 26 24.8±4.3 77.4±4.9 23.9±3.8*#△▲●★I組 29 23.9±3.2 78.2±5.5 34.9±5.7

1.2 試劑和儀器

2種不同廠家的分離膠采血管（規格5 mL，100 mm×13 mm，上海碧迪醫療器械有限公司和河北滄州永康醫藥用品有限公司），肝素鋰抗凝管（規格5 mL，100 mm×13 mm，河北滄州永康醫藥用品有限公司），樣本前處理系統（日本Hitachi公司），7600-210全自動生化分析儀（日本Hitachi公司），XE-5000全自動血液分析儀及原裝配套試劑（日本Sysmex公司），Ig、TP試劑盒（北京森美希克瑪生物科技有限公司）。

1.3 樣本采集及處理

采集研究對象空腹靜脈血分別注入2種分離膠采血管以及肝素鋰抗凝管（3 mL/管）中，180度上下顛倒混勻5～6次，待分離膠采血管完全凝固后置樣本前處理系統中，經1 185×g離心10 min，觀察2種分離膠采血管血液分層、膠體分布以及血清含量。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行統計分析。計量資料進行正態性檢驗，符合正態分布的數據用x±s表示，不符合正態分布的數據進行轉換后再進行統計，組間比較采用完全隨機設計方差分。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2種分離膠采血管離心后的血液分離效果

2種分離膠采血管的血液分離效果未見明顯差異，均出現異常和正常2種不同的血液分離效果。異常血液分離效果為離心后分4層，自上而下依次為：血清、紅細胞（red blood cell，RBC）、膠體、RBC，上層血清含量極少，其下的RBC明顯增多，底層有少量RBC，見圖1。正常血液分離效果為離心后分3層，自上而下依次為：血清、膠體、RBC，血清含量較多，見圖2。

圖1 異常血液分離效果

圖2 正常血液分離效果

2.2 各組血液分離效果的比較

B和D組血液分離效果為異常，A、C、E、F、G、H、I組血液分離效果正常。

3 討論

血清分離膠是一種黏性流體，其結構中有大量氫鍵，通過締合作用形成網狀結構，這種網狀結構在離心力的作用下可被破壞，變成黏度低的流體，但當離心力消失后又會重新形成網狀結構，這種性質稱為觸變性。分離膠的密度界于血清和RBC之間，在離心力的作用下，由于密度的原因，分離膠位置由底部升至血清與RBC層之間，形成隔離層，這種現象稱為分離膠翻轉。有報道稱應用造影劑以及從透析管中采集的血液會造成分離膠翻轉異常[6-7]。目前，國內外關于分離膠采血管翻轉異常現象的報道多數集中在BD分離膠采血管出現膠體漂浮現象上[8-9]，而本實驗室在日常工作中發現用分離膠采血管采集TP、Ig水平明顯升高，HCT、RBC明顯降低的MM患者的血液，經最大離心力為1 185×g離心后出現分離膠不能有效翻轉、血液分層明顯異常、血清量極少、RBC明顯增多的現象，血清量無法滿足檢驗需求。

王子娥等[10]研究了2種不同膠體成分的BD采血管，發現膠體成分為丙烯酸PS510的分離膠采血管在血清IgG＞50 g/L時，經2 000×g離心10 min出現分離膠漂浮現象，出現了分離膠、血清、血細胞層的分布特點，而成分為聚酯凝膠P5A的分離膠采血管沒有出現分離膠漂浮現象，推測這種現象可能由分離膠成分的不同造成分離膠密度細微差別引起。FATáS等[11]在發現分離膠漂浮現象后，為了找到分離膠漂浮的原因，他們用不同密度、黏度的葡聚糖生理鹽水溶液模擬不同狀態的血液，證實血清（血漿）的密度是影響分離膠漂浮的主要原因，而非血清（血漿）黏度。FAUGHT等[12]選擇不同廠家分離膠采血管進行葡聚糖模擬實驗，隨著模擬物密度的增加，各廠家的分離膠采血管均出現分離膠漂浮現象，進一步證實了任何導致血清（血漿）密度增加并且超過分離膠密度的因素都能引起分離膠翻轉異常。本研究選取的2種分離膠采血管的主要成分為聚酯凝膠P5A（上海碧迪醫療器療器械有限公司）和烯烴低聚物（河北滄州永康醫藥用品有限公司），是目前國內分離膠采血管生產廠家應用較多的膠體成分，雖未發現膠體漂浮現象，但本實驗室發現TP、Ig水平明顯升高，HCT、RBC明顯降低的MM患者2種分離膠采血管均出現膠體位置異常、肉眼紅細胞層明顯增多，但血液常規結果顯示HCT明顯降低的現象，說明膠體成分不是造成這一現象的主要原因，同時也說明肉眼所見的RBC層含有大量的血清成分，形成RBC、血清混合層。如將該混合層看成一個整體，由于血清成分較多，該層的密度有可能低于膠體密度，因此膠體不能在RBC和血清之間形成隔離層，而底層的少量RBC層由于含有血清成分少，密度比膠體大，所以出現在底部。本研究結果顯示，Ig、TP水平相對較低而HCT水平相對較高的A、C、F、I組和單一Ig水平明顯升高的E組以及單一TP水平明顯升高的G組和單一HCT明顯減少的H組血液分離現象均正常，只有Ig、TP水平明顯升高，HCT明顯降低的B組和D組出現異常分離現象，說明Ig、TP、HCT單一因素的明顯異常不會導致血液分離異常，只有Ig、TP、HCT等同時出現異常才會造成血液異常分離，這些異常因素共同導致血凝塊形成受影響以及血塊回縮不良。

隨著檢驗醫學的發展，越來越多的實驗室引進了全自動流水線，流水線的應用極大地降低了檢驗人員的工作強度。在方便的同時，以前可以通過肉眼觀察到的異常現象卻容易被忽視，但流水線在進行血清自動提取的過程中也經常出現提取失敗的情況，除血樣過少外，真性紅細胞增多癥、肺心病、MM等也會出現血清量過少的現象，在觀察血清量的同時也要對血液分層、膠體分布情況進行觀察，無論是膠體翻轉異常還是分層出現問題，均要考慮該樣本可能存在Ig、TP、HCT異常的情況，同樣也要考慮MM存在的可能性。

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