右美托咪定預處理對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護效應＊

鄧福謀 ，張炳輝 ，連芳 ，周志東

(1.南昌大學第二附屬醫院麻醉科，南昌 330006；2.江西省瑞昌市中醫院麻醉科，瑞昌 332200)

腸扭轉、創傷、休克等病理狀態以及手術應激等均可導致腸缺血再灌注損傷[1]。近年來，應用藥物或其活性成分防治腸缺血再灌注損傷已成為研究熱點之一。鹽酸右美托咪定是一種高選擇性的α2腎上腺素受體激動劑，能夠產生劑量依賴性的鎮靜、鎮痛、抗焦慮作用而廣泛應用于臨床[2]。本研究通過右美托咪定預處理在大鼠腸缺血再灌注損傷中的應用，探討右美托咪定預處理對于腸缺血再灌注損傷是否具有保護作用及其對腸黏膜屏障完整性和腸缺血再灌注氧自由基介導損傷的影響，探索腸缺血再灌注損傷的機制及藥物預處理的保護機制。

1 材料與方法

1．1實驗動物與分組 健康成年雄性SD大鼠54只，體重270～310g。采用隨機數字法分成3組：假手術組(Sham)、腸缺血再灌注損傷組(I/R組)、右美托咪定+腸缺血再灌注損傷組(DL組)，每組18只。

1．2模型構建及處理 研究方案經南昌大學第二附屬醫院動物倫理委員會批準。參照文獻[3]介紹的方法制備大鼠腸缺血再灌注損傷模型。腹腔注射10%水合氯醛3.5ml/kg，仰臥位固定，備皮，消毒，鋪巾，正中開腹，分離暴露腸系膜上動脈，采用無損傷小動脈夾夾閉腸系膜上動脈，夾閉腸系膜上動脈根部45min、再灌注2h。Sham組只分離腸系膜上動脈，不夾閉。DL組在缺血前30min經大鼠尾靜脈泵注右美托咪定·25μg·kg-1，Sham 組和 I/R 組給予等容量生理鹽水。

1．3檢測指標 用免疫組織化學測定血管內皮細胞上ICAM-1的表達。用免疫組化法檢測NF-κB因子的表達水平。再灌注2h后，迅速抽取肝下腔靜脈血3ml，經離心后取上清液。對照試劑盒說明書，采用比色法檢測超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛（MDA）含量。

1．4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件，計量資料以均數±標準差表示，組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD－t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

與Sham組比較，I/R組和DL組血管內皮細胞NF-κB 及 ICAM-1表達升高(P＜0.05)；與 I/R 組比較，DL組血管內皮細胞NF-κB及ICAM-1表達下降(P＜0.05)，見表 1。

表1 3組大鼠NF-κB、ICAM-1相對灰度值的比較（x±s）

與Sham組比較，I/R組和DL組血漿MDA水平升高，SOD活力降低(P＜0.05)；與I/R組比較，DL組血漿SOD活力升高，MDA水平降低(P＜0.05)，見表2。

3 討論

缺血預處理是一種機體內源性抗缺血再灌注損傷的保護措施，通過再灌注前給予短暫間斷缺血灌注處理，使其能夠增加對隨后長時間缺血再灌注所造成組織或器官損傷的耐受性[4]，但這畢竟是一種損傷性的過程，且由于預處理最佳時間、安全時限及臨床個體差異等問題使其臨床應用受到限制，因此，探討用藥物替代缺血進行預處理來保護缺血再灌注已成為目前研究的新方向，通過藥物預處理激發機體內源性保護機制，為預處理腸道保護的圍麻醉期應用開辟新的途徑，增強腸道缺血的耐受性，調節機體負反饋來減輕將受損的腸道的傷害應激。

表2 3組大鼠血漿中SOD、MDA表達水平的比較（x±s）

腸缺血再灌注損傷是一種常見的病理生理過程，其中，腸道屏障功能被破壞，菌群移位，毒性物質等釋放入血，活性氧自由基被激活，形成氧化應激，是損傷機制中極為關鍵的環節[5]。大量研究表明，這種氧化應激和炎癥介質所引起的器官損傷的病理生理過程是通過多種分子機制和細胞因子的參與完成的[6]，包括炎性細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和 ICAM-1，而 NF-кB 可以調控這些因子的表達。

NF-κB是參與炎癥反應的一個重要轉錄因子，參與炎癥、免疫應答、細胞增殖、細胞凋亡等生物過程[7]。在早期的腸缺血損傷中，通過調控多種炎性因子基因表達，直接或間接地參與腸缺血-再灌注損傷[8]。缺血-再灌注時，ICAM-1在炎性細胞黏附、聚集以及活化過程中起關鍵作用，其表達受NF-κB編碼的基因調控[9]。本研究中缺血-再灌注組在恢復灌注后NF-κB表達明顯升高，說明隨著腸IR的發生，NF-κB在再灌注期達到一個較高的水平，ICAM-1表達明顯增加，提示再灌注后腸組織黏膜損傷逐漸加重。而右美托咪定預處理組NF-κB和ICAM-1的活化表達明顯低于缺血再灌注組，這可能與右美托咪定預處理抑制了兒茶酚胺、皮質醇等介質的釋放，降低了機體炎癥反應，并在一定程度上抑制NF-κB的活化，從轉錄水平抑制促炎性細胞因子、趨化因子和黏附因子的表達和釋放，抑制ICAM-1的表達，減輕炎癥反應損傷有關。

實驗表明，在腸缺血再灌注損傷中，脂質氧化被認為是其損害的重要機制之一[10]。MDA是細胞膜脂質過氧化反應的產物，其含量變化可反映體內氧自由基的生成及脂質過氧化反應的強烈程度，間接反映了氧自由基對細胞膜的損傷程度，因此，檢測丙二醛的含量可反映氧自由基生成和造成膜損害的程度，而SOD是體內主要的抗氧化酶，能清除自由基SOD的活性反映了機體清除氧自由基的能力。在本研究中，與I/R組比較，DL組的SOD活力升高，丙二醛含量降低，提示右美托咪定具有一定的抗炎、抗氧化作用，通過提高體內抗氧化酶活性抵抗自由基，抑制氧自由基的活化，減輕腸粘膜脂質過氧化的程度。

本研究表明，DL組評價腸損傷的各項指標均較I/R組明顯降低，說明右美托咪定可通過抑制NF-κB活化，降低ICAM-1細胞因子的高表達，減少缺血再灌注腸組織的炎性細胞浸潤及減輕氧化應激反應，使得MDA含量降低，從而減輕腸的缺血再灌注損傷。