北京地區306 例貓上呼吸道感染主要病原調查

鄭思艷， 呂艷麗， 解啟寶

(1.中國農業大學動物醫學院， 北京 海淀 100193 ；2.中國牧工商集團有限公司， 北京 豐臺 100070)

貓上呼吸道疾病(URTD)是引起幼貓發病和死亡的重要原因之一，通常由一個或多個病原感染引起的，從而出現以呼吸道或眼部疾病為特征的貓呼吸道疾病癥候群(FRDC)，常見的感染病原有FCV，FHV，支原體，衣原體，波氏桿菌等[1-2]。 由于各種病原引起的臨床癥狀相似，很難通過臨床癥狀進行疾病的判定。 因此運用分子生物學方法進行病原鑒定，對臨床治療以及合理預防提供指導性作用[3]。

1 研究對象與研究方法

1.1 病料來源 2016 年5 月-2017 年3 月以中國農業大學動物醫院接診的具有上呼吸道感染癥狀的病貓為研究對象，采集每只患貓的眼結膜、口咽和鼻黏膜拭子276 例。 2016 年9 月對北京出現上呼吸道感染癥狀的某貓舍進行調查，采集病料30 份。

1.2 發病情況統計 對306 例患貓的年齡及發病時間進行統計分析。

1.3 PCR 檢測

1.3.1 DNA 和RNA 提取 參照北京艾德萊生物科技有限公司的病毒基因組DNA/RNA 快速提取試劑盒說明書提取DNA 和RNA。

1.3.2 PCR 和RT-PCR 擴增 參考GenBank 報道的FHV、FCV 基因序列，設計引物FHVU、FHVD、FCV-F、FCV-R，按照Bianka 等人設計的支原體[4]、衣原體[5]引物和反應體系，擴增FCV、FHV、支原體、衣原體。

1.3.3 電泳 待PCR 反應結束后，取5 μL 產物置于1.0 %瓊脂凝膠上電泳，紫外燈下觀察結果。

1.3.4 PCR 測序 將PCR 產物送至奧美德諾公司測序，然后將測序結果與NCBI 中的序列進行比對。

2 結果

2.1 FCV、FHV、支原體、衣原體檢出情況 見表1。對所有306 份樣本分別進行FHV、支原體、衣原體的PCR 檢測比對，FCV 的RT-PCR 檢測比對，其中檢出FHV 陽性樣本67 份，陽性率為21.9%；檢出FCV 陽性樣本102 份，陽性率為33.3%；檢出支原體陽性樣本111 份，陽性率為36.3%；檢出衣原體陽性樣本4 份，陽性率為1.3%。

2.2 FCV、FHV、支原體、衣原體混合感染情況 見表2。 在306 份樣本中，共有73 份混合感染情況，其中檢出FHV、FCV 混合感染13 份，陽性率4.2%(13/306)，FHV、支原體混合感染19 份，陽性率6.2%(19/306)，FCV、支原體混合感染32 份，陽性率10.5%(30/306)，支原體、衣原體混合感染1 份，陽性率0.3%(1/306)， FHV、FCV、支原體混合感染8 份，陽性率2.6%(8/306)。

表1 FHV、FCV、支原體、衣原體檢出情況

表2 FHV、FCV、支原體、衣原體混合感染情況

2.3 FCV、FHV、支原體感染患貓年齡分布 見表3。 在所有檢測樣本中，有年齡記錄的共302 份，FHV 檢測結果為陽性的樣本有年齡記錄的共63份，其中大于9 歲年齡段出現上呼吸道臨床癥狀的貓檢出FHV 的陽性率最高(28.6%)，3 月齡以下年齡段最低(14.8%)；FCV 檢測結果為陽性的貓有年齡記錄的共102 份，其中3 月～6 月年齡段出現上呼吸道臨床癥狀的貓檢出FCV 的陽性率最高(41.2%)，1 歲～9 歲年齡段最低(21.5%)；支原體檢測結果為陽性的貓有年齡記錄的共109 份，其中小于3 月齡出現上呼吸道臨床癥狀的貓檢出支原體的陽性率最高(42%)，9 歲以上年齡段最低(7.1%)。

2.4 FHV、FCV、支原體感染陽性率與發病時間的關系 見表4。 FHV 在2016 年10 月的檢出率最高(42.9%)，9 月最低(5.7%)；FCV 在2016 年7 月的檢出率最高(52.2%)。 9 月最低(20.8%)；支原體在2016 年7 月的檢出率最高(52.2%)。 5 月最低(9.5%)。

