營養強化型奶片對小鼠免疫功能的影響

包怡紅 孫義玄

摘 要：本文針對含有牛初乳粉的自制奶片產品進行功能性研究，其免疫球蛋白IgG含量8%。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》的規定，對本品進行增強免疫力功能性的評價。結果表明該產品可明顯增強小鼠的遲發型變態反應，提高小鼠的半數溶血值（HC50），增加小鼠的碳廓清功能，增強小鼠NK細胞的活性和腹腔巨噬細胞的吞噬功能。由此可見，該奶片可增強細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞吞噬功能和NK細胞活性，即該奶片具有增強免疫力功能的作用。

關鍵詞：免疫球蛋白；IgG；增強免疫力

中圖分類號：TS201 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2018）22-0179-03

IgG是免疫球蛋白的一種，是人和動物血液中含量最高的免疫球蛋白[1]。IgG是動物機體在自然感染和主動免疫之后所產生的主要抗體，其在動物體內具有重要的免疫調節和生理調節的作用，是動物體內免疫系統最為關鍵的組成物質之一[2]。IgG能夠結合、凝集抗原，具有中和毒素和病原微生物（如病毒）的作用，是母體向幼崽傳遞特異性免疫力的主要載體[3]。國內外很多的研究表明，免疫球蛋白IgG對犢牛和人體的免疫功能有影響。如Gutzwiller對初生小牛腹瀉情況的研究表明，從出生第二天開始用添加初乳成分的牛乳喂養小牛，能有效防止新生牛腹瀉的發生[4]。Sugisawa等發現牛初乳能促進外周血中的中性粒細胞發揮吞噬作用，而且這種激活作用是對初乳濃度和其中IgG濃度依賴的，研究表明牛初乳能強烈激活中性粒細胞的吞噬作用，從而在新生兒的非特異性免疫過程中發揮一定的促進作用[5]。本研究對自制的奶片產品進行動物功能性試驗，以驗證該產品對機體免疫力功能的影響，為具有功能性的乳制品開發研究奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 樣品

奶片，自制產品，免疫球蛋白IgG含量為8%，樣品為乳白色粉末（產品為片劑，為試驗方便，采用壓片前物料，成分與定型產品相同），感官檢查未見異常。

1.2 實驗動物

SPF級ICR小白鼠，購自遼寧長生生物技術有限公司。選擇健康雌性小鼠，體重18～22g，根據實驗項目共分五組，每組有40只小鼠，再隨機分為4小組，每組10只，分別開展ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗和NK細胞活性測定、碳廓清實驗及動物臟/體比值測定、半數溶血值（HC50）測定和抗體生成細胞檢測、遲發型變態反應實驗和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。

1.3 劑量設計

奶片產品中免疫球蛋白IgG含量為8%，推薦量每人每日2片，每片1g，即每日食用有效成分免疫球蛋白IgG為0.16g，如成人體重以60kg計，則相當于0.0027g/kg·BW。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.027g/kg·BW（中劑量），上、下各設一個劑量組：0.081g/kg·BW（高劑量，人體推薦量的30倍）和0.014g/kg·BW（低劑量，人體推薦量的5倍）。按動物體重的2%灌胃容積進行灌胃，實驗組的溶劑均為蒸餾水，設蒸餾水為陰性對照組，持續灌胃30天后測各項免疫指標。

1.4 儀器與試劑

動物天平、離心機、顯微鏡、722分光光度計、二氧化碳培養箱、酶標儀等。

無菌手術器械、微量注射器（25μL）、血色素吸管、細胞計數器、游標卡尺（精密度0.01mm）、24孔培養板等。

生理鹽水、綿羊紅細胞（SRBC）、雞紅細胞、小牛血清、SA緩沖液、補體（豚鼠血清）、都氏試劑（碳酸氫鈉1.0g，高鐵氰化鉀0.2g，氰化鉀0.05g，加蒸餾水至1000mL）、Hanks液（pH7.2～7.4）、RPMI 1640培養液、印度墨汁、氧化型輔酶I、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液（pH8.2）、YAC-1細胞、1% NP40、2-巰基乙醇（2-ME）、鹽酸、刀豆蛋白A（ConA）、異丙醇、MTT、PBS緩沖液（pH7.2～7.4）、Giemsa染液、青霉素、鏈霉素等。

1.5 實驗方法

本研究根據《保健食品檢驗與評價技術規范》2003版[6]中對增強免疫力功能試驗項目的要求，分別進行細胞免疫功能測試，包括：ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗（MTT法）、遲發型變態反應（足跖增厚法）（DTH）；體液免疫功能測試，包括：抗體生成細胞檢測（Jerne改良玻片法）、半數溶血值（HC50）的測定；單核-巨噬細胞功能測試，包括：小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗（半體內法）；NK細胞活性測定（乳酸膠氫酶LDH測定法）和臟器/體重比值測定。

