HMGB1、Notch1、PCNA 在宮頸癌組織的表達及臨床意義

劉東伯 楊 麗 周洋媚 陳春麗

1．華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院( 武漢，430030) ;2．湖北省十堰市太和醫院

近年來關于高遷移率族蛋白B1( HMGB1) 、人跨膜蛋白Notch1 和增殖細胞核抗原( PCNA) 的研究成為學術界的熱門話題，多篇報道認為三者可能參與了惡性腫瘤細胞的增殖與轉移過程［1-3］。然而目前關于3 種細胞因子表達相關性的研究較少，本研究對宮頸鱗癌、宮頸上皮內瘤變( CIN) 及正常宮頸組織中上述3 種蛋白表達進行檢測，探究其在不同組織間的表達差異、臨床病理特征影響及與宮頸癌組織相關性。

1 資料和方法

1．1 研究對象

選取2015 年1 月—2018 年1 月于本院婦產科行全子宮或次全子宮切除術且病理為宮頸鱗癌的患者60 例( 宮頸癌組) ，患者住院期間無嚴重并發癥，年齡( 49．6±5．2) 歲( 26～78 歲) ;TNM 分期為Ⅰ期19例、Ⅱ期21 例、Ⅲ期20 例; 腫瘤分化程度為低分化26 例，中分化28 例，高分化6 例。另取本院同期確診為宮頸上皮內瘤變( CIN) Ⅲ期患者40 例( CIN組) ，年齡( 50．3±5．4) 歲( 24 ～77 歲) ;參加體檢的健康志愿者20 例( 對照組) ，年齡( 50．8±5．6) 歲( 21 ～75 歲) 。3 組 年 齡 無 統 計 學 差 異( t = 2．435，P ＞0.05) ，具有可比性。本研究經院醫學倫理委員會審批通過，患者及志愿者均對本次研究知情并簽署同意書。

1．2 儀器及試劑

1．3 方法

取宮頸癌和CIN 兩組病灶組織及對照組正常宮頸組織，經固定、脫水透蠟、包埋、切片烘干。于微波下采用枸櫞酸鹽緩沖液修復抗原，加入3%過氧化氫40min、滅活內源性酶，PBS 洗片3 次，滴加山羊血清封閉，時間30min。依次滴加兔抗人HMGB1抗體( 1:100) ，大鼠抗人Notch1( 1:100) 和PCNA 單克隆抗體( 1:100) ，抗體于4℃環境下過夜，甩除一抗，重復PBS 洗片3 次( 5min/次) ，滴加二抗( 1:100) ，室溫下孵育30min，洗片后DAB 染色，脫水透明，封片，顯微鏡下觀察結果。用宮頸鱗癌作HMGB1、Notch1 和PCNA 的陽性對照，PBS 代替一抗作陰性對照。

1．4 顯微鏡觀察標準

1．5 統計學方法

采用SPSS18．0 統計學軟件進行數據處理分析。計量資料用( 珋x±s) 表示，組間比較應用獨立樣本t 檢驗。計數資料用百分率表示，采用檢驗; 分析HMGB1、Notch1 和PCNA 表達程度與臨床病理特征的關系采用秩和檢驗;采用Spearman 法行相關性分析。以P＜0．05 為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 各組宮頸組織蛋白表達情況比較

HMGB1、Notch1 和PCNA 均在細胞核中表達，表現為深褐色或棕黃色顆粒，且宮頸癌組陽性表達率最高，CIN 組次之，對照組最低( P 均＜0．05) 。見表1，圖1～3。

圖1 宮頸組織HMGB1 表達( ×400)

圖2 宮頸組織Notch1 表達

圖3 宮頸組織PCNA 表達( ×400)

2．2 宮頸癌組織中蛋白表達與臨床病理特征關系

宮頸癌組不同年齡段患者宮頸組織中HMGB1、Notch1 和PCNA 表達無統計學差異，而分化程度低、TNM 分期高的組織中上述細胞因子的陽性表達程度相對較高( P 均＜0．05) 。見表2、3、4。

