乙肝病毒血清學檢驗中化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗的應用效果

郭躍文 張勇軍 丁超(通訊作者)

（哈密市第二人民醫院檢驗科 新疆 哈密 839001）

乙肝是臨床對乙肝病毒性肝炎的簡稱，其主要是由乙肝病毒（HBV）導致的，患者主要臨床表現為惡心嘔吐、厭油、乏力、肝功能異常、肝大等，少數病例還同時會出現黃疸、發熱癥狀。其病程呈現遷延慢性發展的特點，病情嚴重者會逐漸發展成重型肝炎、肝硬化甚至肝癌。乙型肝炎是一種全球流行性病毒感染性疾病類型，在國內部分地區具有較高的發病率。隨著病情的持續發展和惡化，患者的生命安全也會受到嚴重威脅[1]。目前臨床方面尚未尋找到治療乙肝的特效藥物或方法，這在一定程度上增加了患者的精神壓力和患者家庭、社會負擔。如何在發病初期對乙型肝炎患者做出準確診斷，以便盡快采取針對性治療和處理是臨床診斷工作的重點所在[2]。免疫學和乙型肝炎血清標志物檢驗是臨床檢測診斷乙型肝炎的常用方法，為評定ECLIA、ELISA兩種檢測方式的診斷價值，本文選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象，現評析報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象，入選患者均符合《病毒性肝炎防治方案》（中華醫學會傳染病、肝病學會、寄生蟲病學分會）中乙型肝炎的相關診斷標準[3]。其中男患者83例，女患者37例，患者最小年齡24歲，最大年齡50歲，平均年齡（46.8±5.8）歲，

1.2 方法

要求所有患者均在清晨空腹狀態下接受檢驗，抽取10mL肘部靜脈血，進行10min左右的3000r離心處理，將血清分離出來待檢。將血清樣本均分成2分，采用ELISA、ECLIA先后進行檢驗，每次檢驗時都將定值參考比作為質控的標準，涉及到的相關操作均按照試劑盒上的要求進行。

1.2.1 ELISA檢驗方法的具體操作和標準 選擇雙抗原夾心法測定血清樣本，采用去離子水稀釋的方式促使50mL的濃縮洗滌液至1000mL，并將其放置在專門的洗液瓶中，調整酶標試劑達到試劑預頂位置，并對吸光度值等進行讀取，臨界值為陰性對照平均吸光度（A）值為依據，其中陽性：S/OD（標本OD值和臨界OD值的比值）在1.00以上；陰性：S/OD在1.00以下。

1.2.2 ECLIA檢驗方法的具體操作和標準 選擇雙抗體夾心法測定血清樣本，在預定位置將洗液、吸頭、配套反應杯等放置好，使用濃度為75%的酒精棉球對試劑進行擦洗，需共同培育的不僅僅是待測樣本，還有經過生物素標記的HBsAb和乙肝表面抗原（HBsAg），然后再與親和素標記的磁微粒共同進行孵育，通過反復洗滌的方式，分離出游離的抗原、抗體以及復合物等，將三丙胺加入，并將ECL反應啟動，依據其激光強度對乙肝表面抗原（HBsAg）濃度進行判定，其中陽性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以上；陰性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以下。

1.2.3 重復性檢驗 選擇20份低、中、高濃度的乙肝表面抗原（HBsAg）陽性血清進行冷凍保存處理，每天進行1次測量，選擇其中10份對批間重復性進行計算，另外10份則對批內重復性進行計算。

1.3 觀察指標

將乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗體（HBeAb）作為檢測內容。其中的參考上限值為0.15ng/mL，乙肝表面抗體（HBsAb）參考上限值為10mIU/mL，乙肝e抗原（HBeAg）的參考上限值為0.25NCU/mL，乙肝e抗體（HBeAb）參考上限值在3.0NCU/mL以上，乙肝核心抗體（HBcAb）參考值在2.0NCU/mL以上。測定值在參考值上限以上則可確定為陽性[4]。

1.4 統計學處理方法

選擇SPSS22.0版本的統計學軟件對得到的所有數據進行分析處理，檢測結果中的計數資料采用百分率（%）加以描述，對比行χ2檢驗，如果P＜0.05，則代表差異有統計學意義。

2.結果

2.1 對兩種方法的檢測結果進行統計比較

在乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）檢測結果比較上，ECLIA、ELISA兩種檢測方法差異不存在統計學意義(P＞0.05)，但在乙肝e抗體（HBeAb）檢驗結果比較上，ELISA與ECLIA之間差異顯著，具有明顯的統計學意義(P＜0.05)，詳細數據見下表所示。

2.2 對兩種檢測方法的重復性進行比較

比較ECLIA、ELISA兩種檢測方法的重復性，除高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）含量差異不明顯外(P＞0.05)，ECLIA檢測到低濃度、中濃度乙肝表面抗原（HBsAg）含量的重復性與ELISA具有明顯的統計學差異(P＜0.05)。

