GRO-α和CMTM-8在宮頸癌發病機制中的作用

張隆英，林敏秀，林楓，陳豪

（臺州市中西醫結合醫院，浙江 溫嶺 317523）

趨化因子是一類在生理條件下發揮重要作用的蛋白質，負責細胞骨架的重構、細胞遷移，參與免疫反應等，近年研究表明，很多趨化因子還參與了癌癥的發生與惡化，其在腫瘤的生長、轉化、局部浸潤與遠處轉移等生物學行為中可能起著重要的作用[1-2]。趨化因子中生長相關癌基因 （growth-related oncogene，GRO）和趨化素樣因子超家族成員CMTM-8表達與多種癌組織，比如胃癌、結腸癌、黑色素瘤等有關，但與宮頸癌的關系目前尚不清楚。本研究通過檢測手術后宮頸癌組織GRO-α和CMTM-8的表達，探討宮頸癌的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入標準：（1）符合 《中華婦產科學》中宮頸癌的病理診斷[3]；（2）原發宮頸病變；（3）影像學資料齊全；（4）術前未行放化療。排除標準：（1）宮頸轉移性腫瘤；（2）有明顯的手術禁忌證。選擇2011年1月～2016年10月臺州市中西醫結合醫院婦產科收治的46例宮頸癌患者，年齡27～76歲，平均（49.45±13.57）歲，術后病理確診為宮頸癌。取宮頸癌組織為宮頸癌組，癌旁2cm正常組織為對照組。

1.2 方法 多克隆兔抗人GRO-α抗體，購自Biomedical Technologies公司，抗人CKLFSF-8多克隆抗體購自上海天鴻生物科技有限公司，即用型SP試劑盒（PV-6000）購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化方法：采用SP法測定GRO-α和CMTM-8的表達。主要步驟包括標本經石蠟切片，二甲苯脫蠟梯度酒精水化，3%過氧化氫滅活，抗原修復，兔血清液封閉，滴加Ⅰ抗、Ⅱ抗及鏈霉素抗生素蛋白-過氧化物酶復合物，DAB顯色，蘇木素復染，脫水封片。PBS代替Ⅰ抗進行陰性對照。抗體稀釋濃度分別為1:50和1:25。

1.3 結果判定 光鏡下觀察細胞著色情況。每張切片隨機觀察5個視野（×200），取其平均值為每張切片的觀察結果。陽性細胞的胞漿呈棕色或棕黃色，并按陽性細胞所占比例來判定結果。陰性（-）：陽性細胞數＜5%；弱陽性（+）：陽性細胞數占 5%～24%；陽性（++），陽性細胞數占 25%～50%；強陽性（+++）：陽性細胞數＞50%。本文陽性包括弱陽性、陽性和強陽性。

1.4 統計學處理 應用SPSS 22.0統計軟件行統計分析，計量資料用（±s）表示，組間比較采用 t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，GRO-α和CMTM-8蛋白表達的相關性采用Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 GRO-α與CMTM-8的表達 GRO-α與CMTM-8主要表達在宮頸上皮組織的胞漿內，免疫組化結果顯示陽性細胞的胞漿呈棕黃色 （圖1）。宮頸癌組GRO-α蛋白的陽性率顯著高于對照組，CMTM-8蛋白的陽性率顯著低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），詳見表 1。 GRO-α 表達的陽性率與腫瘤的發生及淋巴結轉移有關（P＜0.05），而與分化程度、臨床分期無關（P＞0.05）；CMTM-8 表達的陽性率與腫瘤的分化程度、臨床分期和淋巴結轉移均有關（P＜0.05），詳見表 2。

圖1 GRO-α 和 CMTM-8的表達（SP×200）

表1 兩組GRO-α和CMTM-8的表達情況（n，%）

表2 宮頸癌組中GRO-α和CMTM-8蛋白陽性率與臨床病理特征的關系（n，%）

2.2 GRO-α與CMTM-8相關性 宮頸癌組GRO-α與CMTM-8經spearman等級相關分析，兩者呈負相關（r=-0.46，P＜0.05），詳見表 3。

表3 宮頸癌組GRO-α和CTMT-8表達的等級相關性（n）

3 討論

宮頸癌的發生與人乳頭狀瘤病毒感染有關，趨化因子可能發揮趨化中性粒細胞至炎癥部位參與免疫反應的作用。近年來發現其對腫瘤的增殖與遷移也起著一定的作用，可作為潛在的治療腫瘤的靶點[4-5]。CMTM-8基因其編碼的蛋白質屬于趨化素樣因子超家族成員中的一員，不僅具有趨化作用，還在細胞粘附、聚集、跨膜信號轉導、炎癥反應以及免疫反應中具有重要作用。Li等[6]報道，過表達CMTM-8可抑制宮頸癌細胞（Hela細胞）的增殖能力，若CMTM-8水平下降，則Hela細胞增殖能力增強。據此推測CMTM-8可能是潛在的抑癌因子。本研究中，CMTM-8在宮頸癌組織中的陽性表達率較周圍正常組織低也提示CMTM-8存在抑制癌細胞表達的作用。另外，宮頸癌組織中GRO-α蛋白表達陽性率顯著高于周圍正常組織，提示GRO-α蛋白表達增加，對腫瘤細胞可能起著促進作用。

GRO-α與CMTM-8的臨床病理關系的研究提示，GRO-α與淋巴結轉移有關，而與分化程度、臨床分期無關，而CMTM-8與分化程度、臨床分期及淋巴結轉移均有關，提示GRO-α與腫瘤的轉移有一定的關系，而CMTM-8與腫瘤的形成，發生和發展有較為密切的關系。根據相關性分析顯示，GRO-α與CMTM-8在宮頸癌中存在負相關，GRO-α的表達促進腫瘤發展，而CMTM-8的表達抑制腫瘤的發展，但具體作用機制有待于進一步研究。

綜上所述，宮頸癌組織中GRO-α蛋白表達水平增加，而CMTM-8表達下降，它們可能參與宮頸癌組織生物進程，故針對GRO-α和CMTM-8的免疫治療有一定的應用前景，值得進一步研究。

[1]De Filippo K，Dudeck A，Hasenberg M，et al.Mast cell and macrophage chemokines cxcl1/cxcl2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation.Blood，2013，121（24）:4930

[2]Maeda A，Bandow K，Kusuyama J，et al.Induction of cxcl2 and ccl2 by pressure force requiresil-1 beta-myd88 axis in osteoblasts.Bone，2015，74（7）:76

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[4]Jiang YP，Wu XH.Correlations of chemokine CXCL12 and its receptor to tumor metastasis.Ai zheng，2007，26（2）:220

[5]王淑強，李鵬，郭穎，等.趨化因子受體在子宮頸癌中的表達及臨床意義.中國老年雜志，2010，30（15）：2105

[6]Li D，Jin C，Yin C，et al.An alternative splice form of CMTM8 induces apoptosis.Int J Biochem Cell Biol，2007，39（11）:2107