甘薯莖腐病菌室內藥劑毒力篩選試驗

王璐瑤，仇智靈，姚海峰，張莉麗，樓兵干*

(1.浙江大學 生物技術研究所，浙江 杭州 310058； 2.杭州市臨安區植物檢疫站，浙江 杭州 311300；3.杭州市臨安區農林技術推廣中心，浙江 杭州 311300； 4.杭州市植保土肥總站，浙江 杭州 311020)

甘薯莖腐病是近年來我國新發生的一種細菌性病害，病原菌是達旦提狄克氏菌Dickeyadadantii(“以往”菊歐文氏菌Erwiniachrysanthemi)，可侵染種薯、種苗、葉片、葉柄、莖和塊根。一般田塊株發病率為10%～20%，有的達50%以上，造成薯苗大面積死亡，嚴重影響甘薯產量和品質[1-2]。對甘薯莖腐病的防控無病區嚴禁從病區調運種薯種苗；發病區除了清潔田園，與非寄主作物輪作外，目前最有效的方法是采用化學防治，而化學防治如使用不當，會造成農藥殘留，污染環境，影響消費者的健康。對該病害有效殺菌劑的研究未見有報道。因此，探索篩選安全、有效防治藥劑顯得非常迫切。為此，本試驗采用抑菌圈法對市面上搜集到的常用于防治植物細菌性病害的殺菌劑和生防菌劑進行室內抑菌毒力測定篩選，以期為進一步的藥劑盆栽試驗和田間藥效試驗提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株為本實驗室分離純化的甘薯莖腐病菌株DickeyadadantiiLA0801[1]。

試驗所用殺菌劑和生防菌劑從市場上購買，說明書中明確對植物細菌病害有防治作用的藥劑。春雷霉素(6%春雷霉素可濕性粉劑，延邊春雷生物藥業有限公司)、辛菌胺(1.8%辛菌胺水劑，山西美源化工有限公司)、春雷·王銅(2.0%春雷霉素+45%王銅可濕性粉劑，江西合益化工股份有限公司)、寧南霉素(2%寧南霉素水劑，德強生物股份有限公司)、噻唑鋅(20%噻唑鋅懸浮劑，浙江新農化工股份有限公司)、氯溴異氰尿酸(50%氯溴異氰尿酸可溶性粉劑，江蘇克勝集團股份有限公司)、噻森銅(20%噻森銅懸浮劑，浙江東風化工有限公司)、中生菌素(3%中生菌素可濕性粉劑，陜西標正作物科學有限公司)、葉枯唑(20%葉枯唑可濕性粉劑，浙江東風化工有限公司)、氫氧化銅(46%氫氧化銅水分散粒劑，美國杜邦公司)、大蒜油(80%大蒜油乳油，濰坊奧豐作物病毒防治有限公司)、春雷·中生(2%春雷霉素+3%中生菌素可濕性粉劑，陜西標正作物科學有限公司)、四霉素(0.3%四霉素水劑，遼寧微科生物工程股份有限公司)、二氧化氯(10%二氧化氯，北京華龍星宇科技發展有限公司)、農用硫酸鏈霉素(72%農用鏈霉素可溶性粉劑，華北制藥華諾有限公司)、喹啉銅(50%喹啉銅可濕性粉劑，浙江海正化工股份有限公司)、王菌銅(30%王菌銅微乳劑，西安近代科技實業有限公司)、噻菌銅(20%噻菌銅懸浮劑，浙江龍灣化工有限公司)、乙蒜素(80%乙蒜素乳油，海南正業中農高科股份有限公司)、枯草芽孢桿菌(100億芽孢/克可濕性粉劑，德強生物股份有限公司)。