表2 宮頸癌組織中HMGB1 表達程度與臨床病理特征比較［例(%)］

表3 宮頸癌組織中Notch1 表達程度與臨床病理特征比較［例(%)］

表4 宮頸癌組織中PCNA 表達程度與臨床病理特征比較［例(%)］

2．3 宮頸癌組織中3 種蛋白表達的相關性

對60 例宮頸鱗癌組織中HMGB1、Notch1 和PCNA 的表達情況行Spearman 相關性分析，3 者在宮頸鱗癌組織中的表達兩兩均呈正相關( P 均＜0．05) 。見表5。

表5 各蛋白在宮頸鱗癌中表達的相關性(例)

3 討論

子宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，近年發病呈年輕化趨勢［5］。隨著宮頸細胞學篩查的普及，癌前病變和宮頸癌得以在早期發現、診斷和治療，其發病率和病死率也逐漸下降［6-7］。盡管如此，宮頸癌的病死率仍高達35%，其中絕大部分患者在早期未能通過篩查發現，最終死于惡性腫瘤轉移，因此早期診斷對改善患者預后具有重要意義［8］。宮頸癌的發病過程較漫長，需要歷經慢性炎癥、非典型細胞增生、CIN 等階段形成原位癌，在這個過程中，多種原癌基因和抑癌基因參與了調控［9］。近年來關于HMGB1、Notch1 和PCNA 的研究成為熱點，HMGB1 可在凝膠電泳過程中快速遷移，被認為是重要的致炎細胞因子。此外有研究認為HMGB1 具有促進宮頸癌HeLa 細胞增殖、轉移的作用［10］。Notch受體有4 個類型，Notch1 信號通路可維持細胞增殖、分化和凋亡三者間的平衡，當相應染色體發生易位后，可導致該蛋白的胞外區丟失，蛋白整體失去原有功能，胞內區因獲取組成性活性而發揮致癌作用［11］。PCNA 是細胞核內合成的一種蛋白質，其含量的改變可反映DNA 的合成情況，因此可視為評價細胞增殖的指標［12-13］。目前關于三者在宮頸癌組織中表達的相關性報道較少，探究三者關系具有較高的臨床意義。

從本次研究的結果來看，宮頸癌組HMGB1、Notch1 和PCNA 的陽性表達率均高于另外兩組，而對照組最低，與張瑞青［14］研究結果一致，證實三者在宮頸癌形成過程中發生了變化。HMGB1、Notch1和PCNA 在宮頸癌中的表達與年齡無關，而與分化程度和TNM 分期有關，隨分化程度下降和TNM 分期增加，表達程度提高。HMGB1、Notch1 和PCNA在表達上兩兩間均呈正相關。根據上述結果推斷三者均參與了癌細胞的轉移和浸潤過程，同時三者互相起到協同作用，但具體協同機制需進一步探究［15］。本研究的主要不足為以下兩點:①除正常宮頸和宮頸癌組織外，本研究僅選取了CIN Ⅲ期的患者，未來的觀察中可納入宮頸慢性炎癥、不典型細胞增生和CIN Ⅰ～Ⅱ期的患者，以加強對結果的論證;②本研究限于病例數量，僅將臨床上最常見的鱗癌納入研究，因此上述結果是否適用于腺癌、腺鱗癌等類型的宮頸癌仍需進一步驗證。

綜上所述，與正常宮頸和CIN 組織相比，宮頸癌組織中HMGB1、Notch1 和PCNA 的表達顯著提高，其表達程度隨分化程度下降、TNM 分期增加而提高，提示3 種蛋白參與了宮頸癌的發生、發展和浸潤過程，干擾其異常表達有望成為治療宮頸癌的新思路和途徑。