GC-ECD檢測馬齒莧中六六六和滴滴涕的農(nóng)藥殘留

1.四川省宜賓衛(wèi)生學(xué)校，四川 宜賓 644000；2.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，四川 瀘州 646000

馬齒莧來源于馬齒莧科植物馬齒莧PortulacaoleraceaL.的干燥地上部分。在《本草經(jīng)集注》、《新修本草》等古籍中均有記載，又稱為五行草、馬齒菜、長命草等。我國南北各地均有分布，生于菜園、農(nóng)田、路旁等，盛產(chǎn)于四川，在我國作為傳統(tǒng)中藥已經(jīng)有數(shù)千年的歷史。其味酸性寒，歸肝、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、涼血止血、止痢的功效，用于熱毒血痢、膿腫、濕疹、丹毒、毒蛇咬傷、便血、痔血、婦女崩漏下血[1]。馬齒莧含有有機(jī)酸、黃酮、多糖等藥用成分，還富含氨基酸、維生素C、維生素B1及維生素B2等，具有較高的藥用及食用價(jià)值[2-3]。其被我國衛(wèi)計(jì)委列入101種藥食同源名單，屬藥食兩用植物，在各地被廣泛用作菜肴。為保障該藥食兩用植物的安全性，筆者實(shí)驗(yàn)采用GC-ECD對其中的六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)共8種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行了檢測[4-6]，了解該類農(nóng)藥在馬齒莧中的殘留水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7820A 氣相色譜儀系統(tǒng)(安捷倫科技有限公司)，ECD檢測器；湖南湘儀TD3(800B)自動(dòng)平衡離心機(jī)(湖南湘儀公司)；KQ-50B 型超聲清潔器(昆山舒美)；Sartorius BT 25S電子天平(德國賽多利斯)。

1.2 材料 二氯甲烷和石油醚(60～90℃)為色譜純，氯化鈉和無水硫酸鈉為分析純。8種有機(jī)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：α-BHC(GBW(E)081427)、β-BHC(GBW(E)081428)、γ-BHC(GBW(E)081429)、δ-BHC(GBW(E)081430)、PP'-DDE(GBW(E)081683)、OP'-DDT(GBW(E)081635)、PP'-DDD(GBW(E)081632)、PP'-DDT(GBW(E)081662)，由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供。

3批馬齒莧樣品購自宜賓市不同地，經(jīng)西南醫(yī)科大學(xué)侯杰榮主管中藥師鑒定為馬齒莧科植物馬齒莧。

2 方法

2.1 GC色譜條件 彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)OV-1701，63Ni-ECD 電子捕獲檢測器。進(jìn)樣口和檢測器溫度分別為230℃、 300℃，進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1μL。程序升溫：初始溫度150℃，8℃/min升至230℃，保持15 min。理論塔板數(shù)按α-BHC峰計(jì)算不低于1×106，相鄰2 個(gè)色譜峰均得到較好的分離，峰型對稱性良好。

2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取各對照品適量，用石油醚制成每毫升約含0.25 mg的溶液，搖勻即得對照品儲備液，精密量取上述溶液50μL，置25 mL 量瓶中，用石油醚制成每毫升含250 ng的混合儲備液；再精密量取該混合儲備液1 mL置10 mL 量瓶中，用石油醚制成每毫升含25 ng 的混合對照品溶液，搖勻即得。

2.3 供試品溶液的制備 取適量于60℃干燥3 h的樣品，粉碎成細(xì)粉，取3 g，精密稱定后置于200 mL 具塞錐形瓶中，加入20 mL水浸泡，過夜。精密加入50 mL丙酮，稱定質(zhì)量，超聲處理35 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加丙酮補(bǔ)充減少質(zhì)量，加入氯化鈉6 g，精密加二氯甲烷25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用二氯甲烷補(bǔ)充減少質(zhì)量，靜置分層，將有機(jī)相快速轉(zhuǎn)入裝有一定量無水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取40 mL，在38 ℃水浴上減壓濃縮到近干，加入少量石油醚如前反復(fù)操作除凈二氯甲烷及丙酮，用石油醚溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸1 mL，振搖1 min，離心(3000 r/min)10 min，吸取上清液備用。

3 方法學(xué)考察

3.1 溶劑空白試驗(yàn) 以提取溶劑石油醚作為空白樣品直接進(jìn)氣相色譜儀，考察石油醚溶劑的干擾。結(jié)果見圖1。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，按相應(yīng)色譜條件進(jìn)樣，以峰面積計(jì)算，得相應(yīng)農(nóng)藥的回歸方程。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系

3.3 精密度試驗(yàn) 取同一混合對照品溶液，按2.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，得到各組分各次的峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD在1.25%～2.92%，表明進(jìn)樣精密度良好。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品，按照擬定方法進(jìn)行供試品的制備，分別于 0、6、12、24 h 間隔進(jìn)樣4次，測定各對照品的峰面積積分值，α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC的RSD值分別為2.8%、1.7%、2.6%、4.1%， PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的RSD值分別為3.3%、3.1%、1.5%、2.7%。結(jié)果表明樣品在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取馬齒莧樣品 6 份，按照擬定的方法進(jìn)行供試品的制備和檢測，測定結(jié)果α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC、 PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的RSD值分別為2.4%、1.1%、2.9%、3.4%、1.5%、2.2%、2.7%、3.6%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定含量已知的馬齒莧樣品 6份，每份約1.5g，分別加入樣品含量80%、100%、120%的各成分對照品，照2.3方法制備供試液，計(jì)算各組分回收率及RSD值，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.7 樣品測定 精密吸取供試品溶液平行進(jìn)樣2次，取均值，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算馬齒莧中8種有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留量，測定結(jié)果見表3。

表3 3批馬齒莧樣品測定結(jié)果 (μg·kg-1)

4 討論

在中藥材生產(chǎn)中，存在肥料施用不科學(xué)、濫用農(nóng)藥等問題，導(dǎo)致藥材質(zhì)量不穩(wěn)定或者下降。大量使用的化肥、農(nóng)藥，對我國的生態(tài)環(huán)境造成巨大破壞。中藥材在種植過程中，不可避免地會(huì)有農(nóng)藥殘留。中藥材成為化學(xué)農(nóng)業(yè)的“受害者”。農(nóng)藥殘留是中藥材不可回避的問題，也是藥品安全性的重要指標(biāo)之一，《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定：含總BHC(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC )不得超過0.1mg·kg-1；含總滴滴涕(PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT)不得超過0.1mg·kg-1。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，馬齒莧藥材中BHC和DDT測定結(jié)果均低于限量。本實(shí)驗(yàn)采用的是對鹵代烴有特殊選擇性的ECD檢測器，靈敏度高，選擇性好，所建立的檢測方法準(zhǔn)確、可行, 可用于馬齒莧中8種有機(jī)氯農(nóng)藥的含量檢測。

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