鱉甲抗肝纖維化研究進展

張 曄，呂金朋，孫佳明，張 輝

（長春中醫藥大學，長春 130117）

肝纖維化主要是因細胞外基質（ECM）的合成與降解失衡，從而在肝內大量沉積所致[1]。現治療肝纖維化的藥物秋水仙堿、干擾素-γ（IFN-γ）等[2]，雖有療效但同時存在一定的不良反應。鱉甲來源于鱉科動物鱉（Trionyx sinensis Wiegmann）的背甲，具有滋陰潛陽、退熱除蒸、軟堅散結的功效[3]。現代藥理學研究表明，鱉甲能夠改善肝纖維化，且治療效果穩定、安全，適合患者長期服用。本文對鱉甲治療肝纖維化的物質基礎、作用機制的研究現狀綜述如下。

1 鱉甲抗肝纖維化物質基礎

鱉甲作為傳統動物藥，主要含有寡肽、氨基酸、多糖、微量元素等物質[4]。近代通過國內大量科研人員不斷的探索研究，逐漸明晰了其治療肝纖維化的物質基礎。高建榮等[5]對鱉甲治療肝纖維化的活性成分進行篩選，結果表明，鱉甲中分子量＜6 000的蛋白和肽類物質能夠抑制肝星狀細胞-T6（HSC-T6）的增殖。胡春玲等[6]以鱉甲中改善肝纖維化的小分子肽（NPNPT，m/z542.16）作先導化合物，進行Fmac固相合成，同時檢測合成肽對HSC凋亡的影響情況。結果表明，合成肽能夠顯著地促進HSC的凋亡。唐尹萍等[7]利用MTT比色法分別測定葡萄糖凝膠G-25、G-15分離的8個活性肽段對大鼠HSC-T6的增殖作用。結果表明，Bj66、Bj67肽段具有明顯的抑制作用。因此，鱉甲小分子肽類化合物可能是其發揮抗肝纖維化作用的藥效物質基礎，進一步開發研究可作為新型的中藥單體在臨床上使用。

2 鱉甲抗肝纖維化作用機制的研究

2.1 抑制炎癥反應 多年的臨床研究證實，肝損傷患者多數存在炎癥反應，而肝纖維化的產生，一定會經過慢性肝損傷的過程。因此，鱉甲治療肝纖維化的機制很可能與其對炎癥因子的調節有關。楊瑩[8]研究發現，鱉甲寡肽I-C-f-6能夠上調炎性抑制因子IL-4、IL-10的表達，抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-a）的合成，下調核轉錄因子Kappa B（NF-κB）的表達，從而提高機體的抗炎能力。文彬等[9]研究鱉甲煎丸可能通過降低模型大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）水平，下調肝臟瘦素（LP）及其受體的表達，從而減輕炎癥及纖維化程度。孫海濤等[10]研究鱉甲煎丸能夠抑制HSC中NF-κB信號通路的激活，降低TNF-a基因表達，從而提高機體的抗炎能力，使機體纖維化程度得以改善。

2.2 轉化生長因子（TGF）信號轉導途徑的阻斷 目前認為，機體肝臟纖維化的形成與發展一般是利用TGF-β/Smad信號通路完成的[11]。因此，若想改善肝纖維化的進程，可以通過阻斷TGF-β/Smad信號轉導途徑的方法來完成。高建蓉等[12]研究發現，鱉甲水煎液可以抑制HSC的增殖，通過調節TGF-β1下游信號通路，使Smad3、P-smad3等因子的表達受到抑制，從而減少ECM的合成，達到治療肝纖維化的效果。孫玉鳳等[13]研究發現，鱉甲煎丸能夠改善40%CCl4橄欖油溶液制備的大鼠肝纖維化模型，分析其治療機制可能是通過抑制TGF-β1/Smad信號通路，下調肌動蛋白α（α-SMA）、TGF-β1與Smad3基因的表達來完成的。

