高效液相色譜法檢測果蔬汁中五種添加劑

楊子秋

(云南省大理州食品檢驗檢測院，云南大理 671000)

近年來，在食品工業持續發展的影響下，食品質量安全問題也隨之越來越顯著，尤其是違規使用或者超量使用食品添加劑的問題頻頻出現。政府各級食品安全監管部門都引起了高度重視，這同時也使得各級檢驗機構的檢驗任務隨之加重[1-2]。當前現有的國家檢測標準主要采取的是不同的分析測試以及處理技術，通常只能夠對1種或者2～3種進行測定，能夠實現3種以上添加劑檢測的方法相對較少，為了能夠更好地提升檢驗效率，提升食品質量安全，構建多種食品添加劑同時檢測的方法成為了關鍵[3]。本試驗在果蔬汁檢測中，采用高效液相色譜法進行5種添加劑的同時測定。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1試驗材料 從市面上購入7種不同的果蔬汁，分別為胡蘿卜汁、番茄汁、石榴汁、杏汁、黑加侖汁、紅棗汁、香梨汁。

1.1.2試劑 甲醇(HPLC級)、稀氨水(1+1)(天津精細化工)；山梨酸標準儲備液、苯甲酸標準儲備液、糖精鈉標準儲備液、乙?；前匪徕洏藴蕛湟?安賽蜜)、脫氫乙酸標準儲備液(100%純度)(中國計量科學研究院)；乙酸銨溶液(精密稱量分析純乙酸銨1.54g自行自備)；混標使用液(分別取5中標準儲備液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，離子水稀釋定容至10mL刻度，過濾后獲得0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL標準系列工作液。)

1.1.3儀器與設備 華志電子天平，HZK-210；高效液相色譜儀，安捷倫1260配紫外檢測器；離心機，貝克曼庫爾特，Microfuge 20；超聲儀，上海生析超聲儀器有限公司，FS-750T；紫外可見光分光光度計，島津，UV2450。

1.2 方法

1.2.1樣品處理 從果蔬汁中精確稱量10.00g樣品，將其置于25mL比色管內(若含有二氧化碳，需通過微溫攪拌法將其去除；若含有乙醇，則通過水浴加熱法將其去除。)，以稀氨水對pH值進行調節，使其控制在7～8左右，超聲條件下持續提取10min，去離子水定容至25mL充分搖勻；以4 500r/min速度進行10min理性處理，取上清液，經過水系0.45μm微孔濾膜進行過濾之后，行高效液相色譜測定。

1.2.2波長選擇 因在紫外區域苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸均能夠得到吸收，為此，采用紫外檢測器[4]。經由紫外可見分光光度計在190～400nm范圍內對各組標準溶液實施光譜掃描。結合各吸光度圖譜分析，苯甲酸的最大吸收波長為216nm，安賽蜜的最大吸收波長為224.0nm，脫氫乙酸的最大吸收波長為235.5nm，糖精鈉的最大吸收波長為220.0nm，山梨酸的最大吸收波長為226.5nm。結合各組情況，最終確定檢測波長為230nm。

1.2.3流動相比例 在流動相時，主要采取乙酸銨(0.02mol/L)與甲醇溶液來選取相應的流速和比例。在甲醇—乙酸銨溶液體系中，隨著甲醇從2%逐漸增加到10%，5種需要檢測的添加劑保留時間表現為隨之縮短，因脫氫乙酸與糖精鈉的出峰時間非常相近，并且非常明顯。經過綜合分析，在流動相中甲醇為5%時，各種添加劑保留時間、出峰時間、分離效果以及峰型能夠達到最佳，最終確定該方法的流動相比例為甲醇與乙酸銨溶液(0.02mol/L)分別為5∶95(V∶V)。

1.2.4流速選擇 在確定的流動相體系下，隨著流速從1.0mL/min逐漸下降到0.7mL/min，待測添加劑盡管能夠實現分離且達到較好峰形，但在流速達到0.9mL/min時，柱效較好的250nm的Kromasil 100-5 C18柱能夠實現較好的分離。通過綜合分析，最終確定流速為1.0mL/min。

1.2.5色譜條件 色譜柱：Kromasil 100-5 C18(250mm×4.6mm，5μg)；流動相：甲醇：0.02mol/L乙酰胺溶液=5∶95(V∶V)；流速：1.0mL/min；進樣量：20μL；柱溫：30℃；檢測器：紫外檢測器(DAD)，190～600nm；檢測波長：230nm(附圖)。

2 結果與分析

2.1 線性范圍

將苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸稀混標使用液稀釋成濃度分別為0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL混合標準工作液，分別進樣20μL，通過色譜條件來進行測定，以峰面積來作為縱坐標，各組的濃度則設置為橫坐標，進行標準曲線繪制。結果顯示，苯甲酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，表現為良好的線性關系，線性方程為Y=49 990.974 1X-240.078 69，r=0.97；安賽蜜在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，表現為良好的線性關系，線性方程為Y=44 614.713 3X-79.077 259，r=0.98；脫氫乙酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，表現為良好的線性關系，線性方程為Y=70 280.006 3X+922.968 52，r=0.96；糖精鈉在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，表現為良好的線性關系，線性方程為Y=31 900.711 8X-55.758 452，r=0.98；山梨酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，表現為良好的線性關系，線性方程為Y=85 309.931 6X-190.754 64，r=0.98。

2.2 精密度和重現性試驗

進行5份空白樣品平行試樣，分別向其中加入等量混合標準工作溶液，使得各組溶液濃度能夠達到0.06mg/mL，根據試驗方法來對其實施處理后，行精密度試驗，同時進行標準偏差計算。在對0.06mg/mL空白樣品，以峰面積A來對取得的測定值進行表示，彼此接近的程度與實際分析結果的重復性要求非常接近，各組相對標準偏差(RSD%)(表1)。

表1 精密度

2.3 加標回收試驗

對購入的7種不同的果蔬汁樣品進行加標測定回收率，分別向果蔬汁中加入5種0.04mol/L混合標準工作液，平均回收率見表2。

表2 回收率

3 結論

高效液相色譜法對果蔬汁中苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸添加劑進行測定，結果發現，在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內，均表現為良好的線性關系，加標回收率為98%～99%，RSD為1.01%～1.51%。由此可知，高效液相色譜法是一種操作簡單、簡便易行，具有一定準確性和靈敏度較高的檢測方法，通過采用該方法可較好地實現對果蔬汁產品質量的快速檢驗。◇

[1]武中庸，赫欣睿，葉永麗，等.高效液相色譜法在食品添加劑檢測中的應用[J].西北民族大學學報(自然科學版)，2016，37(2)：65-69.

[2]高文惠，龐軍，高林，等.高效液相色譜法同時測定食品中多種添加劑[J].中國食品學報，2014，14(12)：148-153.

[3]陳沛金，張毅，肖鋒，等.高效液相色譜法測定糖果、蜜餞和飲料中19種食品添加劑[J].食品安全質量檢測學報，2014，5(11)：3487-3494.

[4]林海丹，鄒志飛，秦燕，等.高效液相色譜法同時測定食品中18種食品添加劑[J].食品科學，2013，34(8)：228-231.

[5]伍雅婷，郭怡陽，黃常剛，等.HPLC同步測定多種合成色素含量檢測結果的不確定度評定[J].中國食物與營養，2016，22(12)：22-26.

[6]王彥蓉，李 強，劉 鵬，等.果蔬汁生產過程主要危害物質控制技術研究進展[J].中國食物與營養，2016，22(11)：13-17.