盧 巖, 孫亞美, 王 昕, 張成林
(1.圈養野生動物技術北京市重點實驗室,北京 西城 100044;2.北京動物園,北京 西城 100044)
寄生蟲病是危害爬行動物的一類常見疾病,野生和圈養的爬行動物受到各式各樣的體內和體外寄生蟲的感染。 大量的寄生蟲感染對爬行動物的正常生存與繁殖影響極大,一方面是造成圈養爬行動物生病和死亡的直接原因,另一方面寄生蟲感染降低了爬行動物機體的抵抗力,使其對其他疾病易感,從而發病,甚至死亡。 針對這種情況我們于2007 年對園內兩棲爬行館內的爬行動物開展了寄生蟲普查工作。 通過對比直接涂片法與腸胃寄生蟲檢測試劑盒法對爬行動物腸道寄生蟲的陽性檢出率,來為臨床糞檢化驗提供參考。 通過對比寄生蟲圖譜,確定寄生蟲種類,有助于臨床的合理用藥。
1.1 儀器與器械 采樣需要的容器(糞便盒),常規實驗室糞檢所用的儀器物品(顯微鏡、載玻片、蓋玻片等),無菌生理鹽水,一次性滅菌試管和吸管,Ovatec Plus System 胃腸寄生蟲檢測試劑盒(96-0562)(由美國Synbiotics 公司生產,上海必優生物科技有限公司經銷)。
1.2 糞便采集 用糞便盒采集動物排出的新鮮糞便,登記編號后送往實驗室。
1.3 受檢動物 我園兩棲爬行館飼養的部分爬行動物,取自各個籠舍,共21 種,25 只。
1.4 方法
1.4.1 直接涂片法(方法1) 收集爬行動物的新鮮糞便,取少量糞便用無菌生理鹽水稀釋于滅菌試管中,混勻后涂片鏡檢,先用低倍鏡檢出蟲體或蟲卵,再在高倍鏡下確定蟲體或蟲卵,并計數。
1.4.2 腸胃寄生蟲檢測試劑盒法(方法2) 嚴格按照使用說明書進行操作。
1.5 數據分析 陽性檢出率是用檢測到糞便中含寄生蟲蟲體或蟲卵的爬行動物只數,除以受檢爬行動物的總只數,以百分數表示。
2.1 受檢動物種類與數量 受檢動物總共21 種25 只,來自各個籠舍飼養點。 其中蜥蜴類11 種15只:斗篷蜥1 只,古巴變色樹蜥2 只,伊犁沙虎1 只,環頸蜥1 只,金黃雙領蜥1 只,避役1 只,美洲蜥2只,西非擬蜥1 只,藍舌蜥2 只,雙脊冠蜥2 只,玉米蜥1 只;蛇類5 種5 條:水律蛇1 條,棕黑錦蛇1 條,黑眉錦蛇1 條,眼鏡蛇1 條,黑尾蟒1 條;龜類5 種5只:印度星龜1 只,三棱龜1 只,扁平陸龜1 只,凹甲陸龜1 只,靴腳陸龜1 只。
2.2 兩種方法檢查情況對比 采用方法一得出的陽性檢出率為68%,采用方法二得出的陽性檢出率為84%。 由于寄生蟲有很高的傳染性,同一飼養籠舍的動物極易患同種寄生蟲病,因此檢驗結果說明我園大多數的爬行動物都感染寄生蟲,寄生蟲對爬行動物的影響應引起我們的關注。
方法二無論在低倍鏡下還是在高倍鏡下,視野中糞渣幾乎沒有,比方法一的視野要清楚,檢出率高,更便于分析。
2.3 受檢動物感染寄生蟲的情況 見表1。
如表1 所示:(1)蜥蜴類:11 種15 只中,有線蟲卵的糞樣陽性檢出率為80%(12/15);(2)蛇類:5種5 條中,有線蟲卵的糞樣陽性檢出率為80%(4/5),有鼠鱗虱卵的糞樣陽性檢出率為20%(1/5);(3)龜類:5 種5 只中,有線蟲卵的糞樣陽性檢出率為80%(4/5),有滴蟲的糞樣陽性檢出率為60%(3/5),有吸蟲卵的糞樣陽性檢出率為20%(1/5),有球蟲卵的糞樣陽性檢出率為40%(2/5),有結腸小袋蟲的糞樣陽性檢出率為20%(1/5)。
