回醫(yī)烙灸療法對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能修復(fù)研究

寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004

創(chuàng)傷性脊髓損傷在臨床上是一種比較嚴(yán)重的疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)沒有特別有效的治療方法，只停留在對癥治療階段。回醫(yī)烙灸療法是治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的一種新方法，在臨床上已經(jīng)取得一定療效。本實驗采用脊髓損傷運動功能改良Tarlov評分法及皮層體感誘發(fā)電位CSEP檢測的方法，取大鼠脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評分。通過觀察脊髓損傷大鼠行為、神經(jīng)電生理傳導(dǎo)及脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評分，旨在探討回醫(yī)烙灸療法對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)修復(fù)功能的修復(fù)研究。

1 材料和方法

1.1 材料 實驗在寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心完成，選取清潔級SD大鼠110只(寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號SYXK(寧)2015-0001，12周齡，體質(zhì)量230～305g，雄性)。

1.2 方法

1.2.1 分組 將110只大鼠隨機(jī)數(shù)字表法分為5組：假手術(shù)組、 模型組、西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組，每組22只，其中50只于第7、14、28、42和56 天采用脊髓損傷運動功能改良Tarlov評分法及皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)檢測。另外60只于第1、7、14和28 天取損傷脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評分。假手術(shù)組，只做椎板切除，不做脊髓損傷；模型組，脊髓Allen’s打擊損傷后灌胃給予一定量生理鹽水，持續(xù)56 d；醋酸潑尼松治療組(西藥組)，脊髓Allen’s打擊損傷后0.5 h內(nèi)首次按20 mg/kg，隨后按 4.6 mg/kg/h腹腔注射給藥，3 h連續(xù)給藥，之后按7.2 mg/kg/d，連續(xù)給藥7 d；2 h烙灸組，脊髓Allen’s打擊損傷后2 h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，每次5 min，持續(xù)28 d；6 h烙灸組，脊髓Allen’s打擊損傷后6 h采用烙灸治療，烙灸隔日1次，持續(xù)28 d。各組于術(shù)后1 h經(jīng)皮下注射青霉素，每日1次，連續(xù)7 d。各組均給予一定量生理鹽水，持續(xù)56 d。

1.2.2 模型制備 改良的脊髓損傷Allen’s[1]造模。操作：大鼠麻醉、消毒，以T10為中心，沿脊柱方向切約3 cm的切口，切開皮膚、肌肉，分離并暴露棘突，將T10椎板全部切除，保留硬脊膜。采用自制的 Allen’s 改良式打擊裝置(將15 g打擊棒套入鋼管內(nèi)，卡住打擊高度，松開打擊棒即可下落) ，高度為5 cm，致傷量為75 g·cm-1，造成T10～T11 節(jié)段急性脊髓損傷(此致傷量可造成大鼠的不完全性截癱，屬中等程度損傷)。動物出現(xiàn)擺尾反射，雙下肢及軀體回縮撲動后，見雙下肢不完全癱瘓，標(biāo)志造模成功。

1.2.3 治療方法 固定大鼠，回醫(yī)特制烙灸器放在損傷大鼠兩側(cè)夾脊穴(在距損傷上下端兩個椎體的棘突間隙旁開距中線3～4 mm處取穴)。回醫(yī)特制烙灸器利用自制和脊柱形狀相似鐵質(zhì)灸具制成，在灸槽內(nèi)放有艾絨，點燃艾絨，利用鐵質(zhì)灸具熱傳導(dǎo)，使局部發(fā)紅，排出異常體液。部位參照《實驗針灸學(xué)》(上海科學(xué)技術(shù)出版社)烙灸組于造模后2 h和6 h分別開始，隔日同一時間重復(fù)治療1次，每次灸5 min，持續(xù)28 d，并防止時間過長造成皮膚損傷。

1.2.4 改良Tarlov 評分法[2]評價后肢神經(jīng)功能 0分：完全癱瘓，針刺時下肢無反應(yīng)；1分:后肢完全癱瘓，針刺時下肢無反應(yīng)，但肢體不能活動；2分:后肢肢體可輕微活動，但不能站立；3分: 后肢肢體可水平活動，但后肢無法爬行；4分：后肢肢體可爬行數(shù)步，但不穩(wěn)定；5分：后肢能緩慢爬行走,但不靈活；6分： 后肢能正常行走。所有大鼠術(shù)前評分均正常，分別于7、14、28、42、56 d評分，共5次，所有觀察均在19:00于開放空間進(jìn)行，觀察時間為10 min。

1.2.5 大鼠皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)檢測 采用誘發(fā)電位儀檢測皮層體感誘發(fā)電位，分別于脊髓損傷后7、14、28、42、56 d對下肢進(jìn)行觀察。大鼠腹腔注射麻醉，刺激電極插入下肢后部，陰陽電極相距1 cm，周圍以溫鹽水濕潤。記錄電極置于大鼠對側(cè)感覺皮質(zhì)表面，參考電極插入前額皮下。電位儀給予直流方波電脈沖刺激，強(qiáng)度為60 mA，波寬0.3 ms，頻率2.1 Hz，疊加300～400次，分析時間100 ms，觀察P1波的反應(yīng)潛伏期。

