ELISA法和化學發光法在血清HIV—1、HIV—2、HCV抗體檢測中的應用價值分析

黃燕青++林玉葉

[摘要]目的 分析酶聯免疫吸附測定法（ELISA）和化學發光法（CLIA）對血清中HIV-1抗體、HIV-2抗體、HCV抗體的檢測意義。方法 選取2016年3月～2017年6月我院收集的血液標本1188份，分別采用ELISA法和CLIA法對標本進行HIV-1抗體、HIV-2抗體、HCV抗體進行檢測，以Western Blot檢測結果作為HIV-1抗體、HIV-2抗體檢測金標準，以PCR檢測結果作為HCV抗體檢測金標準。比較兩種方法的診斷效果。結果 在檢測HIV-1抗體、HIV-2抗體時，CLIA法與金標準Western blot的Kappa值為0.923，高于ELISA法與金標準Western blot的0.768。CLIA法的Youden指數為0.999，高于ELISA的0.832。在檢測HCV抗體時，CLIA法與金標準PCR的Kappa值為0.898，高于ELISA法與金標準PCR的0.831。CLIA法的Youden指數為0.905，高于ELISA的0.831。結論 CLIA法檢測血清HIV-1、HIV-2、HCV時具有靈敏度、特異度較高，與金標準高度一致的特點，值得臨床推廣。

[關鍵詞]酶聯免疫吸附測定法；化學發光法；人類免疫缺陷病毒；丙型肝炎病毒

[中圖分類號] R512.91 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）1（c）-0135-04

Application value analysis of ELISA and Chemiluminescence in detection of serum HIV-1，HIV-2 and HCV antibodies

HUANG Yan-qing LIN Yu-ye

Clinical Laboratory，People′s Hospital of Lancheng District of Jieyang City in Guangdong Province，Jieyang 522000，China

[Abstract]Objective To analyse the significance of ELISA and CLIA value on serum HIV-1 antibody，HIV-2 antibody，HCV antibody detection.Methods 1188 blood samples collected in our hospital from March 2016 to June 2017 were selected.HIV-1 antibody，HIV-2 antibody and HCV antibody were detected by ELISA and CLIA respectively.Western blot test results as HIV-1 antibody，HIV-2 antibody test gold standard，PCR test results as HCV antibody test gold standard，the diagnostic effects of both methods were compared.Results In the detection of HIV-1 antibody，HIV-2 antibody，the Kappa of CLIA method with Western blot was 0.923，which was higher than that of the ELISA method （0.768）.The Youden index of CLIA was 0.999，which was higher than that of the ELISA （0.832）.In the detection of HCV antibody，the Kappa of CLIA method with Western blot was 0.898，which was higher than that of the ELISA method （0.831）.The Youden index of CLIA was 0.905，which was higher than that of the ELISA （0.831）.Conclusion In the detection of HIV-1，HIV-2，HCV，the sensitivity，specificity of CLIA is higher，and more consistent with the gold standard，which is worthy of clinical promotion.

[Key words]Enzyme linked immunosorbent assay；Chemiluminescence immunoassay；Human immunodeficiency virus；Hepatitis C virus

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）和病毒性肝炎（viral hepatitis，VH）均是我國乙類傳染病（category B infectious disease，CBID）。AIDS是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起，目前已經證實HIV病毒分為2型，HIV-1型和HIV-2型[1]。丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是病毒性肝炎的一種，可引起丙型肝炎，是導致急慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌的主要原因之一[2]。目前的研究結果顯示，HIV-1、HIV-2、HCV的感染率在近幾年出現明顯增長的趨勢，如何快速、有效地檢測HIV-1、HIV-2、HCV的感染，成為相關學者的研究熱點[3]。基于此，本研究通過分別對1188例血液樣本進行酶聯免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）和化學發光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）檢測，分析ELISA法和CLIA法在檢測HIV-1、HIV-2、HCV中的意義，為今后的臨床檢驗提供參考，現報道如下。endprint

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月～2017年6月份我院體檢中心收集的血液樣本1188分，其中男性血液樣本672份，女性血液樣本516份，樣本來源人群年齡為（36.72±7.22）歲。

1.2儀器及試劑

主要儀器：全自動酶聯免疫分析儀為Hamilton FAME-2420（瑞士哈美頓）；全自動蛋白印跡儀為Tecan（瑞士，帝肯）；全自動化學發光儀為sysmex HISCL-5000（日本，希森美康）。主要試劑：人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（珠海，麗珠）；丙肝抗體檢查試劑盒（上海，科華）；HIV-1+2抗體免疫印跡試劑（新加坡，MP生物醫學亞太有限公司，HIVBLOT 2.2）；丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（RCR-熒光探針法）（中山大學，達安基因股份有限公司）。人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑盒化學發光法（日本，希森美康）；丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒化學發光（日本，希森美康）。以上所有試劑均在有效期內使用，并嚴格按照試劑盒說明書進行實驗操作。

