特異性皮炎患者外周血Th1/Th2平衡的意義

胡俊青* 袁 青

（金華市中心醫院檢驗科，浙江 金華 321000）

特異性皮炎是一種免疫紊亂的炎性皮膚病，臨床表型各異，其機制可能與患者易感基因、環境因素、皮膚屏障完整性破壞及免疫失調有關。目前研究發現CD4+T細胞的自身免疫功能紊亂在其中發揮重要作用。輔助性T細胞（Th）參與介導自身免疫反應過程，因此有必要研究Th細胞平衡在特異性皮炎發病過程中的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象：選自2016年4月至2017年1月在我院門診就診的特異性皮炎患者20例作為病例組，年齡20～36歲。20例正常體檢者作為對照組，年齡22～34歲采集靜脈肝素抗凝血2 mL。

1.2 方法

1.2.1 Th1/Th2細胞百分率頻數檢測：AD患者及健康體檢者均于空腹狀態下抽取靜脈血3～5 mL，以肝素鈉抗凝。向96孔細胞培養板吸取200 μL加入含10%小牛血漿的1640細胞培養液，加入200 μL肝素抗凝血等體積稀釋，充分混勻，加入植物血凝素、離子霉素及蛋白轉移抑制劑莫能霉素工作液各10 μL，置二氧化碳培養箱（37 ℃，5%CO2）培養6 h后，吸取200 μL加入流式試管，以PBS緩沖液洗滌2次后，棄上清加入CD4-FITC，CD8-PE、CD3-PECY5抗體各20 μL，放暗處避光反應20 min后，加入細胞膜固定劑100 μL，充分混勻，再次放入暗處避光固定15 min后以PBS洗滌2次，傾去上清液，再加入破膜劑100PBS洗滌后，再次傾去上清液，加入IFN-γ-APC、IL-4-APC-CY7抗體各20 μL充分混勻，重懸細胞，染色后流式細胞儀上機檢測。

1.2.2 Th1/Th2細胞因子檢測：將以上所取靜脈血3500RPM離心5 min，分離血漿。采用ELISA法測定血漿中IL-2、IFN-γ、IL-6和IL-10的表達水平。以Synergy H4全功能酶標儀（美國BioTek公司生產）檢測，抗人IL-4、IFN-γ、IL-6及IL-10等ELISA試劑盒由美國Ebioscience公司生產。

1.3 統計學處理：采用最新版本的SPSS 22.0進行統計學分析，二組比較采用t檢驗，P＜0.05具有統計學差異。

2 結 果

2.1 二組Th1和Th2細胞頻數檢測：特異性皮炎患者靜脈血的Th1輔助細胞水平和Th1/Th2相對比率明顯高于正常人，Th2輔助細胞水平明顯低于正常人，Th1/Th2比率失衡（表1）。

2.2 二組血清細胞因子水平的表達比較：特異性皮炎患者血清的白細胞介素-2和γ-干擾素蛋白含量明顯高于正常人，白細胞介素-6和白細胞介素-10蛋白含量明顯低于正常人（表2）。

3 討 論

特異性皮炎發病機制是自身免疫功能紊亂，機制可能與免疫功能失調、皮膚屏障破壞、微生物變遷、環境因素及基因易感性有關。近年來，國內外報道AD發病率逐年上升，在歐美發達國家兒童患病率為10%～20%，成年人l%～3%[1]。先天性的免疫不足和后天的外界環境因素可能是導致本病發病的重要原因[2]。輔助T細胞主要功能是分泌具有免疫調節和效應功能的細胞因子，在免疫反應發揮重要作用，主要分為Th1、Th2兩種功能性亞群。Thl/Th2細胞的主要功能就是調控免疫反應，Th1細胞主要分泌IFN-γ和白細胞介素-2等細胞因子，Th2細胞主要分泌白細胞介素-6和白細胞介素-4等，主要介導體液免疫[3]。國內外有學者認為Th1/Th2失衡會導致特異性皮炎發病，Th1/Th2細胞此免疫過程主要是通過分泌不同的細胞因子，相互抑制達到動態平衡。在機體正常狀態下，Th1/Th2細胞處于動態平衡狀態，如果動態平衡被破壞，偏向其中一方，機體便會因為Th1細胞占優勢或Th2細胞占優勢形成Th1/Th2“漂移”狀態從而導致機體發病[4]。馬蕾等通過檢測外周血中Th細胞發現其高表達可能是特應性皮炎發病中免疫功能紊亂的重要原因[5]。本研究發現特應性皮炎患者體內存Th1/Th2的病理性失衡，這與文獻一致。

表1 特異性皮炎患者與對照組外周血Th1和Th2細胞比率表達（%，±s）

表1 特異性皮炎患者與對照組外周血Th1和Th2細胞比率表達（%，±s）

注：a與對照組比較，P＜0.01；b與對照組比較，P＜0.05

分組 n Th1(%) Th2(%) Th1/Th2特異性皮炎組 20 12.38±5.82a 2.46±1.28a 8.64±3.28a對照組 20 7.68±3.72 5.16±3.16 4.26±1.78

表2 特異性皮炎患者與對照組外周血Th1/Th2細胞因子蛋白含量的表達比較（ng/mL，±s）

表2 特異性皮炎患者與對照組外周血Th1/Th2細胞因子蛋白含量的表達比較（ng/mL，±s）

注：a與對照組比較，P＜0.01；b與對照組比較，P＜0.05

分組 n IL-2 IFN-γ IL-6 IL-10特異性皮炎組 20 386.21±114.36a 246.76±75.32a 58.82±42.52a 48.57±24.42a對照組 20 146.72±66.32 112.74±74.26 108.25±58.64 112.54±72.82

Th1/Th2細胞病理性失衡在特異性皮炎的發病的復雜的病理過程扮演者重要角色，檢測Th1/Th2細胞的平衡，有助于AD的診斷及觀察患者病情變化，通過人工干預AD患者機體Th1/Th2比值讓機體恢復正常免疫功能狀態，達到治療疾病的目的。

[1]黃舒燕,黃劍清,蔡蕾,等.異位性皮炎患者的血清總IgE水平和特異性IgE水平[J].福建醫藥雜志,2015,37(6):97-99.

[2]葉加建,黃欣,許少涵.特應性皮炎患者血清總IgE與MIF檢測的臨床意義[J].中國實驗診斷學,2012,16(5):817-819.

[3]Magombedze G,Reddy PB,Eda S,et al.Cellular and population plasticity of helper CD4(+) T cell responses[J].Front Physiol,2013,16(4):206.

[4]蔣有讓,刁慶春,史丙俊,等.特應性皮炎Th1/Th2/Th17平衡的研究[J].重慶醫學,2016,45(18):2482-2483.

[5]馬蕾.特應性皮炎患者外周血調節性T細胞與Th17細胞平衡狀態分析[J].中華皮膚科雜志,2012,45(7):481-484.