1.2.6 電鏡觀察 每組又按不同時間點分別在1、7、14、28 d各取3只，共計60只，處死大鼠，取脊髓損傷部位上下1 cm的脊髓組織，電鏡觀察脊髓超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評分。采用Kaptanoglu等[3-4]創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評分法。評分標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞質(zhì)、軸突、線粒體根據(jù)水腫程度分0～3分；細(xì)胞核根據(jù)染色質(zhì)損傷程度分0～3分；軸突髓鞘根據(jù)損傷情況分0～3分。 評定各項分值相加 ，計算各組中胞質(zhì)內(nèi)水腫、細(xì)胞核損傷、軸突變性、髓鞘分解、和線粒體損傷的平均評分及標(biāo)準(zhǔn)誤，數(shù)值越高，則脊髓損傷程度越嚴(yán)重。數(shù)值的大小與脊髓損傷的嚴(yán)重程度成正比。

2 結(jié)果

2.1 脊髓損傷大鼠運動功能Tarlov評分 實驗開始前5組大鼠評分均正常。除假手術(shù)組，其它各組大鼠經(jīng)改良Allen’s打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42和56 天 Tarlov評分均小于假手術(shù)組 (P<0.05)。損傷7 d評分：除假手術(shù)組，其它4組均小于3分，4組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05) ；損傷14 d評分：西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組評分均大于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；損傷28 d評分：經(jīng)兩兩比較Tarlov評分排序為2 h烙灸組和6 h烙灸組>西藥組>模型組(P<0.05)，2 h烙灸組和6 h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；損傷42 d評分：西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組Tarlov評分均大于模型組(P<0.05)。西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；損傷56 d評分：西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組Tarlov評分均大于模型組。西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 回醫(yī)烙灸療法對大鼠脊髓損傷后運動功能Tarlov評分的影響 (分，

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與西藥組比較，cP<0.05。

2.2 脊髓損傷大鼠CSEP檢測 正常CSEP潛伏期是(16.45±0.61)ms,波形為“W”形。除假手術(shù)組，其它各組大鼠經(jīng)改良Allen’s打擊后，雙后肢不完全癱瘓，第7、14、28、42、56 天CSEP潛伏期均大于假手術(shù)組 (P<0.05)。損傷7 d和14 d時，4組之間CSEP潛伏期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。損傷28 d時，經(jīng)兩兩比較，CSEP潛伏期排序為2 h烙灸組和6 h烙灸組<西藥組<模型組(P<0.05)，2 h烙灸組和6 h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。損傷42 d時，經(jīng)兩兩比較各組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CSEP潛伏期排序為2 h烙灸組<6 h烙灸組<西藥組<模型組。損傷56 d時，經(jīng)兩兩比較CSEP潛伏期排序為2 h烙灸組<6 h烙灸組<模型組和西藥組(P<0.05)，模型組和西藥組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 回醫(yī)烙灸療法對大鼠脊髓損傷后CSEP潛伏期變化的影響

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與西藥組比較，cP<0.05；與2 h烙灸組比較，dP<0.05。

2.3 電鏡觀察脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評分 采用Kaptanoglu等創(chuàng)立的脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)評分法。評分結(jié)果顯示除假手術(shù)組，其它各組各時間點評分均大于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。損傷1 d評分，除假手術(shù)組，其它各組評分明顯升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05) ；7 d評分：西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組均小于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；14 d評分：西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組的評分要小于模型組。西藥組、2 h烙灸組、6 h烙灸組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；28 d評分：評分排序為2 h烙灸組<6 h烙灸組<西藥組<模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 脊髓損傷后各組各時間點的超微結(jié)構(gòu)評分 (分，

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；與西藥組比較，cP<0.05；與2 h烙灸組比較，dP<0.05。

3 討論

脊髓損傷的程度和臨床表現(xiàn)是由原發(fā)性損傷的部位和性質(zhì)決定的，中醫(yī)學(xué)病因病機(jī)為瘀血停滯導(dǎo)致“腰痛”、“痿證”、“癃閉”等病證范疇。在脊髓中中樞神經(jīng)結(jié)構(gòu)的獨特，造成了脊髓損傷后修復(fù)的過程相當(dāng)困難，因此讓損傷的腦和脊髓獲得再生，成為許多神經(jīng)科學(xué)家研究的目標(biāo)[5]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究大多放在神經(jīng)營養(yǎng)因子及去除神經(jīng)生長抑制因子方面。實驗研究顯示，由于神經(jīng)營養(yǎng)因子的神經(jīng)系統(tǒng)老化、創(chuàng)傷、神經(jīng)退行性變等情況下能調(diào)節(jié)神經(jīng)元的可塑性和神經(jīng)再生，它們具有支持運動神經(jīng)元存活、促進(jìn)感覺和運動神經(jīng)元軸突生長的作用[6-7]。現(xiàn)在激素類藥物作為脊髓損傷的常用藥物，研究顯示激素類藥物對近期脊髓損傷功能恢復(fù)的具有顯著療效，對遠(yuǎn)期的功能恢復(fù)效果并不十分顯著，而且長期運用激素類藥物副作用比較多[8]。通過前期臨床研究發(fā)現(xiàn)回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷臨床效果十分明顯，且安全穩(wěn)定，副作用較小，它是治療脊髓損傷新的手段[9]。

