提取方法對清咽丸中冰片含量的影響分析

包小紅，齊景梁，周娟

清咽丸處方源自明代的《證治準繩?類方》卷二引《醫學統旨》清音丸方，清代徐靈胎（《蘭臺軌范》引《統旨》）對原方作加減而得。清咽丸具有清熱利咽，生津止渴的功能。臨床上用于肺胃熱盛所致的咽喉腫痛、聲音嘶啞、口舌干燥、咽下不利，處方由桔梗、北寒水石、薄荷、訶子肉、甘草、 硼砂（煅）、 青黛、 冰片、烏梅肉組成[1]1547。其中冰片具有開竅醒神，清熱止痛的作用[1]146。

1 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀-FID檢測器。

試劑均為分析純。

冰片對照品為中國食品藥品檢定研究院提供（批號110743-200905，使用前無需處理，含量以98.0%計。）

2 溶液制備

2.1 對照品溶液

取冰片對照品適量，精密稱定，加入乙醇制備成濃度分別為0.522 mg﹒mL-1和1.000 mg﹒mL-1的溶液，作為對照品儲備液。其他不同質量濃度的對照品溶液均由上述儲備液稀釋得到。

2.2 供試品溶液

取本品10丸，剪碎，混勻，取約1 g，精密稱定，再稱取等量硅藻土，置同一研缽中，加1滴水，研勻，研細后轉移至具塞錐形瓶中，精密加入乙醇20 mL，稱定重量，浸泡過夜，冰浴超聲處理（功率250 w，頻率33 kHz）30分鐘，取出，放至室溫，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3 色譜條件

采用HP-INNOWAX（30 m×0.32 mm，0.50 um）色譜柱；以FID為檢測器；柱溫120 ℃；進樣口溫度220 ℃；檢測器溫度250 ℃；氮氣2.0 mL/min。在上述色譜條件下各色譜峰分離良好，缺冰片陰性無干擾。見圖1。

圖1 清咽丸GC圖

4 方法學考察

4.1 線性關系考察

分別精密量取濃度為0.200 mg﹒mL-1的冰片溶液1 μl及濃度為1.000 mg﹒mL-1的冰片溶液1、2、3、4 μL，注入氣相色譜儀，測定其峰面積，并以冰片總峰面積（A）為縱坐標，絕對進樣量C（μg）為橫坐標，進行回歸，得回歸方程：A=199C+7.3 r=1.0000。結果表明：冰片在0.2～4 μg范圍內進樣具有良好的線性關系。

4.2 精密度試驗

精密吸取對照品溶液（0.522 mg﹒mL-1）2 μL，按“3”項下的方法測定，連續進樣5次，異龍腦峰面積RSD為0.40%、龍腦峰面積RSD為0.43%。

4.3 穩定性試驗

取已制好的冰片對照品溶液（C=1.000 mg﹒mL-1）和供試品溶液各2 μL，在上述色譜條件下，分別于0、12、22小時進樣，記錄峰面積，結果各溶液異龍腦、龍腦峰面積的RSD分別為0.36%、0.09%（對照品）、0.77%、0.12%（供試品）。

4.4 重復性試驗

取清咽丸（大蜜丸，生產企業①，批號：13010648），按“2”項下的方法制備供試品溶液，各制備6份，按照“3”項下色譜條件測定，結果樣品含量為21.10 mg﹒g-1、 RSD為1.72%。

4.5 加樣回收試驗

取已知含量的同一批清咽丸（含量為21.10 mg﹒g-1）各0.5 g，共6份，精密稱定，再稱取等量硅藻土，置同一研缽中，加1滴水，研勻，研細后轉移至具塞錐形瓶中，精密加入乙醇溶劑配制的冰片對照品溶液（濃度為0.522 mg﹒mL-1）20 mL，，其余照供試品溶液制備方法制備，按照“3”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，計算回收率，結果回收率分別為98.7%、 RSD為1.39%。

4.6 含量均一性考察

取清咽丸（批次同4.4項下樣品）1丸，剪碎，加入6 g硅藻土，加水3滴，研細，全部轉移至具塞錐形瓶中，其余照供試品溶液制備方法制備，即得。共取10丸，同法操作，按照“3”項下色譜條件測定，結果：10丸平均含量為121.07 mg/丸，RSD為1.36%。

5 樣品測定

依據建立的冰片含量測定方法，對不同企業生產的共61批清咽丸進行考察。結果含量在61.7 mg/丸～195.0 mg/丸之間。

6 討論

1、本品現行標準采用乙酸乙酯冰浴超聲30分鐘提取冰片，含量測定結果偏低（同樣的61批樣品含量在34.4 mg/丸～82.7 mg/丸之間）且重現性較差，分析原因可能是因為本品劑型為大蜜丸，所含蜂蜜及水分較大，乙酸乙酯對其滲透性較差，導致提取效率低，將提取溶劑改為乙醇后，冰片含量顯著提高。清咽丸中冰片含量提取方法修訂前后比較見圖2。

圖2 清咽丸中冰片含量方法修訂前后比較圖

2、樣品提取方法考察中分別比較了是否加入硅藻土研磨及加入溶劑后是否需要浸泡過夜等不同提取方式，結果表明大蜜丸采用加入硅藻土研磨并浸泡過夜這種方式冰片的提取率最高。

3、中藥中有效成分的提取方式有平衡提取和完全提取兩種，目前采用平衡提取的方式較多，但是如果提取方法或選擇指標不合理，不僅無法體現藥品的實際質量，而且容易造成產品生產合格、檢驗不合格的現象。