桑枝多糖對糖尿病小鼠腎臟的保護作用※

李永智

（中國醫科大學附屬第四醫院泌尿外科，遼寧 沈陽 110032）

腎臟疾病是世界公共衛生關注的問題，我國患病率約9.4%，糖尿病是誘發慢性腎病的主要因素，糖尿病合并腎病的患者占糖尿病的20%～40%[1]，是糖尿病最多見的并發癥，糖尿病腎病晚期出現腎衰、氮質血癥等是導致死亡的病因之一。糖尿病腎病的發病機制復雜，主要與炎癥反應、氧化應激等因素有關。多項研究[2]表明，桑枝多糖是桑枝的主要成分，桑枝具有降糖降脂、調節免疫、抗氧化等功效。本研究造糖尿病小鼠模型后，觀察桑枝多糖對小鼠血清炎性因子及腎臟氧化因子的影響，探討桑枝多糖對糖尿病小鼠腎臟保護的作用機制。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器 鏈尿佐菌素（STZ） （美國Sigma公司生產），考馬斯亮藍蛋白試劑盒、錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD） 試劑盒、丙二醛（MDA） 試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒（均由南京建成生物有限公司生產）。卓越金銳血糖儀、卓越金銳血糖試紙（均由德國羅氏診斷有限公司生產），全自動生化分析儀（日立公司生產），低溫高速離心機（德國西門子公司生產）。

1.2 藥物 配制桑枝多糖：將桑枝粗粉1 kg，溶入6000 mL乙醇濃度為80%，經過4次提取、過濾、減壓后，再加入2000 mL雙蒸水，經過3次提取、過濾，合并濾液后離心、濃縮為250 mL，去蛋白，加入三氯甲烷-正丁醇萃取。4℃冰箱過夜，低溫高速離心10 min后過濾，加入95%乙醇，醇沉24 h，抽濾后收集濾渣，將濾渣洗滌3次分別經過乙醚、無水乙醇、丙酮，即為桑枝多糖，經測定含桑枝多糖純度為85.6%。纈沙坦（由北京京豐藥物公司生產）。

1.3 動物造模及分組 選取SPF級KM小鼠70只，體質量（18±2）g，購自中國醫科大學動物實驗中心，動物許可證號SCXK-LN2017-0002，適應性喂養1周。造模前禁食水12 h，除對照組15只外，所有小鼠經尾靜脈注入120 mg/kgSTZ藥物造模，72 h后經尾巴采血測空腹血糖（FBG），FBG＞11.1 mmol/L為糖尿病模型制造成功。將造模成功的小鼠隨機分為模型組、纈沙坦組、桑枝多糖組，各15只，纈沙坦組給予灌胃20 mg/kg，桑枝多糖組給予灌胃120 mg/kg，對照組、模型組給予灌胃等量生理鹽水，均每日1次，連續給藥6周。

1.4 采集標本 所有小鼠禁食水12 h后，采集腹主動脈血，經全自動生化分析儀測定血清中FBG、IL-6、TNF-α含量。取所有小鼠的腎臟，參照試劑盒的操作方法，分別檢測腎臟組織內Mn-SOD、MDA、GSH-Px含量。

1.5 統計學方法 采用SPSS 19.0統計分析，計量資料以（x±s）表示，多組間采用方差分析，方差不齊時采用非參數秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4組小鼠血清中FBG、IL-6、TNF-α含量比較 與模型組比較，對照組、纈沙坦組、桑枝多糖組FBG、IL-6、TNF-α明顯降低，差異有統計學意義P＜0.01。與纈沙坦組比較，桑枝多糖組IL-6、TNF-α明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1 4組小鼠血清中FBG、IL-6、TNF-α含量比較 （x±s）

2.2 4組小鼠腎臟組織中Mn-SOD、MDA、GSH-Px含量與模型組比較，對照組、纈沙坦組、桑枝多糖組Mn-SOD、GSH-Px明顯增高，MDA明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.01）。與纈沙坦組比較，桑枝多糖組Mn-SOD、GSH-Px明顯增高，MDA明顯降低，差異有統計學意義 （P＜0.01）。見表2。

表2 4組小鼠腎臟組織中Mn-SOD、MDA、GSH-Px含量（x±s）

3 討論

桑枝中含有較多活性成分如多糖、生物堿、黃酮類化合物等，其中多糖是最主要的活性成分，它具有增強免疫、抗氧化、抗病毒、降血糖等作用[3]，臨床上常將多糖類藥物用于治療腫瘤、心腦血管病、糖尿病等疾病，桑枝多糖的降血糖機制可能是修復了胰島的β細胞，改善了細胞功能，增強胰島素的分泌，達到降糖的目的。研究[4]表明，多糖類藥物能夠清除氧自由基，增強抗氧化反應，減少脂質過氧化產物。高血糖時，細胞內發生氧化應激反應，NF-кB等細胞轉錄因子激活，NF-кB調節IL-6、TNF-α、單核細胞等炎性細胞因子釋放，誘發炎癥反應。Mn-SOD和GSH-Px具有清除氧自由基的作用，MDA是脂質過氧化產物，均能反映腎臟組織發生氧化應激的程度。

本研究結果顯示，桑枝多糖明顯降低糖尿病小鼠血清中血糖、IL-6、TNF-α含量，考慮桑枝多糖通過減少腎臟的毒性，減少腎臟的炎性反應，進一步保護腎組織。本研究顯示桑枝多糖組腎組織Mn-SOD、GSH-Px明顯增高，MDA明顯降低。說明桑枝多糖清除氧自由基能力較強，抑制過氧化反應，減少氧自由基損傷腎組織，保護腎臟。

總之，桑枝多糖能夠減少糖尿病小鼠血清中炎癥因子，減少腎組織過氧化反應，進而對腎組織起到保護作用。

[1]汪會琴，胡如英，武海濱，等.2型糖尿病報告發病率研究進展[J].浙江預防醫學，2016，3(1):37-39，57.

[2]Skarra D V，Thackay V G.FOXO1 is regulated by insulin and IGF1 in pituitary gonadotropes[J].Mol Cell Endocrinol，2015，405(15):14-24.

[3]倪偉建，丁海華，唐麗琴，等.小檗堿對糖尿病腎病大鼠腎組織VEGF表達的影響[J].中國藥理學通報，2015，31（6）：795-800.

[4]宿世震，項東宇，劉杰，等.桑枝黃酮對糖尿病腎病大鼠的保護作用[J].中國老年學雜志，2017，15（37）：3697-3699.