高效液相法快速檢測降血脂類中成藥中非法添加化學(xué)成分

湯珺+龍玉瓊

[摘要]目的 建立快速篩查降血脂類中成藥中非法添加普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀的分析方法。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm），甲醇0.03 mol/L、磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH至3.5）（75∶25）為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，柱溫30℃，檢測波長238 nm。結(jié)果 普伐他汀鈉的線性方程為Y=2933.12927X+153.32226（r=0.99971），阿托伐他汀鈣的線性方程為Y=2382.54405X-38.16470（r=0.99998），洛伐他汀的的線性方程為Y=2166.75981X+84.99321（r=0.99993），辛伐他汀的線性方程為Y=1784.69863X+147.95365 （r=0.99981），峰面積呈良好的線性關(guān)系；普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀平均回收率（n=6）分別為103.3%（RSD=0.9%）、108.3%（RSD=0.7%）、99.6%（RSD=0.6%）、95.6%（RSD=0.7%）。結(jié)論 經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，此方法快速、簡便，可以作為分析降血脂類中成藥中非法添加的快速有效篩查方法。

[關(guān)鍵詞]高效液相法；降血脂類中成藥；非法添加；化學(xué)成分；普伐他汀鈉；阿托伐他汀鈣；洛伐他?。恍练ニ?/p>

[中圖分類號] R951 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）1（c）-0004-03

High performance liquid chromatography method for rapid detection of cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine illegally added chemicals

TANG Jun1 LONG Yu-qiong2

1.Bioinstrumentation Laboratory，Ji′an Center for Food and Drug Control in Jiangxi Province，Ji′an 343000，China；2.Chemical Laboratory，Ji′an Center for Food and Drug Control in Jiangxi Province，Ji′an 343000，China

[Abstract]Objective To establish a quick，sensitive method for analysis of Prefvastatin Sodium，Atorvastatin Calcium，Lovastatin and Simvastatin illegally added into cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine.Methods Anglient ZORBAX SB-C18 （5 μm，4.6 mm×150 mm） column was used，mobile phase consisted of methanol and 0.03 mol/L phosphate （PH to 3.5） （25：75）with flow rate 1.0 ml/min and column temperature at 30℃.The detection wavelength was set at 238 nm.Results The linear equation of Prefvastatin Sodium was Y=2933.12927X+153.32226（r=0.99971），the linear equation of Atorvastatin Calcium was Y=2382.54405X-38.16470（r=0.99998），the linear equation of Lovastatin was Y=2166.75981X+84.99321（r=0.99993），the linear equation of Simvastatin was Y=1784.69863X+147.95365（r=0.99981）.The average recoveries（n=6） of Prefvastatin Sodium，Atorvastatin Calcium，Lovastatin and Simvastatin were 103.3%（RSD=0.9%），108.3%（RSD=0.7%），99.6%（RSD=0.6%），95.6%（RSD=0.7%）.Conclusion After validation，the method was proved to be quick and simple，which can be used to detect illegal additive in cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine.

[Key words]High performance liquid chromatography；Cholesterol-lowering type of proprietary Chinese medicine；Illegally added；Chemicals；Prefvastatin Sodium；Atorvastatin Calcium；Lovastatin；Simvastatin

中成藥的研發(fā)和使用是我國中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的一大特點(diǎn)，降血脂類中成藥在臨床上使用較為廣泛，在三高人群中用藥較為普遍。近年來，由于利益的驅(qū)使，中成藥中非法添加化學(xué)物質(zhì)的情況時(shí)有發(fā)生[1-8]，嚴(yán)重危害了用藥患者的身體健康，也影響了中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本文所用方法可從降血脂類中成藥中快速檢驗(yàn)出普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀4種常見的降血脂用化學(xué)成分，方法簡便、有效，可滿足此類藥物的快檢篩查，為藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和藥品監(jiān)管部門提供技術(shù)支持，現(xiàn)報(bào)道如下。endprint

1儀器與試藥

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；BP211D電子分析天平（賽多利斯公司）；AR2140電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；STARTER 2100 PH計(jì)（奧豪斯儀器上海有限公司）；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm；DAD檢測器；普伐他汀鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100689-200603，純度96.7%）、阿托伐他汀鈣對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100590-201001，純度95.0%）、洛伐他汀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100600-201003，純度99.4%）、辛伐他汀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100601-201003，純度99.0%）。甲醇為色譜純；磷酸二氫鈉為分析純；降血脂類中成藥樣品共4批，依次為血脂康膠囊、通脈降脂片、血脂寧膠囊、血脂寧丸，均由當(dāng)?shù)厮幍曩徺I。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm，4.6 mm×150 mm；柱溫：30℃；檢測器：DAD檢測器；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：1～5 μl；流動(dòng)相∶甲醇-0.03 mol/L、磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH至3.5）=75∶25；檢測波長：238 nm。

