前列腺癌組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達變化及意義

郝斌，苗志剛，袁媛，季德才

(滄州市中心醫院，河北滄州061000)

前列腺癌是男性泌尿生殖系統常見的惡性腫瘤。在美國，前列腺癌發病率居男性惡性腫瘤的第1位[1]。近年來隨著人口老齡化、飲食習慣及生活方式的改變，我國前列腺癌的發病率呈現持續快速增長趨勢[2，3]。前列腺癌早期癥狀隱匿，臨床發現多屬于中晚期，5年生存率低，預后較差。凋亡抑制蛋白核轉錄因子E2相關因子2(Nrf2)及c-Myc基因在腫瘤的發生發展過程中起重要作用。本研究探討二者在前列腺腫瘤發病過程中的作用，從而為探索前列腺癌新的診斷及防治方法提供依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2007年6月～2013年3月于本院手術治療的前列腺癌患者42例，年齡47～82(61.23±7.43)歲，均為腺癌，術前均未行放化療；依據Gleason評分標準[4]分為高分化9例、中分化23例、低分化10例；淋巴結轉移29例、無淋巴結轉移13例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期25例；排除有前列腺癌家族史、前列腺癌術后復發者。選擇同期手術治療的前列腺增生患者50例，年齡48～65(58.13±4.81)歲。術中取前列腺癌組織及前列腺增生患者的正常組織，均經病理檢查證實。前列腺癌患者與前列腺增生患者年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達檢測 采用免疫組化SP法。標本均經甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片。按照免疫組化SP法說明書進行操作。采用10 mmol/L的檸檬酸抗原修復液(pH值6.0)高溫修復3 min，以PBS代替一抗作為陰性對照。Nrf2、c-Myc陽性染色為棕黃色，Nrf2主要定位于細胞質和胞核，c-Myc主要定位于細胞核。結果判斷：著色強度無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞百分比0為0分，0<陽性細胞百分數≤25%為1分，25%<陽性細胞百分數≤50%為2分，50%<陽性細胞百分數≤75%為3分，75%<陽性細胞百分數≤100%為4分。以上兩項評分乘積>3為陽性，≤3為陰性[5]。Nrf2、c-Myc兔抗人單克隆抗體購自Santa Cruz生物技術公司，工作濃度1∶1 000；免疫組化二抗試劑盒、DAB染色劑購自泰科蘭博(北京)生物技術有限公司。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計數資料以例數表示，比較應用χ2檢驗；相關性采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達比較 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2蛋白陽性表達率分別為78.57%(33/42)、8.00%(4/50)，比較差異有統計學意義(P<0.05)；前列腺癌組織及正常組織中c-Myc蛋白陽性表達率分別為90.48%(38/42)、12.00%(6/50)，比較差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 Nrf2、c-Myc蛋白陽性表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關系 Nrf2及c-Myc蛋白陽性表達率與浸潤深度、淋巴結轉移、腫瘤分期有關(P均<0.05)，與前列腺癌患者年齡、腫瘤大小及分化程度無關(P均>0.05)。見表1。

表1 Nrf2、c-Myc蛋白表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關系(例)

2.3 前列腺癌組織中Nrf2與c-Myc蛋白表達的相關性 前列腺癌組織中c-Myc及Nrf2蛋白表達均陽性30例。對二者免疫組織化學染色積分進行分析，結果顯示呈正相關(r=0.418，P<0.05)。

3 討論

前列腺癌是歐美國家男性最常見的惡性腫瘤，其病死率位列癌癥第2位[6]。流行病學研究顯示，隨著人們生活方式的改變、人口老齡化及診斷技術的提高，我國前列腺癌發病率的年度變化百分比從1988～1994年的2.1%上升至1994～2002年的13.4%。前列腺癌已嚴重威脅我國男性健康[7,8]。然而，目前對于前列腺癌發病及進展機制仍不完全清楚，亟需深入探索。

Nrf2介導的細胞適應性氧化應激是重要的抗氧化防御系統，對于抗致癌因素的氧化損傷起重要的作用。但是該信號通路的持續激活又進一步促使腫瘤的發生及耐藥性的增加。研究結果顯示，Nrf2在正常前列腺組織中無表達或低表達，在前列腺癌組織中高表達，且與腫瘤的淋巴結轉移和臨床分期相關[9，10]。本研究結果顯示，前列腺癌組織中Nrf2蛋白陽性表達率高于正常前列腺組織，其高表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期密切相關。提示Nrf2可能為前列腺癌特異性表達的一種分子生物學標志物，可作為前列腺癌早期診斷和預后評判的指標。

c-Myc作為一種癌基因，可使腫瘤細胞無限增殖、永生化，在腫瘤細胞增殖、分化、凋亡及代謝等過程中發揮重要作用[11，12]。c-Myc編碼為一類絲氨酸/蘇氨酸的磷酸化蛋白質，具有與DNA結合的功能。c-Myc蛋白具有促進細胞增殖和誘導細胞凋亡的雙重功能。c-Myc基因表達失調和過度在腫瘤發生的各階段起關鍵作用[13]。研究發現，c-Myc在肺癌、胃癌及乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達，通過調節基因組10%～15%基因的異常表達影響腫瘤進程[14，15]。本研究發現與前列腺正常組織相比，c-Myc蛋白在前列腺癌組織中呈現高表達，且其高表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期密切相關。通過進一步分析，c-Myc與Nrf2在前列腺癌組織中的陽性表達呈正相關。提示二者共同促進了前列腺癌的發生發展。

綜上所述，前列腺癌組織中Nrf2、c-Myc蛋白呈高表達。Nrf2、c-Myc蛋白異常表達與前列腺癌的侵襲轉移密切相關，進一步分析表明二者的表達呈協同效應，提示二者共同促進前列腺癌的發生發展。

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