北京地區奶牛球蟲感染情況調查

李復煌， 于 童， 蘇山春， 潘保良， 鄭瑞峰， 陳京媛， 劉康， 賈 婷， 汪 明

(1.北京市畜牧總站， 北京 朝陽 100107 ；2.中國農業大學動物醫學院， 北京 海淀 100193 ；3.北京動物園， 北京 西城 100044)

艾美耳科的多種球蟲都可引發奶牛球蟲病。奶牛球蟲病以出血性腸炎為特征，在世界范圍內均有分布，且可在任何季節發病，尤其潮濕、衛生較差的環境易造成本病的流行。 犢牛的發病率較高，且容易造成死亡，青年牛和成年牛常呈隱性感染，感病率和感染強度均不高。 發病期間，腹瀉的犢牛每克糞便卵囊數(Oocysts per gramme，OPG)可達到3萬～5 萬，其他犢牛攝入孢子化卵囊即可引起大規模發病，造成嚴重的經濟損失。

為了了解北京地區奶牛球蟲病的感染情況，我們于2016 年6 月-2017 年6 月選取北京地區的奶牛場進行采樣，對這些地區奶牛球蟲的流行情況進行調查，從而為北京地區奶牛球蟲病的預防和控制提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器 100 mL 量筒、50 mL 燒杯、100 mL離心管、40 目銅篩、計數器、載玻片、蓋玻片、玻璃棒、1 mL 塑料吸管，以上器具使用之前洗干凈并在烘箱內80 ℃烘烤2 ～3 h。 改良麥克馬斯計數板(上海潤友科技有限公司)；天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；離心機(北京時代北利公司)；OLYMPUS BX53F ：顯微鏡(日本OLYMPUS公司)。

1.2 樣品來源 2016 年6 月-2017 年6 月，于北京的順義區、昌平區、房山區、大興區、延慶區、密云區、懷柔區、通州區9 個遠郊區縣30 個養殖場采取奶牛新鮮糞樣，進行球蟲感染情況調查。 糞樣共采集2 307 份，其中0 ～2 月齡犢牛糞樣共398 份，2 ～6月齡犢牛共468 份，大于6 月齡的青年牛與成乳牛共1 441 份。

1.3 樣品的采集與保存 記錄場名、飼養規模與養殖條件等信息后，根據養殖規模對不同年齡段的牛進行樣品采集，按照10∶1的比例采集樣品。 盡量采取直腸的糞便，或采集牛舍、運動場剛排出的新鮮糞便50 ～100 g，將糞便攪拌均勻后抓取樣品，排出空氣，做好標記，放置于4 ℃冰箱備用。 樣品保存時間不超過一周。

1.4 樣品檢測及感染強度確定 采用改良麥克馬斯特法計數法檢測樣品[1]，并統計陽性糞便的OPG。

1.5 艾美耳球蟲蟲種初步鑒定 以牛場為單位，選取2 ～6 月齡犢牛OPG 較高(≥800)陽性糞便，進行孢子化處理。 顯微鏡下先觀察卵囊的形態、顏色、大小、卵囊壁的厚度；然后觀察孢子囊形態、大小、有無內外殘體、折光體、有無卵膜孔等，根據卵囊特征參照圖譜進行蟲種初步鑒定。

2 結果

2.1 北京地區部分奶牛場球蟲感染率與感染強度 從表1 可看出，盡管不同區縣奶牛養殖規模存在差異，但在本次調查的30 個奶牛場均存在球蟲感染，奶牛場的陽性率為100%；牛的平均感染率為23.88%，平均感染強度即OPG 值為549(見表1)。

2.2 不同年齡階段牛的球蟲感染率與感染強度在北京地區所調查的3 個年齡段奶牛的球蟲感染率分別為：0 ～2 月齡犢牛16. 83%；2 ～6 月齡犢牛38. 25%；6 月齡以上牛21. 12%；2 ～6 月齡犢牛感染率最高。 球蟲的感染強度亦有差異，各個年齡組中：2 ～6 月齡犢牛的球蟲感染率最高，其平均OPG 值達到1 032；小于2 月齡與大于6月齡的牛只感染強度相對較低，其OPG 值分別為334 與267。 不同年齡階段奶牛球蟲感染率見表2。

2.3 艾美耳球蟲種類及孢子化卵囊形態特征 根據孢子化卵囊的形態特征初步鑒定，北京地區奶牛場存在7 種牛艾美耳球蟲，分別為：邱氏艾美耳球蟲(Eimeria zuernii))、牛艾美耳球蟲(Eimeria bovis)、橢圓艾美耳球蟲(Eimeria ellipsoidalli)、柱狀艾美耳球蟲(Eimeria ellipsoidalli)、撥克朗艾美耳球蟲(Eimeria bukidnonensis)、 亞 球 艾 美 耳 球 蟲(Eimeria subspherica)、加拿大艾美耳球蟲(Eimeria canadensis)，各種艾美耳球蟲所觀察到的孢子化卵囊形態見圖1。