1.6 數據處理及結果判定

用spss軟件進行數據統計，用方差分析方法進行數據處理和分析。

2 結果

2.1 奶片對小鼠體重的影響

給予小鼠奶片樣品30d后，對小鼠體重變化的影響見表1。

由表1結果可見，各劑量組試驗動物的初始體重和結束體重與對照組相比較沒有顯著性差異（P>0.05），表明本實驗條件下奶片產品對小鼠體重增長沒有影響。

2.2 奶片對小鼠臟器/體重比值的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對臟器/體重比值的影響見表2。

由表2結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，其脾臟/體重比值和胸腺/體重比值在低、中、高劑量組與對照組間比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產品對小鼠的臟器/體重比值沒有影響。

2.3 奶片對小鼠脾淋巴細胞轉化的影響

給予小鼠奶片產品30d對小鼠脾淋巴細胞轉化影響見表3。

由表3結果可見，經口給予不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，各劑量組的小鼠脾淋巴細胞轉化功能與陰性對照組比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產品不能增強小鼠脾淋巴細胞轉化功能。

2.4 奶片對小鼠遲發型變態反應（DTH）的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠遲發型變態反應（DTH）的影響見表4。

由表4結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，其足跖厚度在注射SRBC前后差值，高、中、低劑量組與對照組間比較有極顯著性差異（P<0.01），表明奶片產品能增強小鼠的遲發型變態反應。

2.5 奶片對小鼠抗體生成細胞的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠抗體生成細胞的影響見表5。

由表5結果可見，給予不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，各劑量組的小鼠抗體生成細胞與對照組間比較均沒有顯著性差異（P>0.05），表明奶片產品不能增強小鼠抗體生成細胞功能。

2.6 奶片對小鼠半數溶血值（HC50）的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠半數溶血值（HC50）的影響見表6。

由表6結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，高、中、低劑量組的半數溶血值（HC50）與對照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），表明奶片產品能提高小鼠半數溶血值。

2.7 奶片對小鼠碳廓清功能的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠碳廓清能力的影響見表7。

由表7結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，高、中、低劑量組吞噬指數與對照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），表明奶片產品能夠增加小鼠的碳廓清功能。

2.8 奶片對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響見表8。

由表8結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，高、中、低劑量組吞噬率和吞噬指數與對照組比較有極顯著性差異（P<0.01），表明奶片產品能夠增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能。

2.9 免疫球蛋白IgG對小鼠NK細胞活性的影響

經口給予小鼠奶片產品30d后，對小鼠NK細胞活性的影響見表9。

由表9結果可見，給予小鼠不同劑量的奶片產品30d，經統計學分析，高、中、低劑量組NK細胞活性與對照組相比較有極顯著性差異（P<0.01）。表明奶片產品能夠增強小鼠NK細胞的活性。

3 結語

經口投予小鼠不同劑量的奶片產品30d，該奶片產品中含免疫球蛋白IgG為8%，分別進行了四類檢驗共計7項試驗，即細胞免疫功能（小鼠脾淋巴細胞轉化實驗和遲發型變態反應）、體液免疫功能（抗體生成細胞檢測和半數溶血值（HC50）的測定）、單核-巨噬細胞功能（小鼠碳廓清實驗和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗）以及NK細胞活性測定。結果表明該奶片產品可以明顯增強小鼠的遲發型變態反應，并提高小鼠的半數溶血值（HC50），可以增加小鼠的碳廓清功能，也可以增強NK細胞的活性和小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能。由此可見，該奶片產品可增強細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞吞噬功能和NK細胞活性，即該奶片產品具有增強免疫力功能的作用。

參考文獻

[1]胡曉艷.免疫球蛋白的制備及對小白鼠免疫功能的影響[D].武漢工業學院，2008.6.

[2]徐丹，岳喜慶，張和平等.超濾法分離牛血清中IgG的研究[J].食品科技，2005（11）：32-34.

[3]裴曉言，顧名夏，黃鶴等.牛乳中的免疫球蛋白與健康的研究[J].現代生物醫學進展，2007，7（3）：418-421.

[4]GUTZWILLER A. Effect of colostrum intake on diarrhoea incidence in new-born calves [J].Schweiz Arch Tierheilkd，2002，144（2）：59-64.

[5]SUGISAWA H， ITOU T，SAKAI T. Promoting Effect of Colostrum on the Phagocytic Activity of Bovine Polylmorphonuclear Leukocytes in vitro[J].Biol Neonate，2001，79（2）：140-4.

[6]保健食品檢驗與評價技術規范[Z].中華人民共和國衛生部，2003.2：22-34.