食品檢測中酶聯免疫吸附試驗的應用

◎ 梁玉博

（信陽市食品安全監督所，河南 信陽 464000）

酶聯免疫吸附試驗是基于免疫酶特點的免疫測定方法，其在使用過程中具有敏感度高、方便快捷、準確度高等優良特點。在單克隆抗體技術發展過程中，免疫試劑盒測試技術逐漸呈現了商業化的特點。食品問題不僅與人體健康息息相關，而且對國計民生具有一定的影響，受到了政府及相關專業人士的極大關注。因此，酶聯免疫吸附試驗在食品檢測中的應用具有非常重要的意義。

1 酶聯免疫吸附試驗檢測流程

1.1 樣品預處理

酶聯免疫吸附試驗在檢測過程中，一般需要一定的樣品預處理。預處理可能會在不同程度上破壞食品的內部結構，為了避免過程分析物質提取出現問題，可采用100%的水、甲醇、丁醇混合物物質，按75∶25∶5的比例提取物質。在特殊情況下，也可以采用超臨界萃取技術利用液相甲醇改性過的二氧化碳，結合三元混合溶劑的應用，最大程度地降低酶聯免疫吸附試驗前期分析物質處理的損失。

1.2 抗原合成及抗體選擇

在小分子物質檢測過程中，由于其自身缺乏免疫抗原的特點，需要應用免疫原性載體蛋白。對于半抗原改性環節，可綜合考慮偶聯比、位點、偶聯劑等因素，選擇相應的偶聯載體蛋白結合位點，然后在相應催化劑的作用下合成完全抗體。而在抗體選擇環節可根據具體檢測項目，結合效價、穩定性、交叉反應等因素，確定相應的抗體偶合物。

1.3 酶聯免疫吸附試驗方法選擇

在食品安全檢測過程中，不同的檢測項目所需的檢測方法也有所區別，如直接競爭酶聯免疫法、間接競爭酶聯免疫檢測、抗原抗體復合物免疫法等。結合相應食品檢測物質濃度特點，可優先選擇靈敏度最高的檢測方面，便于提高整體檢測效率。

2 酶聯免疫吸附試驗在食品物質檢測中的應用

2.1 食品毒害物質檢測

酶聯免疫吸附試驗在食品毒害物質中具有良好的應用。酶聯免疫吸附試驗在食品毒害物質檢測中主要用于黃曲霉毒素、SPF雞的檢測，隨后又逐漸出現了河豚毒素、玉米烯酮等毒素的檢測標準[1]。在實際病毒害物質檢測過程中，酶聯免疫吸附試驗主要有直接法、競爭法、夾心法等，其中直接酶聯免疫吸附試驗具有簡單、便捷且檢測限度低的優點，在實際應用中較廣泛。如利用直接酶聯免疫吸附試驗可以對食品中致癌物質丙烯酰胺進行檢測，檢測限達到65.70 μg/kg，可達到優良的檢測靈敏度。

2.2 食品藥物殘留檢測

酶聯免疫吸附試驗在食品藥物殘留中的檢測主要針對農藥殘留，商品檢測試劑盒可對蔬菜、食品及其周邊環境中的農藥殘留進行有效檢測。目前，酶聯免疫吸附試驗針對殺菌劑、除草劑、殺蟲劑等常見藥物殘留具有良好的檢測效果。現階段常用的酶聯免疫吸附試驗主要是利用相應的免疫血清制作水、蔬菜、土壤等常見食品藥物殘留物質試劑盒，如利用兔抗氨芐西林鈉血清可進行乳制品中的氨芐西林鈉的檢測；用甲萘威免疫血清可利用酶聯免疫吸附試驗檢測甲萘威殘留。在具體的酶聯免疫吸附試驗食品藥物殘留檢測過程中，主要是通過簡單的前期試劑盒處理，進行批量食品樣品的檢測，通過相應抗體的酶聯免疫檢測試驗，可在檢測食品中的新霉素、慶大霉素、卡那霉素等殘留物質檢測，還可以將相應酶聯免疫吸附試驗檢測殘留的實施方法進行相關區域標準的制定，從而進一步提高區域內食品安全檢測的準確率，為區域內藥物殘留檢測限度的有效降低提供合理的依據。

2.3 食品過敏原檢測

在食品過敏反應中，酶聯免疫吸附試驗主要用于魚類食品的過敏檢測。在實際應用中，可采用夾心法酶聯免疫吸附試驗對魚類過敏原進行合理檢測，如將兔的抗鱈魚小清蛋白抗體多克隆產物作為捕獲劑，對多種魚類過敏原進行有效檢測[2]。使用兔的抗鱈魚小清蛋白回收率可達到68%以上，且最低檢測限度為0.01 mg/kg，對于食品中過敏魚蛋白的控制具有良好的效果。此外，酶聯免疫吸附試驗還可由于食品中芥末過敏原的檢測，其主要利用兔的多克隆抗芥末血清作為檢測試劑，在堿性磷酸酶的催化下，檢測回收率可達95%以上，為食品監管機構監管職權的有效實施提供了良好的保障。現階段，我國市場中對于食品中過敏原的檢測，主要采用酶聯免疫吸附試驗測試盒。

2.4 食品微生物檢測

微生物污染是現階段我國食品的主要安全威脅之一，常規的微生物學檢驗檢驗周期較長且整體環節較復雜，對于整體食品微生物的有效檢測造成了不利的影響，而通過酶聯免疫吸附試驗微生物檢測可以通過單克隆抗體的制備，有效檢測食品中的大腸桿菌、沙門氏菌、鐮刀菌等有害微生物。現階段，直接酶聯免疫吸附試驗針對沙門氏菌等微生物的最低檢測限度可達到500 CFU/g，且整體檢測時間可在22.0 h以內。此外，在社會發展過程中轉基因食品也成為我國食品安全的主要威脅因素，酶聯免疫吸附試驗可對轉基因食品中的CP4的蛋白質進行快速檢測，而酶聯免疫吸附試驗試劑盒的推出，進一步推動了轉基因酶聯免疫檢測工作的進程。

3 結語

以往的食品檢測方法具有工序繁瑣、檢測時間長的弊端，并無法在大批量食品檢測中發揮良好的效益。而酶聯免疫吸附試驗通過相關免疫試劑盒的應用，具有簡單、快捷、準確的優點。現階段經濟發達地區已加大了先進檢測技術的應用，且進行了綠色貿易壁壘的設置，對于我國檢測基礎造成了一定的沖擊。因此，我國應結合現階段發展情況，加大高靈敏度食品檢測技術的研制，結合藥物殘留等衛生指標的細化制定，為我國食品行業的穩定發展提供保障。

[1]徐 鎮 酶聯免疫吸附技術在食品檢測領域中的應用進展[J].食品安全導刊，2017（27）：122.

[2]秦蕾影，陳 昊，項水蘭，等.酶聯免疫吸附技術在食品安全檢測中的應用研究[J].農業科技與信息，2016（32）：41-42.