腦脊液早期分泌抗原靶-6和干擾素-γ表達水平變化對結核性腦膜炎的臨床診斷價值

楊 智

（遼寧省大連市結核病醫院，遼寧 大連 116033）

結核性腦膜炎（tuberculous meningitis）是一種慢性傳染性疾病疾病，由于結核桿菌經過淋巴或者血液系統進入腦膜和腦實質誘發炎癥，當患者免疫力低下或者功能低下時，以及結核菌數量增多就會侵入蛛網膜下腔，隨著腦脊液播散，導致腦膜炎[1]。臨床表現呈現多樣化，并且臨床表現較為普遍，研究發現可以可不伴有肺結核而獨立存在，臨床以去腦脊液樣經過病理檢測發現結核桿菌確診。ESAT-6和IFN-γ有助于對結核性腦膜炎診斷，本次選擇本院收治的100例腦膜炎患者進行分析，取得了相關研究成果，現將調查結果分析如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象：2011年11月至2017年4月我院檢查出的100例腦膜炎患者，其中觀察組（50例）為結核性腦膜炎患者，對照組（50例）為非結核性腦膜炎患者。觀察組男性31例，女性19例；年齡在23～68歲，平均年齡為（48.4±2.7）歲，其中23例為急性期患者，27例為恢復期患者。對照組男性28例，女性22例；年齡在25～63歲，平均年齡為（42.8±3.5）歲，炎癥類型：13例病毒性腦膜炎，10例化膿性腦膜炎，6例新型隱球菌性腦膜炎，其他（腦梗死、周圍性神經病、腦囊蟲病等）21例。兩組基本資料間差異無統計學意義（P＞0.05），可比。

1.2 方法：對結核性腦膜炎患者在入院后24 h內，即急性期。兩組患者均按照正常操作消毒、手術鋪巾進行腰椎穿刺，取腦脊液2 mL，3000 rpm，離心時間10 min，收取上清液-20 ℃保存備用，隨后采用ELISA法對兩組患者腦脊液中的ESAT-6和IFN-γ進行檢測，并進行比較，并對結核性腦膜炎患者急性期和恢復期腦脊液中的ESAT-6和IFN-γ進行檢測，并進行比較。試劑盒為默沙克生物試劑盒，定量檢測步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

具體操作步驟為：①繪制標準曲線；ESAT-6抗原標準品稀釋為濃度梯度：1、2、5、10、25、50、100、200 ng/mL，分別與一抗、二抗孵育，測定其不同濃度下的吸光度，繪制曲線。②測定；根據實驗設計標準酶標板，并且根據要求設置對照孔，將配置好的樣品濃度1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6 pg/mL，各取100 μL，加入孔板中，將人血清、血漿、體液、組織勻漿或細胞培養上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的100 μL樣品中。本次研究為腦脊液上清液，故直接加稀釋液，操作期間注意無菌環境，于37 ℃放置90 min，然后吸去孔板內的液體并用吸水紙盡可能的吸掉水分（TMB空白顯色孔除外），37 ℃放置60 min，再用0.01摩爾的TBS或0.01摩爾的PBS緩沖液洗滌3次，每次洗滌時浸泡約1 min；將準備好的ABC工作液依次加入實驗孔板（TMB空白顯色孔除外），每孔0.1 mL，37 ℃放置30 min；再使用0.01摩爾的TBS或0.01摩爾的PBS洗滌5次，每次洗滌時浸泡1～2 min。按每孔90 μL依次加入已在37 ℃平衡30 min的TMB顯色液，37 ℃避光，放置8～12 min。

1.3 統計學方法：應用SPSS12.0對本研究數據進行統計分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 觀察組與對照組患者ESAT-6水平與IFN-γ水平對比：觀察組結核性腦膜炎患者ESAT-6水平與IFN-γ水平明顯高于對照組非結核性腦膜炎患者（tESAT-6=9.568，P=0.002；tIFN-γ=12.347，P=0.000），見表1。

表1 兩組患者腦脊液EAST-6水平比較（-x±s）

2.2 結核性腦膜炎急性期和恢復期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ分布水平與對照組相比：與對照組患者相比，結核性腦膜炎急性期和恢復期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ分布水平均明顯較高，差異對比具有統計學意義（P＜0.05），且急性期患者的EAST-6和IFN-γ分布水平較恢復期患者高（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組急性期和恢復期患者腦脊液EAST-6和IFN-γ水平比較（-x±s）

3 討 論

目前診斷結核性腦膜炎的實驗室診斷主要方法包括細菌學、免疫學和分子生物學[2]。細菌學主要通過CSF涂片進行培養，看是否能分離出結核分枝桿菌，或能否檢出抗酸桿菌，臨床以檢出腦脊液結核分枝桿菌為診斷金標準，診斷率高，但是該方法培養時間長，容易延誤患者病情，此外診斷都是患者具有明顯的發病指標情況進行檢查，早期診斷或者篩檢意義不大。分子生物學方法診斷對實驗室要求較高，且假陽性率較高，臨床應用收到限制。免疫學診斷技術特點為簡便、快捷，且易在基層實驗室開展。

ESAT-6是一種相對分子量較低的分泌性蛋白，是結合桿菌短期培養濾液分離出來的ESAT-6位點位于RD1區，該區是卡介苗（BCG）和結核分枝桿菌（MTB）毒株基因組相比較的缺失序列，諸多研究表明，ESAT-6是早期感染中起到主要作用的抗原，因其既有T細胞抗原決定簇，又有B細胞抗原決定簇，可同時引起細胞免疫應答和體液免疫應答。IFN是一種干擾素，具有抗病毒作用，腦脊液早期發現IFN出現說明是機體較為敏感的指標之一，也是機體正處于代償階段的標志，因此腦脊液中早期檢測IFN水平變化至關重要，不僅可以作為疾病診斷依據，也可以作為臨床疾病治療的特異性指示性指標，也標志著患者治療最佳的時段，IFN-γ誘導巨噬細胞可誘導性一氧化氮合酶（iNOS）產生，促進NO的合成，IFN-γ還可誘導小膠質細胞星形細胞的iNOS產生，可能與中樞神經系統的某些疾病的發生或保護作用有關[3]。本次研究表明，結核性腦膜炎腦脊液ESAT-6和IFN-γ水平均高于非結核性腦膜炎腦脊液ESAT-6和IFN-γ水平，且結核性腦膜炎患者急性期的EAST-6和IFN-γ分布水平較恢復期患者高，故而臨床上腦脊液早期分泌抗原靶-6和干擾素-γ表達水平變化對結核性腦膜炎具有臨床診斷價值。

[1] 粟秀初,趙鋼,馮國棟,等.對當前結核性腦膜炎病因診斷的幾點建議[J].中國現代神經疾病雜志,2014,14(8):655-657.

[2] 王定佑,朱飛奇.影響結核性腦膜炎早期診斷的相關因素分析[J].中國醫藥導報,2013,10(10):45-47.

[3] 楊璟.檢測腦脊液單核細胞內結核分支桿菌早期分泌性抗原對結核性腦膜炎的診斷價值[J].實用醫院臨床雜志,2014,11(1):84-86.