宮頸癌組織lncRNA MALAT1表達變化及其與預后的關系

孫敏，孫屏，虞蔚，劉建文，王麗佳

(1無錫市第三人民醫院，江蘇無錫214000；2無錫市第二人民醫院；3無錫市婦幼保健院)

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌[1]。隨著技術的進展，宮頸癌治療方法從外科手術為主逐漸轉變為多種傳統及新輔助治療相結合的方法[2]。但宮頸癌復發率較高，病死率下降并不明顯[3]。因此，進一步了解宮頸癌的發生、進展機制有助于改善宮頸癌患者預后。有研究表明，與表觀遺傳學表達相關的分子可能在宮頸癌的進展中具有重要作用[4]。長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類重要的表觀遺傳學表達相關分子。lncRNA已被證實能夠通過干擾轉錄因子與啟動子的結合、干擾沉默基因、干擾臨近基因表達、參與染色體修飾等作用，廣泛參與細胞周期調控、胚胎干細胞分化、機體生長發育等多種生理進程[5]。已有多種lncRNA被證實與癌癥的發生、發展密切相關[6,7]。肺癌轉移相關轉錄本1(MALAT1)是最早被發現的lncRNA之一。本研究觀察了宮頸癌組織MALAT1表達變化，并分析其與患者臨床病理參數及預后的關系?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取無錫市第三人民醫院2012年1月～2016年12月收治的宮頸癌患者。納入標準：①經病理科確診為原發性宮頸癌；②病例資料、組織標本保存完整；③患者術前未經放、化療等其他抗腫瘤治療；④患者未合并其他惡性腫瘤；⑤患者未合并其他影響生物指標檢測的嚴重疾病。共納入患者83例，年齡≤55歲46例、>55歲37例；鱗癌71例、腺癌12例；組織分化程度為高分化22例、中分化42例、低分化19例；腫瘤分期為Ⅰ期35例、Ⅱ期39例、Ⅲ期8例、Ⅳ期1例；有淋巴結轉移14例、無淋巴結轉移69例。所有患者經宮頸細胞涂片檢查，均為高危型HPV陽性。獲得患者的存檔標本83例份。標本為于筋膜外全子宮切除術、次廣泛全子宮切除術及廣泛性全子宮切除術中切取的宮頸癌組織及距腫瘤組織邊緣大于5 cm的癌旁正常組織。本研究經無錫市第三人民醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 MALAT1表達檢測 采用實時熒光定量PCR法。將保存的標本取出，PBS沖洗3次，按照RNAisoTMPlus Tatol RNA提取試劑盒(購自日本TaKaRa公司)說明提取總RNA。用紫外分光光度計檢測總RNA純度，取OD260/OD280在1.8～2.0的樣本。按PrimeScriptTM反轉錄試劑盒(購自上海名勁生物科技有限公司)使用說明將總RNA逆轉錄為cDNA。以GAPDH為內參。MALAT1上游引物序列為5′-GGTAACGATGGTGTCGAGGTC-3′，下游引物序列為5′-CCAGCATTACAGTTCTTGAACATG-3′；GAPDH上游引物序列為5′-ACAGTCAGCCGCATCTTCTT-3′，下游引物序列為5′-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3′。每個樣本設3個復孔，反應體系共20 μL。反應條件為95 ℃預變性10 min，95 ℃變性1 min，再經60 ℃退火及延伸45 s，以上循環40次。以2-ΔΔCt法計算MALAT1相對表達量。

1.3 預后觀察 以患者術后出院為觀察起始，結合患者復診病歷，利用電話對患者或其家屬進行隨訪。隨訪截至2017年12月。記錄患者生存時間并計算生存率。

2 結果

2.1 宮頸癌組織及癌旁正常組織MALAT1表達比較 宮頸癌組織及癌旁正常組織MALAT1相對表達量分別為0.413±0.305、0.201±0.192，宮頸癌組織MALAT1相對表達量高于癌旁正常組織(P<0.05)。

2.2 MALAT1表達與宮頸癌患者臨床病理參數的關系 Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期宮頸癌患者腫瘤組織MALAT1相對表達量依次升高，有淋巴結轉移者MALAT1相對表達量高于無淋巴結轉移者(P均<0.05)。MALAT1表達與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型、組織分化程度無關(P均>0.05)。詳見表1。