1.3檢查方法

所有樣本均由電腦生成編號，采集的血清樣本按一次使用量分裝，避免反復低溫冷凍。取樣后均放在-20℃冰箱中凍存，檢測前取出。所有檢測均由接受過專業培訓的技師完成，嚴格按照試劑盒說明書操作及《全國艾滋病檢測技術規范》（2015年修訂版）[4]、《丙型肝炎病毒實驗室檢測技術規范》（2011年）[5]要求，進行初篩、復檢及確證。以Western blot檢測結果作為HIV-1、HIV-2抗體檢測金標準，以PCR檢測結果作為HCV抗體檢測金標準。

1.4統計學處理

采用SPSS 18.0統計學軟件對數據進行分析，靈敏度（真陽性率）=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度（真陰性率）=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；準確度（符合率）=（真陽性+真陰性）/總數×100%；漏診率（假陰性率）=假陰性/（真陽性+假陰性）×100%；誤診率（假陽性率）=假陽性/（假陽性+真陰性）×100%；陽性預測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%；陰性預測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。一致性分析采用Kappa檢驗，以Kappa≥0.75記為一致性極高，0.75>Kappa≥0.40記為一致性較高，Kappa<0.40記為一致性較差。以Youden指數表示檢測真實性，Youden指數越大說明篩查實驗的效果越好，真實性越大。

2結果

2.1 ELISA法、CLIA法檢測HIV-1、HIV-2結果分析

1188份血液標本中，有6份（0.51%）樣本經Western blot檢查后診斷為HIV感染，有5份（0.42%）樣本經ELISA法檢查后診斷HIV感染，有6份（0.51%）樣本經CLIA法檢查后診斷為HIV感染（表1）。

2.2 ELISA法、CLIA法檢測HCV結果分析

1188份血液標本中，有56份（4.71%）樣本經PCR檢查后診斷為HCV感染，有47份（3.96%）樣本經ELISA法檢查后診斷HCV感染，有51份（4.29%）樣本經CLIA法檢查后診斷為HCV感染（表2）。

2.3 ELISA法、CLIA法檢測HIV-1、HIV-2效能的比較

CLIA法與金標準Western blot的Kappa值為0.923，高于ELISA法與金標準Western blot的0.768。CLIA法的Youden指數為0.999，高于ELISA的0.832（表3）。

2.4 ELISA法、CLIA法檢測HCV效能的比較

CLIA法與金標準PCR的Kappa值為0.898，高于ELISA法與金標準PCR的0.831。CLIA法的Youden指數為0.905，高于ELISA的0.831（表4）。

3討論

盡管Western blot和PCR在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷中具有較好的診斷靈敏度、特異度和準確性，是目前診斷HIV-1、HIV-2、HCV的金標準[9-11]，但是由于該項檢查費用昂貴，加之操作繁瑣，臨床應用受到限制[12-14]。ELISA法是基于抗原或抗體與某種特異酶相結合形成酶標抗原或酶標抗體，這種物質不僅可以保留抗體原有的免疫活性，還具有酶的生物活性，具有較高的測量精度[15-17]。CLIA法是發光免疫技術的一種，將發光系統與免疫反應相結合，以檢測抗原或抗體的方法，臨床上應用同樣也比較廣泛[16-17]。以臨床工作實踐角度來看，ELISA法的不足之處在于未進行全自動化操作，為手工操作，比較費時費力，且重復性較差，同時，使用的試劑為定性試劑，不能作為定量試劑使用；而CLIA法較ELISA法操作更簡便，更節省時間，同時具有較強的重復性，并且為定量測定。

本研究通過分析CLIA法和ELISA法在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷結果和效能，結果顯示，兩種方法在診斷HIV-1、HIV-2、HCV時均具有與金標準極高的一致性（Kappa值均>0.75），但CLIA法更優于ELISA法（0.923 vs. 0.768；0.898 vs. 0.831）。CLIA法的Youden指數高于ELISA法，這一結果提示，應用CLIA法進行篩查實驗的效果更好，真實性更大，張巧安[18]在其研究中也得出了類似結論。在檢測HIV-1、HIV-2時，CLIA法的檢測靈敏度為100.00%，檢測特異度為99.92%，高于ELISA法，同時誤診率和漏診率均低于ELISA法，這與陸韜宏等[19]的研究結果相類似。在檢測HCV時，CLIA法檢測靈敏度為91.07%，檢測特異度為99.47%，高于ELISA法，這一結果高于李微等[20]的研究報道。endprint

本研究對比CLIA法和ELISA法在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷效能，結果提示，臨床工作中，在進行HIV-1、HIV-2、HCV檢測時，CLIA法的檢測靈敏度、特異度、與金標準的Kappa值及Youden指數均高于ELISA法，因此，在臨床檢測HIV-1、HIV-2、HCV時，應首先考慮應用CLIA法，必要時需兩種方法結合使用，以最大程度降低誤診率和漏診率。

綜上所述，CLIA法檢測血清HIV-1、HIV-2、HCV具有靈敏度、特異度較高，與金標準高度一致的特點，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2017-11-29 本文編輯：祁海文）endprint