2.2供試品溶液的制備

取樣品研細(xì)，稱取一次最大服用劑量，置25 ml離心管中，加入甲醇15 ml，精密稱定，超聲處理15 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，振搖使混勻放置取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3混合對照品溶液的制備

精密稱取普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀對照品各100 mg，置同一100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液。

2.4陰性對照溶液的制備

取處方中不含上述4種化學(xué)成分的降血脂類中成藥，按2.2的方法制備，即得。

2.5陽性對照溶液的制備

精密稱取普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀4種對照品，加入處方中不含上述4種化學(xué)成分的降血脂類中成藥中，混勻，按“2.2”的方法制備成每毫升中含上述4種對照品各1 mg的溶液，即得。

2.6方法專屬性試驗(yàn)

通過對混合對照品溶液、陰性對照溶液、陽性對照溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行檢測，結(jié)果表明混合對照品分離度好，陰性對照溶液無干擾，陽性對照溶液能達(dá)到分離（圖1、2、3）。

2.7 4種成分的線性范圍、r值及回歸方程

分別精密稱取普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀4種對照品，加甲醇稀釋成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以對照品濃度為橫坐標(biāo)X，各自對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1）。

2.8精密度試驗(yàn)

精密吸取2.3中混合對照液各1 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和方法，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀峰面積的RSD分別為0.5%、0.8%、0.4%、0.5%。

2.9回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，精密稱取同一批號陰性樣品6份，分別精密加入一定量的混合對照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果表明本方法回收率良好（表2）。

表2 4種成分的回收率及其RSD（%）

2.10穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下混合對照液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和方法，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，測得上述4種化學(xué)成分的峰面積在12 h內(nèi)無明顯變化，RSD均<1.0%。

2.11樣品的測定

取市售4批降血脂類中成藥制劑，分別按“2.2”項(xiàng)下方法提取各樣品供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件及方法測定，結(jié)果血脂康膠囊中檢出洛伐他?。▓D4），通脈降脂片、血脂寧膠囊、血脂寧丸3批供試品色譜圖中均未呈現(xiàn)與對照品保留時(shí)間一致的色譜峰，即該3批樣品均未非法添加上述4種化學(xué)成分。

3討論

3.1高效液相色譜法檢測波長的選擇

參照《中國藥典》2015年版二部、相關(guān)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[9-12]，普伐他汀鈉、洛伐他汀、辛伐他汀的高效液相法檢測波長為238 nm，阿托伐他汀鈣的檢測波長為244 nm。本試驗(yàn)中采用DAD檢測器，同時(shí)選取238 nm和244 nm兩個(gè)參比波長進(jìn)行比較，通過光譜圖對比，最后選定檢測波長為238 nm。

3.2提取溶劑的選擇

上述4種化學(xué)成分在甲醇中均易溶解，故本試驗(yàn)采用甲醇超聲溶解的提取方法，超聲時(shí)間>15 min后，4種成分的含量無明顯差異，故確定超聲時(shí)間為15 min。

3.3檢測方法的驗(yàn)證

血脂康膠囊的主要成分為紅曲，而紅曲中含有洛伐他汀早有報(bào)道[13-15]，通過本試驗(yàn)在血脂康膠囊中檢出洛伐他汀也驗(yàn)證了這一點(diǎn)，從而進(jìn)一步驗(yàn)證本方法的可行有效。

3.4實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題及討論

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相在雙泵條件下高效液相色譜儀壓力不穩(wěn)定，考慮可能是甲醇與酸性溶液——磷酸二氫鉀溶液在混合過程中產(chǎn)生較多氣泡所致，故本試驗(yàn)最終采取混合流動(dòng)相單泵條件下進(jìn)行檢測，壓力穩(wěn)定，基線平穩(wěn)。

3.5本方法的實(shí)用性

目前，高效液相色譜儀在各地市、縣、區(qū)食品藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)已經(jīng)普及使用，本試驗(yàn)采用高效液相法，在一個(gè)色譜條件下，可從中成藥中一次性檢測普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀4種較為常見的降血脂類化學(xué)成分，方法簡便快捷，可以滿足此類藥物的快檢篩查。endprint

3.6本方法的適用范圍

本研究主要針對中成藥中非法添加普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣、洛伐他汀、辛伐他汀四種化學(xué)成分，同理，保健品中非法添加上述4種化學(xué)成分，亦可采用本方法進(jìn)行檢測分析。

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（收稿日期：2017-08-15 本文編輯：閆 佩）endprint