三種保存方法對24h尿蛋白定量檢測結果的影響

黃燕青

廣東省揭陽市藍城區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，廣東揭陽 522000

尿液蛋白檢測是臨床評價腎功能的常用檢查手段，分為定性診斷和定量診斷。定性診斷只用于初步篩查，如懷疑蛋白尿，則需要進一步做定量診斷[1]。24h尿蛋白定量檢測可以更準確的分析患者每天經(jīng)尿液排泄出的尿蛋白含量，對腎臟疾病的診斷、治療和隨訪，有著重要的意義[2]。以往的研究認為，尿液在收集保存過程中，會與空氣接觸，產(chǎn)生細菌，而產(chǎn)生的細菌會影響尿蛋白定量檢測的結果[3]。因此，臨床檢驗工作中，會應用二甲苯作為防腐劑，使尿液表明形成一層保護膜，以組織尿液與空氣接觸，達到防腐的效果，確保尿蛋白定量檢測結果的準確性。但在實際工作中，由于二甲苯購買渠道受限，患者操作方式不同，以及二甲苯自身的毒性作用，其使用受到限制[4]。本研究旨在通過觀察尿液樣本中不加二甲苯是否會對尿蛋白檢測結果產(chǎn)生影響，為改進尿液樣本保存方式提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 樣本

本研究收集2017年8～9月內(nèi)來我院體檢的健康體檢者中段尿液172份，體檢者平均年齡為（36.22±7.31）歲，其中，男98例，女74例。樣本收集方法為自然排尿法，無經(jīng)血、白帶、精液、糞便等混入，無煙灰等異物混入。

1.2 分組

將收集到的尿液樣本共計6000mL，加入蛋白標準品6.0g，充分攪勻后，使尿蛋白處于1000mg/L，將混合后的樣本，分為2等份，每份各3000mL，設為常溫保存組與低溫保存組，再將常溫保存組樣本分為2等份，其中一份加入二甲苯作為防腐劑，另外一份不做處理。共計3份樣本，常溫不加二甲苯組，常溫加入二甲苯組，低溫不加二甲苯組。測量時，從各樣本選取5份標本進行檢測。

表3 不同保存溫度、不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測結果（x ± s， mg/L）

表4 不同保存溫度、不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測結果（x ± s ，mg/L）

1.3 試劑與儀器

試劑：總蛋白（尿液腦脊液）檢測試劑盒[Roche Diagnostics GmbH， 國食藥監(jiān)械（進）字2013第2405213號]，微量白蛋白檢測試劑盒[Roche Diagnostics GmbH， 國食藥監(jiān)械（進）字 2016第2404197 號 ]。

儀器：羅氏cobas c501 全自動生化分析儀。

1.4 方法

樣本于收集后 0、6、12、18、24、32h 點測量尿總蛋白、尿微量白蛋白和細菌培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計學方法

本研究數(shù)據(jù)由作者記錄、整理，對試驗中獲取的數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS18.0進行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，采用配對t檢驗或單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義，以P＞0.05為差異無統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 二甲苯對24h尿總蛋白檢測結果的影響

未加入二甲苯尿液樣本在常溫和4℃條件下，分別與加入二甲苯尿液樣本24h尿總蛋白檢測結果相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），詳見表1。

表1 不同保存方法下24h尿總蛋白檢測結果比較（x ± s ，mg/L）

2.2 二甲苯對24h尿微量白蛋白檢測結果的影響

未加入二甲苯尿液樣本在常溫和4℃條件下，分別與加入二甲苯尿液樣本24h尿微量白蛋白檢測結果相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），詳見表2。

表2 不同保存方法下24h尿微量白蛋白檢測結果比較（x ± s， mg/L）

2.3 不同保存溫度、不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測結果的影響

不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測結果見表3，常溫組與4℃組間比較，在各個時間點的結果，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。常溫組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h 點檢測結果與0h檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。4℃組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h 點檢測結果與0h檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。兩組樣本組內(nèi)不同時間點比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.4 不同保存溫度、不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測結果的影響

不同檢測時間對未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測結果見表4，常溫組與4℃組間比較，在各個時間點的結果，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。常溫組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h點檢測結果與0h檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。4℃組中，未加入二甲苯樣本在6、12、18、24、32h點檢測結果與 0h檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。兩組樣本組內(nèi)不同時間點比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.5 尿液細菌菌落培養(yǎng)

