GC-MS同時測定藥品及其包裝中16種鄰苯二甲酸酯類化合物

李舟，蔡小軍，向錚

（1.溫州出入境檢驗(yàn)檢疫局，浙江 溫州 325027；2.溫州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 溫州 325035）

鄰苯二甲酸酯（phthalic acid esters，PAEs）是最常見的一種增塑劑[1]，被廣泛應(yīng)用于玩具、食品包裝材料、藥品包裝材料及醫(yī)療器械等上百萬種產(chǎn)品中。它是一類環(huán)境激素[2]，可通過飲水、進(jìn)食、皮膚接觸和呼吸等途徑進(jìn)入人體[3]，造成內(nèi)分泌失調(diào)，阻害生物體生殖機(jī)能，長期累積會導(dǎo)致畸形、基因突變和癌變，對人和動物的健康構(gòu)成潛在的危害，是一種不可低估的危險因素[4]，因此，食品、藥品及其包裝中PAEs的檢測研究具有非常重要的意義。歐盟、美國，以及我國臺灣、澳門、香港地區(qū)將塑化劑列入食品、藥品的常規(guī)檢測范圍，制定了相關(guān)測試標(biāo)準(zhǔn)用于PAEs的檢測[5-6]，已有文獻(xiàn)[7-9]報道各種物質(zhì)如食品或食品塑料包裝中PEAs化合物的含量測定。

檢測PAEs的方法主要有紫外分光光度法（ultraviolet and visible spectrophotometry，UV）、薄層色譜法（thin layer chromatography，TLC）、氣相色譜法（gas chromatography，GC）、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）等，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）作為PAEs最常用的分析方法，相對于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（high performance liquid chromatography-mass spectrometry，HPLC-MS），具有本體干擾小、重復(fù)性好、檢測快速的優(yōu)點(diǎn)，國標(biāo)規(guī)定采用該方法測定食品及其包裝中16種PEAs的含量。因此，本研究建立GC-MS同時測定16種PAEs化合物的檢測方法，并將其應(yīng)用于臨床常用藥物及其包裝的PAEs含量測定。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑：Agilent7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀（美國Agilent公司），P300H超聲波清洗器（德國Elma公司），分析天平（JBT5374-1991，上海梅特勒-卡利多儀器有限公司），40 mL反應(yīng)瓶；正己烷、乙睛均為色譜純（德國MERCK公司），蒽D10（Anthracene-d10）為內(nèi)標(biāo)物，鄰苯二甲酸二甲酯（dimethyl phthalate，DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（diethyl phthalate，DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（diisobutyl phthalate，DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）、鄰苯二甲酸二甲氧基乙酯（dimethoxyethyl phthalate，DMEP）、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2戊基）酯[bis（4-methyl-2-pentyl）phthalate，BMPP]、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）酯（diethoxyethyl phthalate，DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（di-N-pentyl phthalate，DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（dihexyl phthalate，DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（benzyl butyl phthalate，BBP）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯[bis（2-butoxyethyl）phthalate，DBEP]、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（dicyclohexyl phthalate，DCHP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯[di（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP]、鄰苯二甲酸二苯酯（diphenyl phthalate，DOP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（dioctyl phthalate，DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（dinonyl phthalate，DNP）等16種標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%，德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

1.1.2 藥品及其包裝：板藍(lán)根顆粒及其包裝（浙江藥通醫(yī)藥有限公司），至靈膠囊及其包裝（杭州天緣藥業(yè)有限公司），復(fù)方磺胺甲噁唑片及其包裝（上海信誼藥廠有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)譜條件：色譜與質(zhì)譜接口溫度為280 ℃，電離方式為電子轟擊源（EI），檢測方式選擇離子掃描模式（見表1），電離能量為70 eV，溶劑延時5 min。

1.2.2 色譜條件：色譜柱為HP-35 MS；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；升溫程序?yàn)槌跏贾鶞?0 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升溫至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min升溫至280 ℃，保持4 min；載氣為氮?dú)猓贿M(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1 μL。

1.2.3 定性確證：在儀器條件下，待測液和標(biāo)準(zhǔn)品選擇離子色譜峰在相同保留時間處（±0.5%）出現(xiàn)，并且對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比與標(biāo)準(zhǔn)品一致，其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品相比應(yīng)符合：相對豐度＞50%時，允許±10%偏差；相對豐度20%～50%時，允許±15%偏差；相對豐度10%～20%時，允許±20%偏差；相對豐度≤10%時，允許±50%偏差，此時可定性確證目標(biāo)分析物。

表1 離子掃描模式參數(shù)

