附子丁香散加味穴位貼敷對陽虛型慢傳輸型便秘大鼠血清血管活性腸肽、P物質(zhì)水平的影響

白克運(yùn)，韓瑋瑋，王本軍，解廣東，王志榮

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué))

慢傳輸型便秘(STC)是一類以結(jié)腸傳輸時間延長、進(jìn)食后結(jié)腸高振幅推進(jìn)收縮減少為特征的功能性便秘。近年來研究表明，慢傳輸型便秘發(fā)病率呈上升趨勢，占慢性功能性便秘的45.5%[1，2]，其病因復(fù)雜，癥狀頑固。陽虛型便秘為STC的最常見證型之一。前期研究中我們應(yīng)用源于吳師機(jī)《理瀹駢文》的附子丁香散加味穴位貼敷治療陽虛型STC，取得確切療效，但其作用機(jī)制不明。本研究用洛哌丁胺及氫化可的松制作出陽虛型STC大鼠模型[3，4]，觀察了附子丁香散加味穴位貼敷對陽虛型STC大鼠血清血管活性腸肽(VIP)、P物質(zhì)(SP)水平的影響。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要試劑和儀器 動物SPF級健康Wistar大鼠60只，體質(zhì)量(200±20)g，購于濟(jì)南朋悅實驗動物繁育有限公司，合格證號SCXK魯20140007。洛哌丁胺膠囊(西安楊森制藥有限公司，批號H10910085) ，枸櫞酸莫沙必利膠囊(上海信誼藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字 H20051719)，氫化可的松注射液(上海現(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H41021930)，VIP、SP酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(上海博蘊(yùn)生物科技有限公司)；Thermo Multiskan MK3 型酶標(biāo)儀(美國Thermo 公司)，自制大鼠透明塑料固定盒(20 cm×5 cm×7 cm)。

1.2 大鼠分組、陽虛型STC模型制備及附子丁香散加味穴位貼敷方法 將60只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組，各15只。模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組大鼠連續(xù)21 d按3.0 mg/kg體質(zhì)量給予咯哌丁胺懸液(咯哌丁胺溶于蒸餾水)灌胃,同時每日給予氫化可的松注射液25 mg/(kg·d)后肢肌肉注射，飼以普通詞料；對照組給予同等體積的蒸餾水灌胃。造模結(jié)束后禁食不禁水24 h，釆用活性炭灌胃，記錄每只大鼠灌胃的時間，再觀察并記錄大鼠排出第一粒黑便的時間，兩者之差記為大鼠的胃腸道通過時間。其中以正常組大鼠排出首粒黑便時間的均數(shù)記為判斷造模是否成功的標(biāo)準(zhǔn)，即如果大鼠排出黑便的時間大于正常組的均值則視為造模成功，如果大鼠排出黑便的時間小于正常組的均值則視為造模不成功。模型組、莫沙必利組、穴位敷貼組大鼠均造模成功。然后模型組大鼠給予清水灌胃，1次/d，連續(xù)21 d。(莫沙必利組給予莫沙必利 1.5 mg/kg體質(zhì)量灌胃，1次/d，連續(xù)21 d。穴位貼敷組大鼠剃除腹部毛發(fā)，穴位選擇參照林文注主編《實驗針灸學(xué)》定位神闕穴(大鼠劍突與恥骨聯(lián)合連線下1/3處)、雙側(cè)天樞(神闕穴旁開0.5 cm)。藥物：附子、苦丁香，肉豆蔻、干姜、炮川烏、白芷、牙皂、花椒，冰片，研末成粉末，用酒精調(diào)合成直徑2 cm厚為0.3 cm的餅狀膏藥，用醫(yī)用PU防水貼膜將藥餅貼敷于神闕穴及天樞穴上，1次/d，每次6 h，貼敷6 d后休息1 d為一個周期，共用藥3個周期。

1.3 血清VIP、SP檢測方法 末次灌胃后，從各組存活大鼠中隨機(jī)選取12只，用5%水合氯醛(0.8 mL/100 g)腹腔注射麻醉，抽取腹主動脈血5 mL，靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，取上清液，-80 ℃冰箱冷凍備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清VIP、SP，按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

各組大鼠血清VIP、SP水平見表1。由表1可見，與對照組相比，模型組大鼠血清VIP水平升高(P<0.05)，SP水平降低(P<0.05)。與模型組相比，莫沙必利組、穴位貼敷組大鼠血清VIP水平降低(P均<0.05)，SP水平升高(P均<0.05)。貼敷組與莫沙必利組血清VIP、SP水平相比，P均>0.05。