各組樣本在18h后檢測細菌菌落數(shù)均＞105cfu/mL。

3 討論

二甲苯作為尿保存測常用防腐劑，其具有購買渠道受限，患者操作方式不同，以及二甲苯自身的毒性特性，導致使用受到限制。以往研究表明，對擬進行尿液24h總蛋白和微量蛋白檢測的尿液保存中，是否加入二甲苯，對最終的檢測結果無明顯影響，但此類研究只針對24h時間點進行對比分析，或缺少室溫與4℃保存條件的對比[5-8]。此外，也有研究表明，二甲苯對尿液24h尿蛋白定量檢測結果有影響[9-12]。基于以往研究缺少對照條件和研究結果不相一致的情況，作者以 0、6、12、18、24、32h 點和室溫、4℃保存條件做為分組依據(jù)，分析加入二甲苯樣本、未加入二甲苯樣本的24h總蛋白和微量蛋白檢測結果。研究結果表明，是否加入二甲苯作為尿液保存防腐劑對檢測結果無影響。在檢測尿液細菌菌落培養(yǎng)實驗中，各組樣本在32h后，細菌菌落數(shù)均＞105cfu/mL。提示我們，二甲苯在保存尿液樣本時，防腐作用不明顯。

需要注意的是，目前已經(jīng)有相關學者在進行替代24h尿蛋白檢測意義的實驗，Medina-Rosas J[13]、Pelizzola M[14]、Sanchez-Ramos L[15]在其研究中指出，晨尿中尿蛋白與尿肌酐比值與24h尿蛋白檢測具有較強的相關性，一定程度上可代替24h尿蛋白檢測。盡管如此，相關腎臟疾病診治指南中，仍把24h尿蛋白檢測作為重要的檢測指標。因此，目前來說，把24h尿蛋白檢測還是臨床對腎臟疾病的診斷、治療和隨訪不可替代的檢查手段之一。本研究結果提示，檢測24h尿總蛋白和24h尿微量白蛋白時，可不用二甲苯作為防腐劑，并且于室溫保存即可。

[1] Xin G， Wang M， Jiao L， et al. Protein-to-creatinine ratio in spot urine samples as a predictor of quantitation of proteinuria[J]. Clinica Chimica Acta， 2004， 350（1）：35-39.

[2] Miler M， imundi AM. Low level of adherence to instructions for 24-hour urine collection among hospital outpatients[J]. Biochemia Medica， 2013， 23（3）： 316-320.

[3] Hogan M C， Lieske J C， Lienczewski C C， et al. Strategy and rationale for urine collection protocols employed in the NEPTUNE study[J]. BMC Nephrology， 2015， 16（1）： 190.

[4] ?mür N， Kütük?ü A， Bal C D， et al. Evaluation of Oxidative Stress Status in Workers with Toluene Exposure[J].Turkish Journal of Occupational/Environmental Medicine and Safety， 2016， 1（4）：207-208

[5] Wu W， Yang D， Tiselius HG， et al. Collection and storage of urine specimens formeasurement of urolithiasis risk factors[J]. Urology， 2015， 85（2）： 299-303.

[6] 胡金川， 張立敏， 董洪方， 等 . 不加防腐劑尿液保存方法對 24h 尿蛋白定量測定的影響[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2015， 5： 026.

[7] Yilmaz G， Yilmaz FM， Haklig?r A， et al. Are preservatives necessary in 24-hour urine measurements?[J].Clinical biochemistry， 2008， 41（10）： 899-901.

[8] 張紅梅. 正確收集尿液標本對檢驗結果的影響[J]. 中外醫(yī)學研究， 2011， 9（12）： 52.

[9] 匡祖國. 尿液檢驗結果的影響因素探討[J]. 當代醫(yī)學，2012， 18（2）： 29-30.

[10] 薛雄燕， 黃少珍， 朱嫦琳， 等 . 麝香草酚與二甲苯保存 24 小時尿液對尿蛋白檢測結果的影響[J]. 吉林醫(yī)學， 2016（4）： 842-843.

[11] 馮綺玲， 周天蓉， 黃麗秋 . 影響 24h 尿液標本檢測結果原因調(diào)查分析及對策[J]. 中國醫(yī)療前沿， 2011， 6（15）： 75.

[12] 鄧敬儀， 董慧敏， 李小嫩， 等 . 甲苯在 24h 尿液中的防腐效果[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志， 2016 （4）： 526-528..

[13] Medina-Rosas J， Su J， Cook R J， et al. Comparison of Spot Urine Protein to Creatinine Ratio to 24-Hour Proteinuria to Identify Important Change Over Time in Proteinuria in Lupus[J]. JCR： Journal of Clinical Rheumatology， 2017， 23（6）： 301-307.

[14] Pelizzola M， Gruarin M， Conti L， et al. Comparison Of Dipstick Proteinuria And Urinary Protein To Creatinine Ratio For Early Detection Of Albuminuria： A Retrospective Study In 868 Canine Urine Samples[J]. Journal of Veterinary Internal Medicine， 2014， 28（2）： 718.

[15] Sanchez-Ramos L， Gillen G， Zamora J， et al. The protein-to-creatinine ratio for the prediction of significant proteinuria in patients at risk for preeclampsia： a metaanalysis[J]. Annals of Clinical & Laboratory Science，2013， 43（2）： 211-220.