1.2.4 定量分析：本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線定量測定。以各PAEs化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以樣品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，根據(jù)試樣的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取0.1 g標(biāo)準(zhǔn)PAEs（16種標(biāo)準(zhǔn)品混合）置10 mL容量瓶，用正己烷溶解、定容搖勻，得到濃度為10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。使用時稀釋該標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2.2 樣品前處理 取藥品或其包裝材料3 g置40 mL反應(yīng)瓶中，加入正己烷10 mL，超聲30 min，40 ℃。之后取出反應(yīng)瓶加入20 mL正己烷，靜置30 min，加入內(nèi)標(biāo)100 μL，來回振搖5次，靜置10 min，GCMS檢測PAEs的含量。

本實(shí)驗(yàn)選用了正己烷、甲醇、四氫呋喃-乙腈（2∶1）3種溶液作為提取溶劑，利用這3種溶劑分別對16種PAEs進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。由表2可見正己烷作為溶劑時提取效果最好，因此本實(shí)驗(yàn)采用其作為提取溶劑。

表2 3種不同溶劑提取后提取液中16種PAEs化合物濃度的GCMS分析結(jié)果

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 用正己烷將標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液逐級稀釋成50、100、200、300、500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在選定的色譜條件和質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定，得到16種PAEs化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液離子選擇色譜圖（見圖1），線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表3。結(jié)果表明16種PAEs化合物在50～500 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性（R2≥0.9991）。以3倍信噪比為方法檢出限，16種PAEs檢出限為10 ppb；以10倍信噪比為方法定量限，16種PAEs定量限為50 ppb。

圖1 16種PAEs化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 ng/mL）離子選擇色譜圖

2.4 回收率的測定 分別將藥品及其包裝材料剪碎混勻，置于40 mL反應(yīng)瓶中，向反應(yīng)瓶中分別添加水平為0.05、0.10和0.50 mg/kg的16種目標(biāo)化合物，按照2.2的條件進(jìn)行提取、衍生和檢測，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，利用GC-MS方法測定的回收率見表4。未檢出的藥品及其包裝材料包括板藍(lán)根顆粒、復(fù)方磺胺甲噁唑片、至靈膠囊、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料，對這幾種樣品進(jìn)行加標(biāo)回收，每個樣品做了9次平行實(shí)驗(yàn)。

2.5 精密度試驗(yàn) 選擇0.05、0.10、0.50 mg/kg 3個低、中、高濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，平行3次，計(jì)算精密度。16種PAEs化合物的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.12%～8.95%。

2.6 實(shí)際樣品的測定 對板藍(lán)根顆粒、至靈膠囊、復(fù)方磺胺甲噁唑片、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料5種樣品進(jìn)行測定，每份樣品平行測定3次，均未檢測出PAEs的存在。

3 討論

表3 16種PAEs化合物的保留時間、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

表4 16種PAEs化合物不同濃度下的回收率（%）

PAEs屬于干擾生物體內(nèi)分泌的環(huán)境荷爾蒙類化合物，對人類的健康構(gòu)成潛在的危害，但是人們一開始并沒有意識到在由口而入的食品及藥品中會殘留包裝材料遷入的PAEs類物質(zhì)，直到2011年5月起臺灣地區(qū)食品中先后檢出DEHP、DINP、DNOP、DBP、DMP、DEP等6種PAEs增塑劑成分，進(jìn)口葡萄酒中檢出包括DIBP、DBP、DEHP等多種塑化劑[10]，藥品中也檢出DIDP。我國醫(yī)藥衛(wèi)生部門隨后檢測發(fā)現(xiàn)保健品如靈芝孢子粉片和美中清素牌的多種氨基酸片及鈣片、阿司匹林等常用藥均含有PAEs。

本研究建立了測定藥品及其包裝材料中16種PAEs化合物的GC-MS質(zhì)譜法，采用選擇離子檢測確證，內(nèi)標(biāo)法定量，為目標(biāo)化合物的定性與定量分析提供了可靠依據(jù)。方法的線性范圍為50～500 ng/mL，相關(guān)系數(shù)≥0.9991；方法的定量限為50 ppb，平均回收率為99.85%～100.10%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.95%。采用該方法對板藍(lán)根顆粒、至靈膠囊、復(fù)方磺胺甲噁唑片、板藍(lán)根顆粒包裝材料、至靈膠囊包裝材料5種樣品進(jìn)行了測定，其提取液中均未檢測出PAEs的存在。該方法具有操作簡便、靈敏度好等優(yōu)點(diǎn)，對樣品中16種PAEs化合物的測定有重要意義。

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