不同種大黃中土大黃苷檢查方法的研究

江蘇省江陰市人民醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 江陰 214400

大黃為蓼科大黃屬生植物藥用大黃、掌葉大黃及唐古特大黃的合稱，作為中藥材具有較好的瀉下、涼血解毒功效。近年來，大黃的藥材資源無法滿足日益增長的市場需求，使得市場商品中出現(xiàn)使用同屬不同種其他植物的根部冒充大黃的現(xiàn)象，這類偽品大黃來源廣、價格低廉，但藥物副作用大，甚至?xí)l(fā)不良反應(yīng)。一般情況下，偽品大黃中均含土大黃苷，其結(jié)構(gòu)為二苯乙烯苷類成分，但無瀉下作用或?yàn)a下作用極其微弱。1990年版中國藥典將土大黃苷收錄在大黃檢查項(xiàng)，檢測方法為紙層析色譜法，但其不足在于未進(jìn)行薄層色譜斑點(diǎn)的分離；2000年版藥典將三黃片收錄在土大黃苷檢查項(xiàng)，但缺少土大黃苷對照品進(jìn)行薄層隨行對照；實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有檢測方法弊端較大、專屬性不夠強(qiáng)，使得結(jié)果判定極為不準(zhǔn)確；建立高質(zhì)量的不同種大黃中土大黃苷含量的檢測方法，為相關(guān)成藥提供質(zhì)量監(jiān)控依據(jù)十分重要。隨著藥物的監(jiān)管力度也逐漸加大，陸續(xù)頒發(fā)了多種土大黃苷檢查項(xiàng)的中成藥檢驗(yàn)方法。目前常用的方法為薄層色譜法，并且必要時還可采用高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)合法進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證[1-2]。本實(shí)驗(yàn)研究不同種大黃中土大黃苷含量的檢測，以期提供專屬性更強(qiáng)、簡單易行、準(zhǔn)確的薄層色譜方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Aglient1100液相色譜儀(美國安捷倫有限公司)，SartoriusBS21S電子式天平(德國賽多利斯公司)，UV-2550高靈敏分光光度計(jì)(日本Shimadzu公司)、DAD檢測器(美國安捷倫有限公司)。

1.2 材料 正品大黃藥材(產(chǎn)自四川，購自北京白塔寺藥店)、河套大黃、華北大黃均由中國藥品生物制品檢定所標(biāo)本館鑒定，土大黃苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱C18柱(AglientTC-C18,4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相乙腈-水(25∶75)，柱溫30.0 ℃，檢測波長323 nm，流速0.80 mL/min。紫外檢測在190～400 nm波長處檢測。

2.2 試液制備 在100 mL瓶內(nèi)加4.30 mg土大黃苷對照品，加適量甲醇溶液溶解、稀釋，搖勻，以此作為對照品溶液。各取0.5 mg華北大黃粉及河套大黃粉于不同量瓶中，搖勻，以此為供試液。將5.0 g藥用大黃置于超聲處理后濾過，取5 mL續(xù)濾液與瓶內(nèi)，加適量甲醇溶液溶解、稀釋，搖勻，以此為藥用大黃供試液。

取兩份藥用大黃細(xì)粉各0.5 g，第1份加10 mL甲醇溶液，靜置常溫后離心，取上層清液，得大黃供試液；第2份藥用大黃細(xì)粉中加入土大黃苷對照品溶液，同第1份操作，得藥用大黃+土大黃苷對照品的供試液。取上述兩溶液各10.0 μL，用液相色譜儀進(jìn)行檢測，記錄相關(guān)色譜圖。

2.3 特征性色譜圖 土大黃苷色譜、藥用大黃色譜及藥用大黃+土大黃苷色譜分別如圖1所示。對比圖1和圖2，發(fā)現(xiàn)土大黃苷色譜中出現(xiàn)特征性色譜峰，并且在同一時間段藥用大黃色譜中沒有檢出相對應(yīng)的色譜峰，說明藥用大黃中不含土大黃苷。

2.4 液相色譜測定 藥用大黃中未出現(xiàn)土大黃苷特征性色譜峰，而在河套大黃和華北大黃的檢測中發(fā)現(xiàn)了土大黃苷色譜峰，這顯示出河套大黃和華北大黃并非正品大黃。如圖2所示。用DAD檢測器對相應(yīng)色譜進(jìn)行光譜掃描，得到色譜峰相同的掃描圖。如圖3所示。

3 討論

大黃在我國古代文獻(xiàn)中就有記載，主要做藥用，在秋季最后或次年春季初挖出，去細(xì)根，脫皮，繩穿干燥，其清熱、解毒、涼血、化痰等功效顯著。我國上等大黃常產(chǎn)于四川西部和甘肅地區(qū)。通常情況下，正品大黃不含土大黃苷。近年來，隨著中醫(yī)藥事業(yè)蓬勃發(fā)展，藥類品種也逐漸增多，而且由于許多人為因素，野生大黃越來越少，無法滿足逐漸增長的市場需求，導(dǎo)致河套大黃或華北大黃等偽品大黃的出現(xiàn)，土大黃苷是偽品大黃中的特征性成分，瀉下作用極其微弱。本次試驗(yàn)主要對同屬不同種大黃中土大黃苷的檢測方法進(jìn)行研究，以確保藥品的療效，保證用藥安全。

高效液相色譜法(HPLC)作為色譜法的重要分支，在近幾年得到迅速發(fā)展，由于其有高靈敏度、高效率、簡單、快捷、準(zhǔn)確等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床研究中。高效液相色譜法以高壓輸液為系統(tǒng)，將液體作為流動相，將不同的比例的緩沖液等流動相裝入特定的色譜柱柱內(nèi)分離各成分后進(jìn)入檢測器，從而實(shí)現(xiàn)式樣分析。本次研究中就采取HPLC法，得到土大黃苷色譜圖(圖1)、藥用大黃色譜圖(圖2)及藥用大黃+土大黃苷色譜圖(圖3)。由圖1可見在10.0～11.0 min間出現(xiàn)了很明顯的色譜峰；圖2正品大黃色譜圖，發(fā)現(xiàn)在2.5 min左右開始至5 min左右結(jié)束出現(xiàn)了兩組明顯的色譜峰，而5 min以后色譜波動較為平緩，并且在10.0～11.0 min時沒有發(fā)現(xiàn)圖1中明顯的色譜峰；且圖3的色譜變化包含圖1和圖2中所有明顯的色譜峰，說明藥用大黃中不含土大黃苷成分。為了得到更為精確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，通過DAD檢測器對二色譜峰進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果得到一致的光譜掃描圖，這顯示出二色譜峰的保留時間一致。通過觀察對比三張色譜圖，可以直觀地發(fā)現(xiàn)藥用大黃中不含有土大黃苷，也證明這種方法在檢測同屬不同種大黃及含大黃制劑中土大黃苷方便、準(zhǔn)確、直觀的優(yōu)勢[6-9]。

綜上所述，本次研究采取HPLC法和TLC法鑒別同屬不同種大黃及含大黃制劑中土大黃苷的含量，得到較為客觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；該方法有操作簡單、高準(zhǔn)確度、高靈敏度等優(yōu)勢，值得臨床推廣。

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