1.2 處理設計

抑菌試驗分兩步進行。第1步對所有供試藥劑進行高濃度初步篩選，除四霉素(3 000 mg·L-1)、中生菌素(1 250 mg·L-1)和枯草芽孢桿菌(1×1010L-1)外，其他藥劑初篩有效成分濃度均為5 000 mg·L-1；第2步經初步篩選對甘薯莖腐病菌有抑菌效果的藥劑參照使用說明中的用藥濃度，每種供試藥劑按有效成分設置5個濃度。初步篩選和藥劑濃度梯度試驗均重復3次，以無菌水為對照。第1和2步均采用濾紙片抑菌圈法進行測定[3]。將NA培養基上28 ℃培養24 h的供試菌株D.dadantiiLA0801用無菌水制成濃度為1.0×108mL-1的菌懸液，取100 μL于NA平板上均勻涂抹，然后將滅菌的濾紙片(直徑為6 mm)置于用無菌水配制的供試藥液中吸附10 s，取出濾紙片使其靠在培養皿壁上滴落多余的藥液后，再放置在涂有菌的平板上，每皿等距離放置3片，28 ℃下培養24 h后十字交叉法測量抑菌圈的直徑。以藥劑濃度的對數為自變量，抑菌圈的平均直徑為因變量，求出毒力回歸方程[4]，并以使抑菌圈直徑達到一定值(本研究以8 mm為基準)時的藥劑有效濃度進行毒力比較。

1.3 數據處理

采用DPS軟件進行數據處理。

2 結果與分析

2.1 初步篩選

由表1和圖1可知，供試的20種藥劑中四霉素、農用鏈霉素、春雷霉素、二氧化氯、乙蒜素、春雷·中生、辛菌胺、氯溴異氰尿酸、中生菌素、春雷·王銅等10種藥劑對甘薯莖腐病菌有抑制效果。

表1 19種殺菌劑和1種生防菌劑對甘薯莖腐病菌抑制作用的初步篩選結果

2.2 10種殺菌劑對甘薯莖腐病菌抑制作用

將初篩中對甘薯莖腐病菌有抑制作用的四霉素、農用鏈霉素、春雷霉素、二氧化氯、乙蒜素、春雷·中生、辛菌胺、氯溴異氰尿酸、中生菌素和春雷·王銅等10種殺菌劑參照使用說明中的田間使用濃度設置不同濃度進行試驗。

由表2和圖2～3可知，各藥劑抑菌最低濃度從低到高依次為四霉素(3 mg·L-1)、中生菌素(100 mg·L-1)、乙蒜素(100 mg·L-1)、辛菌胺(180 mg·L-1)、春雷霉素(200 mg·L-1)、農用鏈霉素(240 mg·L-1)、氯溴異氰尿酸(278 mg·L-1)。其中四霉素和農用鏈霉素的抑菌效果較好，在試驗設置的濃度內抑菌圈直徑均大于10 mm，而中生菌素、乙蒜素、辛菌胺、春雷霉素、氯溴異氰尿酸、在試驗設置的最高濃度時抑菌圈直徑均小于10 mm，抑菌效果不明顯；而在初篩中有抑菌效果的二氧化氯、春雷·中生、春雷·王銅在本試驗設置的最高有效成分濃度時對菌株LA0801沒有抑制作用。

由表2可以看出，在藥劑推薦使用濃度內，四霉素、農用鏈霉素、春雷霉素、乙蒜素和氯溴異氰尿酸對甘薯莖腐病菌有抑制作用，而辛菌胺、二氧化氯、春雷·中生、中生菌素和春雷·王銅對甘薯莖腐病菌株LA0801沒有抑制作用。

由于濃度梯度試驗中只有四霉素、農用鏈霉素、氯溴異氰尿酸和乙蒜素在設置的所有濃度下對甘薯莖腐病菌株LA0801有抑制作用，因此以這4種藥劑供試的藥劑濃度的對數為自變量，抑菌圈平均直徑為因變量，求出4種藥劑的毒力回歸方程，并以使抑菌圈直徑達到一定值(本文以8 mm為基準)時的藥劑有效濃度進行毒力比較(表3)。