2.3 促進HSC凋亡 大量研究表明肝纖維化早期就可出現HSC的大量增殖，繼而加重疾病進展，而鱉甲可以通過誘導HSC凋亡進而減輕或治療肝纖維化。樊爾艷等[14]研究結果表明，鱉甲能夠誘導HSC的凋亡，首先使HSC-T6發生G1期停滯，然后通過上調促凋亡蛋白Bax的表達，達到治療作用。胡春玲等[6]研究鱉甲合成肽可抑制HSC增殖，促進HSC凋亡。因此，鱉甲合成肽有可能作為HSC凋亡的促進劑，有助于臨床上治療、延緩肝功能損傷，但是有關鱉甲能夠使HSC凋亡的分子機制，有待于進一步的研究。

2.4 抗氧化損傷 氧自由基可以引起生物膜系統損傷，同時能夠氧化細胞蛋白質DNA，從而損害肝臟組織。王咪娜等[15]研究結果表明，鱉甲小分子肽I-C-F-6能夠降低大鼠肝組織中丙二醛（MDA）的含量，增強超氧化物歧化酶（SOD）的活性，從而降低大鼠體內氧自由基的含量，修復肝損傷。楊瑩[8]發現鱉甲寡肽能通過增加 SOD的含量，以及降低大鼠血清和肝組織中 MDA的含量， 進而改善肝臟脂肪變性，減少肝纖維組織增生，從而對 CCl4制備的大鼠肝損傷模型起到修復作用，分析其治病機制可能是通過調節MDA和SOD之間的平衡來達到。

2.5 抑制HSC的活化、增殖 正常情況下HSC處于靜止狀態，但當肝臟受到損傷時，HSC轉變為激活型，從而分泌ECM參與肝纖維化的形成[16]。因此，可通過抑制HSC的活化、增殖來減輕或者逆轉肝纖維化。屠鈺等[17]研究結果表明，鱉甲煎丸能夠改善纖維化的進程，通過抑制血小板源性生長因子（PDGF）誘導的HSC的遷移、增殖。付珍珠等[18]進一步研究發現，鱉甲煎丸水提物可以下調PDGF基因及蛋白的表達，減少TGF-β1的合成，從而抑制HSC的活化，達到治療作用。趙海軍[19]測定復方鱉甲軟肝片對SEC培養基培養的大鼠HSC活化、增殖的影響，結果表明，低、中和高劑量組均有抑制作用。

2.6 調控細胞外基質的產生和降解 肝纖維化形成的主要原因是ECM過度沉積，大量研究表明，中藥鱉甲能夠通過調節ECM的生成與降解，使肝纖維化的進程得到抑制。熊莎等[20]研究鱉甲中分子量＜6 kD 肽段可通過抑制肝纖維化細胞α-SMA、I型膠原蛋白（Col I）的表達，減少ECM產生，從而改善肝纖維化。李風華[21]研究表明，復方鱉甲軟肝片能夠下調基質金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）的表達，增強基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）的活性，從而促進多種MMPs的生成，達到降解ECM的作用。另一項實驗研究表明[22]，鱉甲可以下調HSC 中TIMP-1的表達，上調MMP-1的表達，改善膠原酶活性，從而促進ECM的降解。

3 展望

綜上所述，鱉甲主要通過抑制炎癥反應、阻斷轉化生長因子信號轉導途徑、促進HSC凋亡、抗氧化損傷、抑制HSC的活化增殖、調控細胞外基質的產生和降解發揮抗肝纖維化的作用。目前，在鱉甲治療肝纖維化方面的研究取得很大進展，而且臨床上復方鱉甲的治療效果也比較安全穩定，但是研究開發中藥鱉甲仍處于初級階段，真正能夠用于臨床的成藥也很少。因此，對于鱉甲抗肝纖維化的研究還存在很大的發展空間，其中的一些時效和量效關系不是很明確，有必要對其進行深入的研究，為臨床運用鱉甲提供更加有利的理論依據。

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