兒童重癥肺炎支原體肺炎臨床特征及耐藥基因突變研究

陸 燕，吳 鳴，章愛蓮，駱秋龍，王 瓊

(嘉興市第二醫院，浙江 嘉興 314000)

肺炎支原體(Mycoplasma Pneumoniae，MP)是引起兒童時期肺炎常見的病原體之一[1]。隨著大環內酯類藥物的廣泛應用，對大環內酯類藥物耐藥基因突變MP所致兒童肺炎的臨床表現及其治療等問題越來越引起關注。本研究對我院重癥肺炎支原體肺炎(Severe Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，SMPP)患兒及非SMPP患兒的MP耐藥基因突變狀況進行檢測并分析其臨床特征，以提高對MP耐藥基因突變以及兒童SMPP的認識，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2016年1月至2017年2月在我院兒科住院診斷為肺炎支原體肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP)的患兒103例，排除原有先天性心臟病、免疫功能缺陷、遺傳代謝性疾病、先天性肺支氣管疾病、營養不良及年齡<1月者，按臨床表現分為SMPP組31例與非SMPP組72例。

1.2 診斷標準

1.2.1 MPP診斷標準[2]：(1)臨床上有肺炎的表現和(或)影像學改變；(2)血清單次MP抗體滴度≥1：160，或恢復期和急性期MP抗體滴度呈4倍或4倍以上增高或減低。

1.2.2 SMPP診斷標準[3]：符合下列標準中前3條中的任意2 條和(或)后2條中任意1 條。在確診MPP基礎上出現：(1)明顯氣促或心動過速、三凹征及發紺等；(2)應用大環內酯類藥物1周以上無效, 或持續發熱時間超過10 天；(3)胸部影像學表現為大片狀致密影，占據一個肺段或肺葉以上范圍；(4)出現胸腔積液、肺不張或肺膿腫等肺內并發癥；(5)出現嚴重低氧血癥或合并其他系統嚴重損害。

1.3 研究方法

患兒入院后用無菌棉簽拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位，采樣后將拭子放入采樣管中密封。由杭州美聯生物科技有限公司采用實時熒光定量PCR的方法檢測標本中MP對大環內酯類藥物常見耐藥基因突變位點(A2063G和A2064G)的點突變，根據MP23S rRNAV區2063、2064位點兩側設計PCR引物，按標準操作規程進行擴增，并對擴增產物進行電泳并測序，試劑盒來源為江蘇默樂生物科技有限公司，檢測儀器為ABI7500實時熒光定量PCR儀，測序結果分析運用DNAMAN軟件,檢測到A2063G和A2064G的點突變即為耐藥基因檢測陽性。同時檢測患兒血常規、C反應蛋白、血生化、MP抗體、痰培養、免疫球蛋白E、胸片等。

1.4 統計學處理

數據分析采用SPSS17.0統計學軟件，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組患兒臨床特征比較

MPP 患兒按診斷標準分為SMPP組31例與非SMPP組72例，SMPP組年齡較大，發熱時間及住院天數長，CRP更高，胸腔積液、肺不張發生率高，肺外并發癥更多見；2組患兒經治療均好轉或治愈出院，但SMPP組更多患兒需使用激素或丙種球蛋白治療，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 SMPP組與非SMPP組臨床特征比較

2.2 2組患兒耐藥基因檢測結果

103例患兒咽拭子標本耐藥基因陽性49例，陽性率47.57%，其中SMPP組22例，陽性率為70.97%，非SMPP組27例，陽性率為37.50%，2組患兒咽拭子樣本耐藥基因的陽性率經卡方檢驗，χ2=9.732，P=0.002，差異有統計學意義，表明SMPP組陽性率高于非SMPP組。

3 討論

SMPP病情較普通MPP進展迅速，可短時間進展為胸腔積液、肺不張等，部分可導致壞死性肺炎及閉塞性支氣管炎，甚至引發呼吸衰竭及全身炎癥反應綜合征，SMPP肺外并發癥也較常見，可累及任一器官和組織如血液系統、皮膚、胃腸道、關節、心血管系統、中樞神經系統等[4]。本研究中SMPP組及非SMPP組臨床特征相比較，發熱時間及住院天數長，胸腔積液、肺不張發生率高，肺外并發癥更多見，與文獻報道相符合，SMPP組C反應蛋白水平明顯升高，提示組織炎癥性損害明顯。SMPP年長兒多見，常表現為發熱時間長、咳嗽劇烈、呼吸困難等，胸部影像學呈進行性加重，表現為肺部病灶范圍擴大、胸腔積液、肺不張，甚至表現為壞死性肺炎和肺膿腫。本研究也顯示SMPP組與非SMPP組相比患兒年齡較大，可能是由于年長兒的免疫功能相對較完善，故發生MPP時免疫介導的肺損傷更嚴重。

MP對大環內酯類藥物耐藥基因突變的報道逐漸增多，目前對于大環內酯類抗生素耐藥機制的研究主要集中在核糖體50S亞基的23SrRNA V區中心環的點突變，其中最為常見的點突變是A2063G，其次為A2064G。以往肺炎支原體耐藥的檢測采用基因測序法和MIC測定，但均存在工作量大和費時等問題，無法在臨床工作中大量開展。實時熒光定量PCR聯合了PCR和熒光探針技術，擴增和檢測同時進行，敏感性及特異性高，逐漸成為臨床實驗室診斷MP感染的主要方法之一[5]。我們的研究采用實時熒光定量PCR檢測肺炎支原體對大環內酯類藥物常見耐藥基因突變位點，檢測不受病程及患兒免疫功能的影響，適合于疾病早期或年幼、免疫功能低下患兒的檢查。本組研究表明，SMPP組耐藥基因陽性率高于非SMPP組，提示肺炎支原體對大環內酯類藥物耐藥基因突變是SMPP的危險因素，對耐藥基因突變進行檢測有助于提高臨床醫生對SMPP的認識，為臨床合理用藥、完善SMPP患兒的診治提供科學依據，值得在臨床推廣應用。

[1]Jain S，Williams DJ，Arnold SR，et a1．Community-acquired pneumoniarequiring hospitalization among U．S．children[J]．N Engl J Med，2015，372(9)：835—845．

[2]中華醫學會兒科學分會呼吸學組，《中華實用兒科臨床雜志》編輯委員會.兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識(2015年版) [J]．中華實用兒科臨床雜志，2015，30(17)：1304-1308．

[3]俞珍惜,劉秀云,江載芳,等. 兒童重癥肺炎支原體肺炎急性期的相關因素分析[J]. 實用兒科臨床雜志,2011,26(4) :246-249.

[4]Vervloet LA,Marguet C,Canmargos PA.Infection by Mycoplasma pneumoniae and its importance as an etiological agent in childhood community-acquired pneumonias [J].Braz J Infect Dis,2007,11(5):507-515.

[5]Wolff BJ，Thacker WI，Schwartz SB．et a1．Detection ofmacrolide resistance in Mycoplasma pneumoniae by real-timePCR and high-resolution melt analysis[J]．AntimicrobAgentsChemother，2008，52(10)：3542—3549．