表1 北京地區不同牛場奶牛球蟲感染情況

表2 不同生長階段牛的球蟲感染率與感染強度

2.4 不同種類艾美耳球蟲在北京地區的感染情況 根據調查結果，30 個球蟲陽性的牛場共查出7 種艾美耳屬球蟲，最常見的球蟲蟲種為邱氏艾美耳球蟲，其檢出率為33.01%，其次為牛艾美耳球蟲，其比例占所檢測卵囊的31.09%，橢圓艾美耳球蟲的感染率也有25.32%之多。 檢出率最低的為柱狀艾美耳球蟲，僅占全部檢測卵囊的1.34%。而撥克朗艾美耳球蟲也只有1. 45% 的檢出率。北京地區不同牛場的球蟲種類及其感染率見表3。

圖1 牛球蟲初步鑒定結果 (400 ×)

表3 北京地區奶牛感染的球蟲種類及其感染率

在此次調查中，對順義牛場4、密云牛場2、通州牛場3 發病的犢牛樣品進行了孢子化培養，其他樣品均為按場統計。 發病的犢牛均為多種球蟲混合感染，最多的一頭病牛混合感染了6 種球蟲。 各個牛場的調查結果也均為混合感染而并非單一蟲種。

3 討論

3.1 本次共調查了30 個養殖場共計2 307 頭牛，球蟲平均感染率為23.88%，最低感染率為11.38%，最高感染率為46.84%，不同養殖場的球蟲感染率不同。本次調查結果顯示，北京地區牛球蟲感染非常普遍，但感染率低于安徽(66.34%)[2]、云南(50%)[3]、揚州(37.16%)[4]、上海(37.46%)[5]，基本與張龍現等調查的鄭州市郊8 個奶牛場奶牛球蟲感染率29.6%相似[6]，但高于河南新鄭黃牛13.89%的感染率[7]。 奶牛在任意年齡段均可感染球蟲，感染率與感染強度最高的為2 ～6 月齡的犢牛，其感染率為38.25%，OPG 值1 032；6 月齡以上的牛，其感染率為21.12%，其OPG 值為267；感染率最低的為小于2 月齡的犢牛，感染率為16.83%，OPG 值為334。這與高曼報道的0 ～3 月齡犢牛感染率最低的結果相似[8]。 年齡是影響球蟲感染的重要因素[9-10]。2 ～12月齡的犢牛體內，母源抗體的保護逐漸消失，而自身免疫系統尚未成熟，犢牛感染球蟲后自身清除機制低下，易被球蟲或其他病原微生物感染。 隨著年齡的增長和自身免疫系統的完善，對病原入侵的抵抗力增強。 而對0 ～2 月齡的犢牛而言，其母源抗體可以保持在足夠高的水平，以抵御病原入侵，保護幼齡動物免受某些疾病威脅，提高存活率。 同時，飼養管理上，0 ～2 月齡的犢牛多生活在犢牛島，與潛在的感染源—帶蟲母牛是隔離飼養的，這樣就減少了犢牛與病原的直接接觸，因此0 ～2 月齡的犢牛感染率較低，而2 月齡以后，犢牛會從犢牛島轉移到圈舍集中飼養，提高了接觸病原與互相傳播的機會，加之母源抗體水平下降，使得2 ～6 月齡的犢牛成為感染率最高且OPG 值最高的生長階段，這與其他調查研究的結果相同。 球蟲感染犢牛可引起腹瀉和死亡，因此，2 ～6 月齡犢牛球蟲病的防控應當引起養殖場重視。

3.2 艾美耳球蟲種類豐富，坦桑尼亞報道發現7 個蟲種[11]，澳大利亞的調查報告指出在當地檢出11種牛球蟲[12]，而一項在土耳其的調查也檢出11 種牛球蟲[13]。 本次調查共涉及北京地區的30 個養殖場，共檢出7 種艾美耳球蟲，7 種牛球蟲分別為：牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲、亞球形艾美耳球蟲、柱狀艾美耳球蟲、撥克朗艾美耳球蟲與加拿大艾美耳球蟲，其中優勢種為牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲與橢圓艾美耳球蟲，其他4 種球蟲占的比例較少，所檢測的3 個發病病例皆為多種球蟲混合感染。 但各個地區、各個牛場、各個年齡段奶牛所流行的奶牛球蟲種類及感染率有所差異。 這可能與不同牛場的地理位置、歷史感染情況、牛只引進途徑、飼養管理條件差異有很大的關系。