超高效液相色譜-串聯質譜法測定水體中稻瘟靈和吡唑醚菌酯

李 紅，林 琎,，許樂園，慕 衛,*

(1.山東農業大學 植物保護學院，山東泰安 271018；2.山東農業大學 農藥環境毒理研究中心，山東泰安 271000)

水稻紋枯病和稻瘟病嚴重影響稻米產量和品質，其防治需要大量依賴化學農藥。孫雪等[1]和宋益民等[2]田間試驗發現，將吡唑醚菌酯與稻瘟靈混用可有效解決單劑的大量使用造成的農藥殘留及藥害問題，同時防治水稻紋枯病和稻曲病等病害。然而，施用稻瘟靈和吡唑醚菌酯后，部分藥劑因直接脫靶或其他形式損失，如經雨水沖刷、地面徑流或滲透等多種途徑造成水環境污染，因此，亟需一種高效靈敏、可同時檢測兩者的技術。目前已報道稻瘟靈和吡唑醚菌酯的檢測方法主要為氣相色譜法[3]和高效液相色譜法[4,5]，但是上述2種方法檢出限高，靈敏度低。超高效液相色譜-串聯質譜法具有檢測快速、準確等優點，常用于農藥多殘留檢測，但目前尚未見對該2種有效成分采用超高效液相色譜-串聯質譜法的報道。本研究通過條件優化，建立了超高效液相色譜-串聯質譜法測定水體中稻瘟靈和吡唑醚菌酯的分析方法，該方法快速、準確、高效、靈敏度高，可用于上述2種有效成分的殘留檢測以指導安全用藥。

1 材料與方法

1.1 藥劑與儀器

稻瘟靈標準樣品(純度98.0%)、吡唑醚菌酯標準樣品(純度99.0%)，由山東農業大學農藥環境毒理研究中心提供；甲醇、甲酸為色譜純，購自天津科密歐化學試劑有限公司；試驗用水為去離子水。

超高效液相色譜-串聯質譜儀；色譜柱：安捷倫Eclipse plus C18柱(10 mm×5.5 mm，1.8 μm)；電子天平；EPED-40TF 超純水儀；數控超聲波清洗器。

1.2 溶液配制

準確稱取稻瘟靈標準樣品和吡唑醚菌酯標準樣品，分別用甲醇溶解并定容，得到稻瘟靈和吡唑醚菌酯標準溶液母液；分別移取2種標準溶液母液，用甲醇稀釋成有效成分系列濃度相同的混合標準溶液，進行標準曲線的制作。

1.3 分析條件

1.3.1 液相分析條件

流動相：0.2%甲酸水溶液-甲醇，梯度洗脫程序見表1，柱溫：30 ℃，進樣體積：5 μL。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 質譜分析條件

稻瘟靈和吡唑醚菌酯均采用電噴霧(ESI+)模式測定，多離子反應監測(MRM)模式掃描，外標法定量。質譜參數見表2。

表2 多反應監測正離子模式下稻瘟靈和吡唑醚菌酯質譜參數

2 結果與討論

2.1 檢測條件優化

以0.1%甲酸水溶液-甲醇、0.2%甲酸水溶液-甲醇、0.2%甲酸水溶液-乙腈優化液相條件，結果表明，以0.2%甲酸水溶液-甲醇為流動相時，稻瘟靈和吡唑醚菌酯響應值較高，本研究選用0.2%甲酸水溶液-甲醇為流動相進行梯度洗脫(1.3.1節)。

參考《農藥分析手冊》[6]，在m/z 0～400進行全掃描，在50～75 V優化錐孔電壓，使2種有效成分母離子響應值達到最大；逐級優化碰撞電壓，找到各成分的定量離子對和定性離子對，得到1.3.2節的質譜參數。稻瘟靈和吡唑醚菌酯的母離子和子離子圖見圖1和2。

圖1 稻瘟靈母離子和子離子圖

2.2 方法線性關系

對系列濃度的稻瘟靈和吡唑醚菌酯標準溶液按上述條件進樣分析，以濃度為橫坐標，對應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。稻瘟靈和吡唑醚菌酯在0.000 1～0.05 mg/L范圍內均具有良好的線性關系，線性方程分別為：y=2 815 619.8x+181.7，R2=1.000 0；y=4 126 371.5x+533.7，R2=0.999 9。以10倍信噪比定義其最低檢測濃度，2種有效成分分別為0.159 μg/L和0.108 μg/L。

2.3 方法的準確度和精密度測定

分別對稻瘟靈和吡唑醚菌酯2種有效成分在空白水體中進行0.000 2、0.002、0.2 mg/L 3檔水平的添加回收試驗，每個水平重復5次。結果表明(表3)，稻瘟靈平均回收率為85.14%～96.84%，相對標準偏差為2.14%～6.33%；吡唑醚菌酯平均回收率為82.86%～90.65%，相對標準偏差為2.38%～6.13%。

圖2 吡唑醚菌酯母離子和子離子圖

表3 稻瘟靈和吡唑醚菌酯在水體中的添加回收結果(n=5)

3 結 論

本研究以水為基質，建立了稻瘟靈和吡唑醚菌酯的超高效液相色譜-串聯質譜快速檢測分析方法，該方法簡單、高效、靈敏、準確，可用于檢測水樣中2種有效成分，也可用于相關藥劑殘留分析。

[1] 孫雪, 侯志廣, 趙曉峰, 等. 多種藥劑對水稻紋枯病菌的毒力測定及田間藥效[J]. 農藥, 2015, (2): 139－142.

[2] 宋益民, 陳惠, 叢國林. 9種殺菌劑防治水稻紋枯病的田間藥效評價[J]. 江蘇農業科學, 2013, (10): 104－105.

[3] 劉慧琳, 郭正元, 譚智勇, 等. 稻瘟靈在稻田環境中的消解動態[J]. 湖南農業科學, 2011, (11): 97－99.

[4] 閆曉陽, 徐金麗, 徐光軍, 等. 高效液相色譜法檢測吡唑醚菌酯在煙葉和土壤中的殘留及消解動態[J]. 農藥學學報, 2013,15(5): 528－533.

[5] 夏雨, 李國全, 王英. 混劑中稻瘟靈和異稻瘟凈的液相色譜分析[J]. 農藥科學與管理, 2008, 29(10): 11－13.

[6] 陳鐵春, 李國平, 趙永輝,等. 農藥分析手冊[M]. 北京: 化學工業出版社, 2012.