表1 附子丁香散加味穴位貼敷對各組大鼠血清SP、VIP含量的影響

注：與對照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

3 討論

慢傳輸型便秘(STC)是一類以結(jié)腸傳輸時間延長、進(jìn)食后結(jié)腸高振幅推進(jìn)收縮減少為特征的功能性便秘，主要癥狀為排便漸進(jìn)性困難、糞便干硬、排便費(fèi)力，伴腹脹不適，頑固性便秘導(dǎo)致患者精神緊張，焦慮抑郁，睡眠障礙，生活質(zhì)量嚴(yán)重下降[5～7]，且容易誘發(fā)多種疾病(心肌梗死、腦卒中、大腸癌等)[8]。西藥治療本病多采用各種類型瀉劑及促胃腸動力藥物，大多數(shù)患者在長期服用瀉劑后易產(chǎn)生藥物依賴性，形成更加頑固的便秘，甚至導(dǎo)致大腸黑變。外科手術(shù)治療創(chuàng)傷大、并發(fā)癥多，部分患者術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉，明顯影響生活質(zhì)量。中醫(yī)藥治療本病以湯藥和針灸為主要治療方法,而患者常有不受針刺之痛者,有不耐湯藥之味者,有不肯服藥之人,有不能服藥之癥。穴位貼敷方法適用于長期慢性病人群,既可治療病癥,又有可免除長期服藥、針灸之苦痛，其效果明顯亦如吳師機(jī)所著《理瀹駢文》中所言“膏藥之愈人無異湯藥”。

慢傳輸型便秘屬于中醫(yī)虛證便秘的范疇，STC常見證型為氣虛便秘、血虛便秘及陽虛便秘。在臨床實踐中我們發(fā)現(xiàn)，陽虛便秘為STC的最常見證型，此類患者多由于勞累耗氣、貪涼飲冷，過用寒涼藥物，特別是濫用抗生素及大黃、芒硝等苦寒瀉下藥物，導(dǎo)致脾腎陽氣虛弱，真陽不足，溫煦無權(quán)，不能蒸化津液，使之陰寒內(nèi)結(jié)，糟粕不行，凝結(jié)腸道而成便秘。正如《景岳全書·雜證謨·秘結(jié)》曰:凡下焦陽虛，則陽氣不行，陽氣不行，則不能傳送而陰凝于下，此陽虛而陰結(jié)也，中醫(yī)多以溫陽通便為治則，臨床中我們應(yīng)用源于吳師機(jī)的《理瀹駢文》的附子丁香散加味穴位貼敷治療陽虛型STC，取得確切療效。附子丁香散加味穴位貼敷治療陽虛便秘，最早記載于清代吳師機(jī)《理瀹駢文》中，其中附子丁香散來源于《普濟(jì)方》，由附子、干姜、苦丁香、肉豆蔻、白芷組成，功能溫陽降逆，內(nèi)服用于治療惡心吐逆，臟冷泄瀉等癥，研末外用可溫陽散結(jié)、行氣通便，我們通過在臨床中的不斷實踐，在此方基礎(chǔ)上，加入氣味俱厚、濃烈芳香、辛香溫?zé)嶂诖酢⒀涝怼⒒ń贰⒈夥笥陔p側(cè)天樞及神闕穴，此法具有簡單便捷、作用安全、起效快、效果好的特點(diǎn),既可自立一門,又可補(bǔ)內(nèi)治之不足。