Tarlov、CSEP是一個相對定量、客觀的檢測技術(shù)，能夠?qū)顾钃p傷作出功能性診斷及正確的定量分析。改良Tarlov評分主要對大鼠運動功能進(jìn)行評價，而CSEP根據(jù)潛伏期變化的程度判斷脊髓損傷的嚴(yán)重程度，潛伏期越接近正常值療效越顯著。Tarlov、CSEP統(tǒng)計結(jié)果顯示，回醫(yī)烙灸療法療效明顯優(yōu)于西藥組療效，尤其28 d最顯著。在42 d和56 d時，2 h烙灸組、6 h烙灸組和西藥組之間沒有差異(P>0.05)，由于烙灸療法只治療28 d，后續(xù)沒有采取治療，后續(xù)的康復(fù)功能與西藥組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。以上實驗發(fā)現(xiàn)通過28 d烙灸治療，脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)速度明顯好于西藥組及模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。烙灸治療28 d后，一旦結(jié)束烙灸治療神經(jīng)功能恢復(fù)的速度明顯降低，與其它各組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，證實回醫(yī)烙灸療法對脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)確有促進(jìn)作用。每個組又按1、7、14、28 d不同時間點分別取3只，共計60只，做電鏡觀察損傷脊髓超微進(jìn)行評分。評分結(jié)果顯示2 h烙灸組、6 h烙灸組中細(xì)胞質(zhì)水腫、細(xì)胞核染色質(zhì)損傷、軸突髓鞘、軸突及線粒體水腫程度恢復(fù)情況好于西藥組。結(jié)果又進(jìn)一步證實了回醫(yī)烙灸治療脊髓損傷療效確切。

回醫(yī)烙灸療法是灸法治療方式的一種，它能夠結(jié)合腧穴組織特點和經(jīng)絡(luò)功能，利用藥物、器械加熱所產(chǎn)生的火熱刺激，通調(diào)氣血，直接或間接地引導(dǎo)自然中存在“三子”(回醫(yī)認(rèn)為構(gòu)成生命的三種本源)元素來激發(fā)人體內(nèi)的稟性體液活動機(jī)能，通過皮膚和血管感受器的反射途徑傳到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，通過興奮和抑制的調(diào)節(jié)作用，使之趨于相對平衡。在溫?zé)嵝源碳ば?yīng)的作用下，導(dǎo)致局部血管擴(kuò)張，促進(jìn)體液循環(huán)，加強(qiáng)新陳代謝，改變局部組織營養(yǎng)狀態(tài)，增強(qiáng)血管壁通透性及白細(xì)胞吞噬能力，增強(qiáng)局部耐受性及機(jī)體抵抗力[10]。而脊髓損傷后期其元陽不振，氣血不調(diào)，經(jīng)絡(luò)淤阻造成肢體活動不利。治療正需要回醫(yī)烙灸強(qiáng)刺激手段，刺激周圍神經(jīng)的敏感度，加強(qiáng)其與大腦中樞神經(jīng)的聯(lián)系。這種獨具特色的灸法，是祖國醫(yī)學(xué)“化膿灸”的發(fā)展與深化，它較“化膿灸”療法操作更加精準(zhǔn)，醫(yī)者對施灸的火力與程度能夠進(jìn)行較好控制，且對皮膚的損傷程度較輕，對元氣的振奮與恢復(fù)較為迅速[11]。回醫(yī)在長期臨床使用中證實，烙灸療法對于經(jīng)絡(luò)、筋經(jīng)的不暢，骨與關(guān)節(jié)損傷性疾病有不可替代的獨特療效。本療法在長期的傳承和實踐中，積累了豐富的臨床經(jīng)驗，治療效果相對可靠，對醫(yī)療設(shè)備設(shè)施的依賴小，技術(shù)操作便于掌握，適合在基層推廣。

總之，本實驗研究表明回醫(yī)烙灸對脊髓損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)確有促進(jìn)作用，從而對神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用，并減少髓鞘的脫失，其為脊髓損傷后神經(jīng)的修復(fù)提供理論和實踐基礎(chǔ)，豐富了脊髓損傷的新的治療手段，更為脊髓損傷的治療開辟新的途徑、新的方法，從而有利于提升脊髓損傷患者的康復(fù)治療水平。

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