表3 FHV、FCV、支原體感染患貓年齡分布

3 討論

3.1 FCV、FHV、支原體陽性率的比較 FHV 和FCV 是引起呼吸道疾病的常見病毒。 本次調查中共采集306 份表現臨床癥狀的患貓的樣本，共獲得FHV 陽性樣本67 個(21.9%)，FCV 陽性樣本102個(33.3%)，FCV 陽性率高于FHV 的陽性率。 這與在巴西南部南里奧格蘭德州采集樣本檢測的一致[6]。 對于有臨床表現和無臨床表現的健康貓而言，FCV 的患病率相較于FHV 更高些，其原因可能是疫苗的應用，研究表明，疫苗很可能減少了排放FHV 的患貓的數量，而對于排放FCV 的患貓數量影響不顯著[7]；因為FCV 是RNA 病毒，具有廣泛的遺傳性和抗原多樣性；而FHV 是穩定的DNA 病毒，所以，疫苗可較好的預防FHV 感染[8]。 此外，FCV攜帶貓會連續不斷的排毒，而FHV 攜帶貓只是間歇性的排毒，也是FCV 陽性率高于FHV 陽性率的可能原因之一。 支原體作為一種共生菌，只有在與其他病原同時出現時才具有致病性，如FHV[9]。 本調查顯示，111 例支原體陽性樣本中，混合感染的達到60 例，并且其單一陽性率高于FCV 和FHV，支原體為共生菌，將其列為上呼吸道感染的主要病原存在爭議，但由于其常導致上呼吸道感染的繼發感染，故在治療上呼吸道感染性疾病時仍應充分考慮。

表4 FHV、FCV、支原體感染陽性率與發病時間的關系

本調查中，104 例(34%)表現臨床癥狀的患貓并未檢測出FHV、FCV、支原體和衣原體，提示除了這四種病原外，可能還有其他病原參與引發呼吸道疾病，如真菌，波氏桿菌和其他病毒[10-11]。 在呼吸道疾病的晚期采樣可能檢測不到病毒[11-12]。 病料從采集到檢測的轉運過程中，病原的降解也可導致檢測不出相應的病原[13]，為避免樣本的降解，需立即放入- 20 ℃凍存，并可能在96 小時內進行檢測[14]。

3.2 FCV、FHV、支原體感染患貓發病年齡比較本次調查，9 歲以上的貓FHV 檢出率最高，而3 月齡以下的貓檢出率最低，原因可能為FHV 病毒感染后會終身帶毒，病毒終身潛伏于神經細胞內，應激等因素會引起病毒的再次激活和散播[15]，老年貓由于機體抵抗力降低，感染發病的可能性增大；而3 月齡以下的幼貓由于母源抗體的保護和生存環境相對穩定，受到的應激影響較小而檢出率較低。 初生幼貓可獲得母源抗體的保護，但持續時間一般不超過10 ～14 周[16]，幼貓一般在10 周齡左右進行疫苗接種，在隨后的4 ～8 周內完成免疫程序，而且FCV作為RNA 病毒，具有較強的變異性，疫苗的保護力度有限[16]，這可能是本文中3 ～6 月年齡段的幼貓的FCV 陽性率最高的原因。 幼年貓由于抗感染能力較弱，繼發支原體的幾率高，因此其陽性樣本中幼年貓所占比例最高。

3.3 FCV、FHV、支原體感染患貓發病時間比較本調查中，FHV 在冬季較夏季檢出率高，而FHV 在夏季較冬季檢出率高，這與病毒的理化特性相關，因為FHV 為有囊膜的病毒，對熱抵抗力差[17]，而FCV 為無囊膜的RNA 病毒，對外界環境具有較強的抵抗力，對較高天氣溫度不敏感。 2016 年10 月的FHV 和FCV 檢出率均較高，支原體檢出率也高于年均水平，這與該時間段貓只貿易活躍的情況吻合，相關性仍需進一步探索。 貓在冷、熱應激狀態下，機體抵抗力下降，支原體作為條件致病菌可趁機“肆虐”，因此，7、8 月和12、1 月，支原體的檢出率高。

4 結論

本次調查針對具有上呼吸道感染癥狀的患貓，主要感染病原有支原體、FCV、FHV，FCV 陽性率高于FHV 陽性率；幼貓支原體和FCV 檢出率最高，老年貓FHV 檢出率最高；在7、8 月高溫時支原體和FCV 檢出率最高，10 月份FHV 檢出率最高。