近年對STC的病因病理學(xué)研究顯示，STC是“腸神經(jīng)病”,即腸神經(jīng)系統(tǒng) (ENS)功能的異常引起的病變。腸神經(jīng)系統(tǒng)是指胃腸道系統(tǒng)中所含的神經(jīng)元及其間的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的總稱，有"腸道的大腦"之稱,能不需中樞神經(jīng)系統(tǒng)的支配獨(dú)立行使其功能,控制腸道的運(yùn)動、內(nèi)分泌和外分泌、胃腸道的微循環(huán)等。血管活性腸肽(VIP能神經(jīng)元和SP能神經(jīng)元是腸神經(jīng)系統(tǒng)中2種重要的肽能神經(jīng)元, 對胃腸的運(yùn)動功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。我們可以把ENS看作是一系列在胃腸道重復(fù)出現(xiàn)，互相重疊的包括感受神經(jīng)元、上行和下行中間神經(jīng)元、上行興奮性和下行抑制性運(yùn)動神經(jīng)元的單元。在這些回路和單元中,神經(jīng)遞質(zhì)是不可缺少的信息載體。VIP和SP就是ENS中2種重要的神經(jīng)遞質(zhì)。SP主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及腸肌間神經(jīng)叢中，在整個胃腸道內(nèi)均有分布[9]，SP為調(diào)節(jié)腸道作用最強(qiáng)的興奮性遞質(zhì), 具有強(qiáng)烈促進(jìn)腸道平滑肌收縮, 刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì), 促進(jìn)胃腸蠕動的作用[10]。國內(nèi)外學(xué)者對STC患者結(jié)腸組織進(jìn)行研究后認(rèn)為STC的發(fā)生可能與SP水平降低相關(guān), 這可能是導(dǎo)致結(jié)腸傳輸功能損害的原因之一[11～13]。VIP是腸神經(jīng)系統(tǒng)中的一種主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，VIP可通過松弛胃腸平滑肌, 抑制結(jié)腸和直腸緊張性, 抑制小腸運(yùn)動, 以減弱胃腸動力, VIP增加造成了腸道動力抑制性背景, 以致腸蠕動性收縮不易發(fā)生, 導(dǎo)致便秘[14]。研究表明，便秘患者腸道中 VIP 的表達(dá)顯著降低，影響結(jié)腸下行性抑制，致使巨大遷移性收縮傳播障礙[15]。盡管VIP是胃腸道抑制性神經(jīng)遞質(zhì), 但國內(nèi)外大量學(xué)者通過對STC患者及動物模型的研究認(rèn)為VIP有減少趨勢, 其含量減少可能導(dǎo)致結(jié)腸出現(xiàn)過度的階段性蠕動，使有效蠕動減弱, 從而出現(xiàn)結(jié)腸傳輸障礙[16]。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組大鼠血清SP水平下降，VIP水平升高,與文獻(xiàn)報道相一致。予以附子丁香散加味穴位貼敷治療后，穴位貼敷組大鼠血清VIP水平降低，SP水平升高，與模型組相比有顯著差異，表明附子丁香散穴位貼敷對陽虛型STC大鼠血清VIP及SP水平有調(diào)節(jié)作用，可能通過下調(diào)血清VIP水平和升高血清SP水平興奮平滑肌，引起平滑肌收縮，調(diào)節(jié)腸道功能，促進(jìn)腸道蠕動，達(dá)到治療陽虛型STC的目的，這可能是附子丁香散加味穴位貼敷治療陽虛型STC的作用機(jī)理之一。

[1] Ruiz López MC，Coss Adame E．Quality of life in patients with different constipation subtypes based on the Rome Ⅲ criteria[J]．Rev Gastroenterol Mex， 2015，80(1):13-20．

[2] Cirillo C，Capasso R．Constipation and Botanical Medicines: An Overview[J]．Phytother Res，2015，29(10):1488-1493．

[3] 童駿峰,徐志偉,楊元宵,等. 腺嘌呤與氫化可的松所致大鼠腎陽虛證模型比較研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,(11):3901-3904.

[4] 黃小麗,陳琳,陳晨,等. 3種便秘模型的比較研究[J].四川動物,2015,(1):111-116.

[5] Costilla VC，F(xiàn)oxx-Orenstein AE．Constipation: understanding mechanisms and management[J]．Clin Geriatr Med， 2014，30(1):107-115．

[6] Forrest A, Parsons M. The enhanced spontaneous activity of the diabetic colon is not the consequence of impaired inhibitory control mechanisms[J]. Auton Autacoid Pharmacol, 2003,23:149-158.

[7] Ding Z，Chen Y，Jiang CQ，et al．Total colonic exclusion plus side to side ileorectal antiperistaltic anastomosis in the treatment for elderly patients with slow transit constipation[J]．Zhonghua Wei Chang Wai Ke Za Zhi， 2013，16(7):637-640．

[8] Suares NC， Ford AC． Prevalence of and risk factors for chronic idiopathic constipation in the community:systematic review and meta analysis [J]．Am J Gastroenterol， 2011，106(9):1582-1591．

[9] Dockray GJ.Physiology of the Gastrointestinal Tract[M]. 2 nd Ed,Raven,New York, 1987:41-66.

[10] 楊玲玲，王建民.慢傳輸型便秘和腸神經(jīng)系統(tǒng)關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2014，26(3)：312-314.

[11] 丁義江,哈楠林,丁曙晴,等.結(jié)腸慢傳輸型便秘與突觸素和P物質(zhì)及血管活性腸肽的臨床研究[J].中華胃腸外科雜志,2004，7:485-487.

[12] 高峰,張勝本,張連陽,等.慢傳輸型便秘乙狀結(jié)腸VIP、SP免疫組化研究[J].中華消化雜志，1998，18:34-36.

[13] Wedel T, Roblick UJ, Ott V, et al. Oligoneuronal hypoganglionosis in patients with idiopathic slow-transit constipation[J]. Dis Colon Rectum, 2002,45:54-62.

[14] 吳美玉,胡團(tuán)敏.血管活性腸肽與消化系疾病的研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志,2012,20(16):1453-1457.

[15] 馬黎倩，李成蔭，汪悅.增液湯對慢傳輸型便秘模型小鼠結(jié)腸VIP及AQP3表達(dá)的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2015，38(8)：532-534.

[16] El-Salhy M. Gastrointestinal transit in an animal model of human diabetes type 2:relationship to gut neuroendocrine peptide contents[J]. Ups J Med Sci, 2002,107:101-110.