2.3 宮頸癌組織MALAT1表達與患者預后的關系 隨訪時間12～63個月，中位隨訪時間32個月。以宮頸癌組織中MALAT1相對表達量均數為界，將宮頸癌患者分為MALAT1低表達組(50例)與MALAT1高表達組(33例)。MALAT1低表達組生存率為88.00%(44/50)、生存時間為(56.9±2.3)個月，MALAT1高表達組分別為66.67%(22/33)、(46.5±3.8)個月。與MALAT1低表達組相比，MALAT1高表達組生存率更低、生存時間更短(P均<0.05)。詳見圖1。

3 討論

全球每年近50萬新發宮頸癌病例中，超過80%發生在未普及宮頸癌篩查的發展中國家。我國

表1 MALAT1表達與宮頸癌患者臨床病理參數的關系

注：與腫瘤分期Ⅰ期者相比，*P<0.05；與腫瘤分期Ⅱ期者相比，#P<0.05；與無淋巴結轉移者相比，△P<0.05。

圖1 MALAT1低表達組與MALAT1高表達組Kaplan-Meier生存曲線

每年新發宮頸癌患者約13萬例，發病率已高居世界第二位[8]。目前我國宮頸癌防治工作仍以機會性篩查為主，普通群眾對篩查的參與度仍然不足[9]，且我國公共衛生相關基礎建設與發達國家相比差距明顯，因此衛生經濟學相關的問題日益受到重視[10]。對于接受治療的宮頸癌患者選取合適的預后指標進行監測，有助于合理分配醫療資源，最大限度提高患者生存率，延長術后生存時間。

lncRNA是一類長度超過200個核苷酸的非蛋白質編碼RNA。不同于傳統的基因轉錄“噪音假說”，lncRNA雖不直接參與編碼蛋白質，但在機體正常生理活動(包括轉錄前與轉錄后調控、細胞周期調控、表觀遺傳學修飾及免疫應答)中起重要作用[11]，而且與腫瘤的發生、發展密切相關[12]。MALAT1定位于染色體11q13.1，全長6.7 kb，由Ji等[13]于觀察非小細胞肺癌轉移現象時發現并命名。一項研究[14]通過檢測正常組織與惡性腫瘤組織中的多種lncRNA發現，MALAT1在原發于食管、膽囊、腦、骨髓、軟骨、卵巢等17種不同部位的惡性腫瘤組織中高表達。本研究結果顯示，宮頸癌組織MALAT1表達增高，與MALAT1在其他惡性腫瘤組織中的表達趨勢一致，提示MALAT1的異常表達可能與宮頸癌的發病密切相關。

Guo等[15]于體外實驗中利用短發夾RNA抑制人宮頸癌CaSki細胞中MALAT1表達，發現MALAT1可通過調控Caspase-3、Caspase-8、Bax、Bcl-2、Bcl-xL等基因相關信號通路，促進宮頸癌細胞增殖、加速細胞周期進程，增強細胞侵襲力。Liu等[16]發現，敲除MALAT1基因的宮頸癌HeLa與SiHa細胞出現增殖減慢、侵襲抑制、凋亡增加等效應。本研究發現，MALAT1表達與宮頸癌腫瘤分期、淋巴結轉移有關，提示MALAT1能夠促進宮頸癌的增殖與侵襲等惡性進展。

研究顯示，臨床分期、病理類型、淋巴結轉移、治療方式等為宮頸癌患者的重要預后因素[17,18]。本研究隨訪結果顯示，與MALAT1低表達組相比，MALAT1高表達組生存率更低、生存時間更短，這從臨床結局方面印證了MALAT1可促進宮頸癌細胞增殖與侵襲。已有研究表明，MALAT1表達較高的多發性骨髓瘤[19]、膀胱癌[20]、神經膠質瘤[21]等惡性腫瘤患者預后均較差。本研究結果與上述報道基本一致。因此，對于MALAT1表達較高的患者，需要加強術后監護，合理應用輔助抗腫瘤技術，以提高患者術后生存率，延長術后生存時間。

綜上所述，MALAT1在宮頸癌組織中異常高表達，且與宮頸癌的發生、發展相關。MALAT1低表達患者預后優于MALAT1高表達患者，因此MALAT1有望成為評估宮頸癌患者預后的新指標。