2.4 受檢動物的感染類型及感染程度
2.4.1 單一感染 由表1 所示,在受檢動物中,蜥蜴類和蛇類都是單一感染。 有16 只爬行動物的糞樣里僅看到線蟲蟲卵或成蟲,有1 只爬行動物的糞樣里僅看到鼠鱗虱卵。 其中蟲卵數量最多,感染最嚴重的是雙脊冠蜥,一個視野中最多可見30 個蟲卵;其次是伊犁沙虎,一個視野中最多可見8 個蟲卵;其他爬行動物的糞樣,一個視野中最多可見3 個蟲卵。

表1 受檢動物糞樣感染寄生蟲的情況
2.4.2 混合感染 由表1 所示,在受檢動物中,除了在凹甲陸龜的糞樣中未發現寄生蟲卵外,其他的龜類均是混合感染。 感染寄生蟲種類最多的是扁平陸龜,其糞樣中發現3 種寄生蟲卵(線蟲卵、吸蟲卵、球蟲卵)及1 種原蟲(滴蟲);其次是靴腳陸龜,其糞樣中發現1 種寄生蟲卵及2 種原蟲;其余龜類糞樣中均發現2 種寄生蟲或卵。
試用情況見表2。
4.1 直接涂片法方法簡單,但每個樣品應檢多片才能提高檢出率,容易漏檢。 腸胃寄生蟲檢測試劑盒糞便漂浮檢測系統,是簡單且準確的臨床識別腸胃寄生蟲的方法,原因是該試劑盒使用的是硫酸鋅漂浮液介質和專利的檢測裝置設計。 硫酸鋅漂浮液介質比重為1.18 ~1.2,能漂浮所有的腸胃寄生蟲。 專利設計增加了過濾面積,可以收集漂浮更多的寄生蟲卵和囊胞;獨特的儲液槽設計,即使裝滿溢出也不會污染到實驗室,特別是可以避免有人獸共患病的危險;正壓縮柱式過濾器,不會泄漏,附按扣設計的蓋子可緊緊封住,方便廢棄物處理。

表2 爬行動物常用驅蟲藥及劑量
4.2 使用腸胃寄生蟲檢測試劑盒檢查,發現顯微鏡下視野清晰,雜質少,檢出率高,克服了比重較大硫代硫酸鈉漂浮液(比重為1.22)顯微鏡視野中雜質較多[4]的缺點。 試驗證實:腸胃寄生蟲檢測試劑盒法對大多數蟲卵檢出率明顯優于直接涂片法,但對滴蟲檢測率差于直接涂片法,可能由于滴蟲在硫酸鋅溶液中是游動的,沾到蓋玻片上的幾率低,如果懷疑有滴蟲感染,可以結合直接涂片法進行檢測。
4.3 普查的結果說明我園爬行動物的寄生蟲感染陽性率是比較高的,雖然一些動物未表現出明顯臨床癥狀,但也應引起我們足夠重視,依據已確診的寄生蟲種類來制訂出對臨床工作有指導意義的驅蟲計劃。 就像一些較高級的脊椎動物那樣,爬行動物在表現出病癥之前,身上的寄生蟲已生活了相當長一段時間,當容易受感染的因素損害寄主并使明顯的感染進一步發展時,就可能會表現出臨床癥狀。 有些寄生蟲感染會不知不覺地加重,并在過了相當長一段時間后表現出來。 如果在這種情況下最終診斷出這種疾病時,宿主常常已無法治療了。
4.4 不能僅僅因為確診感染了寄生蟲,就認定此爬行動物需要治療。 如果治療,必須考慮寄生蟲的生活史,除了對癥治療之外,根據寄生蟲的感染途徑及生活環境進行干擾。 例如受艾美耳球蟲感染的動物,其獸舍可以應用3%次氯酸鈉溶液消毒。 糞檢查出有鼠鱗虱卵的動物,對其飼料要進行篩選,這種蟲卵是寄生于嚙齒類動物的體外寄生蟲的卵,蟒蛇在吞噬這類食物時就有可能感染。
4.5 寄生于爬行動物的某些原蟲、蠕蟲及體外寄生蟲,也可感染于人。 飼養人員及獸醫在接觸患病動物時,要注意做好自身防護,預防人獸共患病的發生。