酯化牛膝多糖對產蛋雞腸道微生物及小腸黏膜形態的影響

田麗芳 ，閆永平，張 濤

（1.保定職業技術學院畜牧獸醫系 070051；2.北京農學院獸醫學（中醫藥）北京市重點實驗室102206）

小腸是動物機體營養吸收的主要場所，生長發育良好的畜禽其腸道絨毛發育良好，隱窩深度淺，消化酶活性高，腸道有益菌數量多［1-2］。牛膝多糖經硫酸、醋酸—吡啶酯化后的產物—牛膝多糖硫酸酯，不僅刺激免疫、抗氧化、抗腫瘤和改善消化道微生態平衡等活性大大增強，同時還具備了較強的抗病毒和抑菌殺蟲等藥理活性[3-4]。對于酯化牛膝多糖對產蛋雞腸道微生物及黏膜結構和生產性能是否有影響，未見研究報道。本試驗旨在探討牛膝多糖硫酸酯對產蛋雞腸道微生物和小腸黏膜形態結構的影響能力，為開發新型綠色的飼料添加劑的開發應用奠定理論基礎。

1 試驗材料及方法

1.1 試驗動物的飼養管理

采用單因子試驗設計，以38周齡的京粉1號商品代蛋雞、體重相近的蛋雞200只為試驗動物。隨機分為5組，每組設6個重復，每個重復8只雞。試驗CK組設為對照組，飼喂玉米-豆粕型基礎日糧，試驗I-IV組為酯化牛膝多糖處理組，分別在基礎日糧中添加 50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg 的酯化牛膝多糖，預試期7d，正試期60d。

1.2 腸道微生物數量測定

試驗期周期結束時隨機選擇各組試驗雞，每組12只，無菌操作集盲腸、結腸、直腸糞便內容物約3g，用稀釋液逐級稀釋至l0-7接種培養，麥康凱瓊脂培養基培養大腸桿菌；改良番茄瓊脂培養基培養乳酸桿菌；雙歧桿菌采用雙歧桿菌選擇性培養基培養，測定3種細菌的數量；平板菌落計數法進行統計細菌數量，每克樣本所含細菌數=菌落數均值×稀釋倍數／樣品質量。

1.3 小腸黏膜形態測定

將十二指腸、空腸及回腸各切取長約2cm的腸塊置于3.8%的福爾馬林液中固定，經組織切片制作染色（HE），10倍光學顯微鏡下選擇選5個典型視野，在應用DT2000通用圖像分析軟件2.0測量小腸絨毛高度和隱窩深度，小腸絨毛高度指的是腸腺開口至絨毛頂端的垂直高度，隱窩深度為絨毛根部上皮凹陷到固有層的距離。

2 結果與分析

2.1 對腸道微生物數量的影響

試驗Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ在抑制腸道中大腸桿菌和提高雙歧桿菌、乳酸桿菌的效果好于對照組(P<0.05或P<0.01)。酯化牛膝多糖試驗Ⅲ，Ⅳ組在抑制腸道大腸桿菌和促進腸道有益菌顯著好于對照組(P<0.05或P<0.01),試驗組之間隨著添加量的增加，其抑制腸道大腸桿菌和促進腸道有益菌的效果逐漸提高，Ⅱ和Ⅳ組之間差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01),結果見表1。

表1 牛膝多糖對蛋雞腸道微生物的影響結果

2.2 牛膝多糖對小腸黏膜形態結構的影響

十二指腸段上皮細胞層厚度各組相比均無顯著性差異，空腸段和回腸段上皮細胞層厚度隨著試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組多糖添加量的增加而增加，顯著或極顯著大于對照組和試驗I組(P<0.01或P<0.05)；在十二指腸段，腸絨毛高度和降低隱窩深度試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組明顯好于對照組(P<0.01或P<0.05)，空腸和回腸的隱窩深度之間沒有顯著差異，試驗Ⅲ、Ⅳ組各測定指標之間差異不明顯，這說明酯化牛膝多糖添加量在150mg/kg和200mg/kg時對腸道的上皮細胞、絨毛高度和隱窩深度的影響沒有顯著差異。

十二指腸

空腸

回腸

表2 酯化牛膝多糖對肉雞不同腸段腸黏膜形態學指標的影響結果

3 討論

3.1 酯化牛膝多糖能夠抑制蛋雞腸道中大腸桿菌的生長，促進乳酸菌和雙歧桿菌的增殖

禽類的消化道菌群穩定、維持機體微生態的平衡，這對禽類的消化吸收，免疫起著至關重要作用。李樹鵬等（2002）研究表明黃芪多糖能減少雛雞腸道大腸桿菌的數量，增加乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量，回腸和盲腸的絨毛變長、變粗，排列緊密［5］。高楊等（2011）研究顯示適量黃芪多糖可降低產蛋雞盲腸中大腸桿菌數量，增加乳酸菌和雙歧桿菌的數量[1]。陳清華等（2007）研究顯示牛膝多糖能夠抑制仔豬腸道中大腸桿菌的生長，促進腸道中乳酸菌和雙歧桿菌的增殖［6］。本試驗結果表明酯化牛膝多糖能抑制生產蛋雞腸道大腸桿菌的生產，增殖雙歧桿菌和乳酸桿菌 ，且隨劑量的增加效果越明顯。這與前人的研究結果一致。

3.2 酯化牛膝多糖對產蛋雞小腸組織結構的影響

營養物質的消化吸收主要在肝臟和腸道進行，腸道菌群的穩定和黏膜結構的健康與否將直接影響動物對飼料的利用程度。陳清華等（2007）研究表明牛膝多糖能顯著增加腸道上皮細胞層厚度，增加腸絨毛高度，顯著降低隱窩深度 (P<0.05或P<0.01)，增強機體消化吸收能力，從而提高仔豬的生產性能［6］。成年產蛋雞腸道菌群穩定，腸黏膜結構形態趨于完善，研究結果表明酯化牛膝多糖的添加有改善腸道結構的趨勢，改善空腸、回腸上皮細胞層厚度的效果比十二指腸好；能顯著改善十二指腸腸絨毛高度和降低隱窩深度(P<0.05或P<0.01)，這與陳清華等人的研究結果相似。

酯化牛膝多糖能抑制產蛋雞腸道中大腸桿菌的生長，增殖乳酸菌和雙歧桿菌，顯著增加空腸和回腸上皮細胞層厚度、絨毛高度，降低十二指腸隱窩深度。結果表明酯化牛膝多糖可以有效增強產蛋雞的消化吸收能力，提高蛋雞的生產性能(結果另報)，推薦使用量150mg/kg·飼料。