表2 對兩種檢測方法的重復性進行比較

3.討論

乙型肝炎病毒是一種在全世界各個地區均廣泛存在的一種傳染性的多發病，我國屬于該病的高發國之一，其中攜帶乙肝表面抗原（HBsAg）患者的百分比在7%～11%范圍內。乙肝表面抗原（HBsAg）主要指的是人體發生乙型病毒性肝炎感染后，針對HBV特點，機體免疫系統自發形成的一種特異性抗體[5]。截止到目前為止，臨床方面和相關研究學者尚未尋找到特效治療藥物或方法，故早發現乙肝表面抗原（HBsAg）異常并盡早作出明確診斷具有至關重要的作用。

酶聯免疫吸附試驗可準確反映出乙型肝炎病毒血清學指標，其顯著性特點為操作簡單方便，準確率高，但其不存在定量分析的能力，無法動態觀察到患者病情變化和臨床療效進展，對乙型肝炎病毒感染復制情況不能進行準確判斷[6]。ECLIA屬于生物素-親和素技術之一，通過電化學在電極表面形成特異性化學發放反應，其是當前最為科學先進的一種化學發光免疫測定系統。ECLIA技術使用的載體是一種順磁性微粒，其是由電磁鐵控制的，其可使檢測的標準化和自動化轉化為現實，從而有效減少人工操作過程中導致的各種誤差，實現精準的定量、定性分析，使批內、批間誤差大幅度減少。與此同時，還可在一定程度上降低因游離抗體導致的假陰性結果，使ECLIA檢測的特異性明顯提高[7]。本組研究對照性研究分析了ECLIA、ELISA檢驗方法，結果顯示，兩種方式在乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）標志物檢測結果上無差異(P＞0.05)，在乙肝e抗原（HBeAg）標志物檢測結果上，差異具有明顯的統計學意義(P＜0.05)。究其原因：ELISA是基層醫院檢測乙肝的常用方法，其已經廣泛應用于臨床中，雖價格低廉且檢驗迅速，但檢測乙肝病毒血清標志物時，定性分析價值尚可，但定量分析還存在一定的不足之處，特別是當血清樣本濃度過高的情況下，假陰性現象十分常見，再加上實際的檢測過程中，抗體和抗體試劑生產差異性導致的誤差，會對檢驗結果產生影響。而ECLIA主要通過電磁鐵對順磁性微粒進行控制，完全實現了自動化操作檢驗，可避免人為操作引起的各種失誤。與此同時，電磁鐵產生的電磁擁有的快速消失性可對抗體和復合抗體分離進行有效游離抵抗，可大大減少游離抗體形成的陽性影響，提高陰性檢出率[8]。本組研究還發現，在批內、批間重復性檢測中，ECLIA與ELISA檢出率的差異在低濃度上進行比較，差異顯著(P＜0.05)，但高濃度上比較，差異則不具有統計學意義(P＞0.05)，這充分證明，ELISA對高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）的檢測結果較為準確，對低濃度乙肝表面抗原（HBsAg）的檢測結果則不理想，但ECLIA因為檢測方法比較廣泛，故檢測結果顯示其檢出率的差異以低濃度最為明顯，高濃度不明顯(P＞0.05)，這充分說明ELISA在高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）中更為適用，ECLIA的檢測范圍更加廣泛，對低濃度乙肝表面抗原（HBsAg）加大檢測力度，可對傳染源進行更加科學有效的控制[9]。

綜合上述分析，ECLIA在乙肝病毒血清學檢驗中具有較高的診斷價值，其對乙肝表面抗原（HBsAg）的陽性檢出率高于ELISA，值得臨床優先選擇和使用推廣。

[1]程育春.化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的應用[J].中國實用醫藥，2016，11(15):53-54，55.

[2]李平.化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的應用分析[J].東方食療與保健，2016，09(5):9-9.

[3]黃懌箐.化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的應用分析[J].基層醫學論壇，2017，21(23):3102-3103.

[4]張怡莎.乙肝病毒血清學檢驗采用化學發光法與酶聯免疫法的效果對比[J].中國衛生產業，2014，56(32):32-33.

[5]寧進.化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的應用效果[J].中國保健營養，2017，27(19):317.

[6]胡曉丹.目前乙肝病毒不同臨床檢測方法的對照研究[J].國際病毒學雜志，2015，22(z1):142-143.

[7]王澤民.時間分辨熒光免疫技術在乙肝病毒血清學檢測中的研究[J].內蒙古醫科大學學報，2013，38(6):455-458.

[8]陳海雁，張桂花，羅錦彬，等.熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA和乙肝病毒標志物檢測的臨床價值分析[J].國際檢驗醫學雜志，2014，07(16):2216-2217.

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