圖1 19種殺菌劑和1種生防菌劑對甘薯莖腐病菌的抑制作用

殺菌劑稀釋倍數有效成分/(mg·L-1)抑菌圈直徑/mm殺菌劑稀釋倍數有效成分/(mg·L-1)抑菌圈直徑/mm四霉素1003020.50a春雷·中生1005006.00a2001518.89ab3001676.00a3001016.83b5001006.00a500613.13c1000506.00a1000310.63d1500336.00a農用鏈霉素100072016.58a氯溴異氰尿酸20025009.14a150048015.17b6008337.81b200036014.50c10005007.28c250028813.93cd14003577.00c300024013.28d18002786.22d春雷霉素1006007.31a中生菌素3001007.78a3002006.17b500606.00b5001206.00b700436.00b1000606.00b900336.00b1500406.00b1000306.00b辛菌胺1001807.42a春雷·王銅25018806.00a300606.00b5006276.00a500366.00b10003766.00a800236.00b15002356.00a1000186.00b20001886.00a二氧化氯10010006.00a乙蒜素40002007.28a3003336.00a50001607.06a5002006.00a60001336.83a10001006.00a70001146.39b1500676.00a80001006.38b

注：抑菌圈平均直徑含濾紙片直徑6 mm，表中同列數字后無相同小寫字母表示在5%的水平上具有顯著性差異。

圖2 不同濃度下四霉素等殺菌劑對甘薯莖腐病菌的抑菌效果

圖3 不同濃度下中生菌素殺菌劑對甘薯莖腐病菌的抑菌效果

由表3知，抑菌圈直徑達到8 mm時，藥劑有效濃度由低到高依次是四霉素(1.67 mg·L-1)、農用鏈霉素(38.69 mg·L-1)、乙蒜素(321.81 mg·L-1)、氯溴異氰尿酸(960.21 mg·L-1)，說明4種藥劑使用同等劑量時，抑菌效果由強到弱依次是四霉素、農用鏈霉素、乙蒜素、氯溴異氰尿酸。

表3 不同殺菌劑對甘薯莖腐病菌的室內毒力結果比較

注：抑菌圈平均直徑含濾紙片直徑6 mm，表中同列數字后不同小寫字母表示在5%水平上具有顯著性差異。

3 討論與分析

經濾紙片抑菌圈法毒力測定，在市場上收集的19種防治植物細菌性病害的殺菌劑和1種生防菌劑中，對甘薯莖腐病菌具有直接抑制作用的有四霉素、農用鏈霉素等10種殺菌劑，其中四霉素與農用鏈霉素這2種藥劑對甘薯莖腐病菌具有明顯的抑制作用與殺菌活性，顯著優于其他藥劑。

不同的殺菌劑對植物病害防控的機理不盡相同，因此本試驗中表現出對甘薯莖腐病菌沒有直接抑制作用的9種殺菌劑，可通過盆栽試驗確定是否對甘薯莖腐病具有防控作用。本次試驗中表現出具有直接抑制作用的殺菌劑也需進一步試驗才能明確每種殺菌劑的防控效果及其具體的使用方法。本次試驗中，按同等劑量比較，四霉素的效果雖好于農用鏈霉素，但按商品制劑用量濃度使用，目前的四霉素商品用量和使用成本要比農用鏈霉素高很多，建議廠家生產出含量更高的四霉素劑型以降低用藥成本和制劑用量。

[1] 沈肖玲，林釵，錢俊婷，等. 甘薯莖腐病癥狀及其病原鑒定[J/OL]. 植物病理學報，http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2184.S.20170425.1806.001.html.

[2] 黃立飛，羅忠霞，房伯平，等. 我國甘薯新病害-莖腐病的研究初報[J]. 植物病理學報，2011，41(1)：18-23.

[3] 胡俊，劉雙平，黃俊霞，等. 幾種藥劑對哈密瓜細菌性果斑病菌的室內毒力比較[C]//中國植物病理學會. 中國植物病理學會 2006 年學術年會論文集.2006:555.

[4] 王雪，高潔，張靜，等. 63種殺菌劑對西瓜、甜瓜細菌性果斑病菌的室內毒力測定[J]. 吉林農業大學學報，2012，36(6)：612-617.